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- EMDB-11721: Structure of the Lifeact-F-actin complex -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-11721
タイトルStructure of the Lifeact-F-actin complex
マップデータ
試料
  • 複合体: Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct
    • 複合体: LifeAct
      • タンパク質・ペプチド: Lifeact
    • 複合体: Actin
      • タンパク質・ペプチド: Actin, alpha skeletal muscle
    • 複合体: Phalloidin
      • タンパク質・ペプチド: Phalloidin
  • リガンド: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: PHOSPHATE ION
機能・相同性
機能・相同性情報


tRNAThr (cytosine32-N3)-methyltransferase / tRNA (cytidine-3-)-methyltransferase activity / tRNA methylation / mating projection tip / cytoskeletal motor activator activity / tropomyosin binding / myosin heavy chain binding / mesenchyme migration / troponin I binding / filamentous actin ...tRNAThr (cytosine32-N3)-methyltransferase / tRNA (cytidine-3-)-methyltransferase activity / tRNA methylation / mating projection tip / cytoskeletal motor activator activity / tropomyosin binding / myosin heavy chain binding / mesenchyme migration / troponin I binding / filamentous actin / actin filament bundle / skeletal muscle thin filament assembly / actin filament bundle assembly / striated muscle thin filament / skeletal muscle myofibril / actin monomer binding / skeletal muscle fiber development / stress fiber / titin binding / actin filament polymerization / filopodium / actin filament / 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与 / calcium-dependent protein binding / actin filament binding / lamellipodium / protein-macromolecule adaptor activity / cell body / hydrolase activity / viral translational frameshifting / protein domain specific binding / calcium ion binding / positive regulation of gene expression / magnesium ion binding / ATP binding / identical protein binding / cytoplasm
類似検索 - 分子機能
tRNA N(3)-methylcytidine methyltransferase METTL2/6/8-like / Methyltransferase type 12 / Methyltransferase domain / Actins signature 1. / Actin, conserved site / Actins signature 2. / Actin/actin-like conserved site / Actins and actin-related proteins signature. / Actin / Actin family ...tRNA N(3)-methylcytidine methyltransferase METTL2/6/8-like / Methyltransferase type 12 / Methyltransferase domain / Actins signature 1. / Actin, conserved site / Actins signature 2. / Actin/actin-like conserved site / Actins and actin-related proteins signature. / Actin / Actin family / Actin / ATPase, nucleotide binding domain / S-adenosyl-L-methionine-dependent methyltransferase superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Actin, alpha skeletal muscle / tRNA(Thr) (cytosine(32)-N(3))-methyltransferase
類似検索 - 構成要素
生物種Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / synthetic construct (人工物) / Rabbit (ウサギ)
手法らせん対称体再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.5 Å
データ登録者Belyy A / Merino F / Sitsel O / Raunser S
引用ジャーナル: PLoS Biol / 年: 2020
タイトル: Structure of the Lifeact-F-actin complex.
著者: Alexander Belyy / Felipe Merino / Oleg Sitsel / Stefan Raunser /
要旨: Lifeact is a short actin-binding peptide that is used to visualize filamentous actin (F-actin) structures in live eukaryotic cells using fluorescence microscopy. However, this popular probe has been ...Lifeact is a short actin-binding peptide that is used to visualize filamentous actin (F-actin) structures in live eukaryotic cells using fluorescence microscopy. However, this popular probe has been shown to alter cellular morphology by affecting the structure of the cytoskeleton. The molecular basis for such artefacts is poorly understood. Here, we determined the high-resolution structure of the Lifeact-F-actin complex using electron cryo-microscopy (cryo-EM). The structure reveals that Lifeact interacts with a hydrophobic binding pocket on F-actin and stretches over 2 adjacent actin subunits, stabilizing the DNase I-binding loop (D-loop) of actin in the closed conformation. Interestingly, the hydrophobic binding site is also used by actin-binding proteins, such as cofilin and myosin and actin-binding toxins, such as the hypervariable region of TccC3 (TccC3HVR) from Photorhabdus luminescens and ExoY from Pseudomonas aeruginosa. In vitro binding assays and activity measurements demonstrate that Lifeact indeed competes with these proteins, providing an explanation for the altering effects of Lifeact on cell morphology in vivo. Finally, we demonstrate that the affinity of Lifeact to F-actin can be increased by introducing mutations into the peptide, laying the foundation for designing improved actin probes for live cell imaging.
履歴
登録2020年9月14日-
ヘッダ(付随情報) 公開2020年10月28日-
マップ公開2020年10月28日-
更新2020年12月2日-
現状2020年12月2日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.06
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.06
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-7ad9
  • 表面レベル: 0.06
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 単純化した表面モデル + あてはめた原子モデル
  • 原子モデルPDB-7ad9
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_11721.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_11721.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.21 Å/pix.
x 300 pix.
= 363. Å		1.21 Å/pix.
x 300 pix.
= 363. Å		1.21 Å/pix.
x 300 pix.
= 363. Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.21 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.06 / ムービー #1: 0.06
最小 - 最大-0.15678103 - 0.28605673
平均 (標準偏差)0.0015207349 (±0.009130586)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ300300300
Spacing300300300
セルA=B=C: 363.0 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.211.211.21
M x/y/z300300300
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z363.000363.000363.000
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS300300300
D min/max/mean-0.1570.2860.002

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_11721_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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追加マップ: Map filtered according to local resolution

ファイルemd_11721_additional_1.map
注釈Map filtered according to local resolution
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_11721_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_11721_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct

全体名称: Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct
要素
  • 複合体: Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct
    • 複合体: LifeAct
      • タンパク質・ペプチド: Lifeact
    • 複合体: Actin
      • タンパク質・ペプチド: Actin, alpha skeletal muscle
    • 複合体: Phalloidin
      • タンパク質・ペプチド: Phalloidin
  • リガンド: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: PHOSPHATE ION

+
超分子 #1: Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct

超分子名称: Complex between skeletal Actin from rabbit, Phalloidin and LifeAct
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
分子量理論値: 163 kDa/nm

+
超分子 #2: LifeAct

超分子名称: LifeAct / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
組換発現生物種: synthetic construct (人工物)

+
超分子 #3: Actin

超分子名称: Actin / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2
由来(天然)生物種: Oryctolagus cuniculus (ウサギ)

+
超分子 #4: Phalloidin

超分子名称: Phalloidin / タイプ: complex / ID: 4 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #3
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
組換発現生物種: synthetic construct (人工物)

+
分子 #1: Lifeact

分子名称: Lifeact / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1
詳細: Lifeact. Actin-binding peptide derived from the yeast protein ABP140
コピー数: 5 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
分子量理論値: 1.927243 KDa
配列文字列:
MGVADLIKKF ESISKEE

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分子 #2: Actin, alpha skeletal muscle

分子名称: Actin, alpha skeletal muscle / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 詳細: Alpha-actin from rabbit skeletal muscle / コピー数: 5 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Rabbit (ウサギ)
分子量理論値: 42.109973 KDa
配列文字列: MCDEDETTAL VCDNGSGLVK AGFAGDDAPR AVFPSIVGRP RHQGVMVGMG QKDSYVGDEA QSKRGILTLK YPIE(HIC)G IIT NWDDMEKIWH HTFYNELRVA PEEHPTLLTE APLNPKANRE KMTQIMFETF NVPAMYVAIQ AVLSLYASGR TTGIVLD SG ...文字列:
MCDEDETTAL VCDNGSGLVK AGFAGDDAPR AVFPSIVGRP RHQGVMVGMG QKDSYVGDEA QSKRGILTLK YPIE(HIC)G IIT NWDDMEKIWH HTFYNELRVA PEEHPTLLTE APLNPKANRE KMTQIMFETF NVPAMYVAIQ AVLSLYASGR TTGIVLD SG DGVTHNVPIY EGYALPHAIM RLDLAGRDLT DYLMKILTER GYSFVTTAER EIVRDIKEKL CYVALDFENE MATAASSS S LEKSYELPDG QVITIGNERF RCPETLFQPS FIGMESAGIH ETTYNSIMKC DIDIRKDLYA NNVMSGGTTM YPGIADRMQ KEITALAPST MKIKIIAPPE RKYSVWIGGS ILASLSTFQQ MWITKQEYDE AGPSIVHRKC F

+
分子 #3: Phalloidin

分子名称: Phalloidin / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 5 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 808.899 Da
配列文字列:
(HYP)AW(EEP)A(DTH)C

+
分子 #4: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE

分子名称: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 5 / 式: ADP
分子量理論値: 427.201 Da
Chemical component information

ChemComp-ADP:
ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / ADP / ADP, エネルギー貯蔵分子*YM

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分子 #5: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 5 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

+
分子 #6: PHOSPHATE ION

分子名称: PHOSPHATE ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 5 / 式: PO4
分子量理論値: 94.971 Da
Chemical component information

ChemComp-PO4:
PHOSPHATE ION / ホスファ-ト

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析らせん対称体再構成法
試料の集合状態filament

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試料調製

緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度式名称
100.0 mMKClPotassion Chloride
2.0 mMMgCl2Magnesium Chloride
20.0 mMTris
1.0 mMDTT
0.02 % w/vTween-20

詳細: 120 mM KCl, 20 mM Tris pH 8, 2 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 0.02% w/v Tween-20
グリッドモデル: Quantifoil R2/1 / 材質: COPPER / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 286 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TALOS ARCTICA
撮影フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k)
検出モード: INTEGRATING / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 915 / 平均露光時間: 3.0 sec. / 平均電子線量: 60.0 e/Å2
電子線加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD
試料ステージホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company

+
画像解析

最終 再構成使用したクラス数: 1
想定した対称性 - らせんパラメータ - Δz: 27.3 Å
想定した対称性 - らせんパラメータ - ΔΦ: -167.18 °
想定した対称性 - らせんパラメータ - 軸対称性: C1 (非対称)
アルゴリズム: BACK PROJECTION / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: SPHIRE / 使用した粒子像数: 223480
CTF補正ソフトウェア - 名称: CTFFIND
Segment selection選択した数: 246423
初期モデルモデルのタイプ: PDB ENTRY
PDBモデル - PDB ID:

6fhl

最終 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE / ソフトウェア - 名称: SPHIRE

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

6fhl


Chain - Chain ID: C
得られたモデル

PDB-7ad9:
Structure of the Lifeact-F-actin complex

+
万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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