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万見
- EMDB-38389: Cryo-EM structure of sheep VMAT2 dimer in an atypical fold -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-38389
タイトルCryo-EM structure of sheep VMAT2 dimer in an atypical fold
マップデータOaVMAT2 TM8/9 replaced by BRIL.
試料
  • 複合体: OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL
    • タンパク質・ペプチド: OaVMAT2-BRIL
キーワードVesicular monoamine transporter / SLC18A2 / MFS / Apo / Conformation / TRANSPORT PROTEIN
生物種Ovis aries (ヒツジ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å
データ登録者Lyu Y / Fu C / Ma H / Sun Z / Su Z / Zhou X
資金援助 中国, 1件
OrganizationGrant number国
National Natural Science Foundation of China (NSFC)31770783 中国
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2024
タイトル: Engineering of a mammalian VMAT2 for cryo-EM analysis results in non-canonical protein folding.
著者: Ying Lyu / Chunting Fu / Haiyun Ma / Zhaoming Su / Ziyi Sun / Xiaoming Zhou /
要旨: Vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) belongs to the major facilitator superfamily (MFS), and mediates cytoplasmic monoamine packaging into presynaptic vesicles. Here, we present two cryo-EM ...Vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) belongs to the major facilitator superfamily (MFS), and mediates cytoplasmic monoamine packaging into presynaptic vesicles. Here, we present two cryo-EM structures of VMAT2, with a frog VMAT2 adopting a canonical MFS fold and an engineered sheep VMAT2 adopting a non-canonical fold. Both VMAT2 proteins mediate uptake of a selective fluorescent VMAT2 substrate into cells. Molecular docking, substrate binding and transport analysis reveal potential substrate binding mechanism in VMAT2. Meanwhile, caution is advised when interpreting engineered membrane protein structures.
履歴
登録2023年12月20日-
ヘッダ(付随情報) 公開2024年8月14日-
マップ公開2024年8月14日-
更新2024年8月14日-
現状2024年8月14日処理サイト: PDBj / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_38389.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_38389.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈OaVMAT2 TM8/9 replaced by BRIL.
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.85 Å/pix.
x 256 pix.
= 217.6 Å		0.85 Å/pix.
x 256 pix.
= 217.6 Å		0.85 Å/pix.
x 256 pix.
= 217.6 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.85 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.15
最小 - 最大-0.53700006 - 0.9610242
平均 (標準偏差)0.0017556006 (±0.024670253)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ256256256
Spacing256256256
セルA=B=C: 217.6 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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ハーフマップ: Half map B.

ファイルemd_38389_half_map_1.map
注釈Half map B.
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: Half map A.

ファイルemd_38389_half_map_2.map
注釈Half map A.
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL

全体名称: OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL
要素
  • 複合体: OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL
    • タンパク質・ペプチド: OaVMAT2-BRIL

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超分子 #1: OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL

超分子名称: OaVMAT2 TM8/9 loop replaced by BRIL / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
由来(天然)生物種: Ovis aries (ヒツジ)

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分子 #1: OaVMAT2-BRIL

分子名称: OaVMAT2-BRIL / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Ovis aries (ヒツジ)
分子量理論値: 68.592688 KDa
組換発現生物種: Komagataella pastoris (菌類)
配列文字列: MALSELALLR RLQESRHSRK LVLFIVFLAL LLDNMLLTVV VPIIPSYLYS IEHEKDALEI QTAKPGLTAS APGSFQNIFS YYDNSTMVT GNNTDHLQGP LVHEATTQRM VTNSSSAPSD CPSEDKDLLN ENVQVGLLFA SKATVQLLTN PFIGLLTNRI G YPIPMFTG ...文字列:
MALSELALLR RLQESRHSRK LVLFIVFLAL LLDNMLLTVV VPIIPSYLYS IEHEKDALEI QTAKPGLTAS APGSFQNIFS YYDNSTMVT GNNTDHLQGP LVHEATTQRM VTNSSSAPSD CPSEDKDLLN ENVQVGLLFA SKATVQLLTN PFIGLLTNRI G YPIPMFTG FCIMFISTVM FAFSRSYAFL LFARSLQGIG SSCSSVAGMG MLASVYTDDE ERGNAMGIAL GGLAMGVLVG PP FGSVLYE FVGKTAPFLV LAALVLLDGA IQLFVLQPSR VQPESQKGTP LTTLLRDPYI LIAAGSICFA NMGIAMLEPA LPI WMMETM CSHKWQLGVA FLPASISYLI GTNVFGILAR RQLADLEDNW ETLNDNLKVI EKADNAAQVK DALTKMRAAA LDAQ KATPP KLEDKSPDSP EMKDFRHGFD ILVGQIDDAL KLANEGKVKE AQAAAEQLKT TRNAYIQKYL ERARSTLRWL CALLG MIIV GMSILCIPLA KNIYGLIAPN FGVGFAIGMV DSSMMPIMGY LVDLRHVSVY GSVYAIADVA FCMGYAIGPS AGGAIA KAI GFPWLMTIIG IIDILFAPLC FFLRSPPAKE EKMAILMDHN CPIKTKMYTQ NSSQSHPIGE DEDSESD

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度8.0 mg/mL
緩衝液pH: 7.4 / 詳細: 150 mm NaCl, 20 mM HEPES-Na pH 7.4, 0.4 mM DDM
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 3 s before plunging.
詳細This sample was monodisperse.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: COUNTING / 平均電子線量: 62.64 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 1.6 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 1064611
初期モデルモデルのタイプ: OTHER / 詳細: AlphaFold-predicted OaVMAT2 model
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C2 (2回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.3) / 使用した粒子像数: 304899
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 4.0)
最終 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 4.0)
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルChain - Source name: AlphaFold / Chain - Initial model type: in silico model
得られたモデル

PDB-8xit:
Cryo-EM structure of sheep VMAT2 dimer in an atypical fold

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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