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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-29025 | |||||||||
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タイトル | Structure of Mce1 transporter from Mycobacterium smegmatis (Map0) | |||||||||
マップデータ | Composite density map (Map0) for consensus set of particles. Map was generated by in PHENIX by using the raw map (boxsize 640 px) and combining Map0a,0b,0c,0d (boxsize 360 px). | |||||||||
試料 |
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キーワード | Membrane protein complex / ABC transporter / Virulence factor / Lipid transport / MEMBRANE PROTEIN | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 phospholipid transporter activity / ATP-binding cassette (ABC) transporter complex / bioluminescence / generation of precursor metabolites and energy / ATP hydrolysis activity / extracellular region / ATP binding / membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Mycolicibacterium smegmatis MC2 155 (バクテリア) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.71 Å | |||||||||
データ登録者 | Chen J / Bhabha G / Ekiert DC | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2023 タイトル: Structure of an endogenous mycobacterial MCE lipid transporter. 著者: James Chen / Alice Fruhauf / Catherine Fan / Jackeline Ponce / Beatrix Ueberheide / Gira Bhabha / Damian C Ekiert / 要旨: To replicate inside macrophages and cause tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis must scavenge a variety of nutrients from the host. The mammalian cell entry (MCE) proteins are important virulence ...To replicate inside macrophages and cause tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis must scavenge a variety of nutrients from the host. The mammalian cell entry (MCE) proteins are important virulence factors in M. tuberculosis, where they are encoded by large gene clusters and have been implicated in the transport of fatty acids and cholesterol across the impermeable mycobacterial cell envelope. Very little is known about how cargos are transported across this barrier, and it remains unclear how the approximately ten proteins encoded by a mycobacterial mce gene cluster assemble to transport cargo across the cell envelope. Here we report the cryo-electron microscopy (cryo-EM) structure of the endogenous Mce1 lipid-import machine of Mycobacterium smegmatis-a non-pathogenic relative of M. tuberculosis. The structure reveals how the proteins of the Mce1 system assemble to form an elongated ABC transporter complex that is long enough to span the cell envelope. The Mce1 complex is dominated by a curved, needle-like domain that appears to be unrelated to previously described protein structures, and creates a protected hydrophobic pathway for lipid transport across the periplasm. Our structural data revealed the presence of a subunit of the Mce1 complex, which we identified using a combination of cryo-EM and AlphaFold2, and name LucB. Our data lead to a structural model for Mce1-mediated lipid import across the mycobacterial cell envelope. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_29025.map.gz | 900.7 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-29025-v30.xml emd-29025.xml | 64.9 KB 64.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_29025_fsc.xml | 21.1 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_29025.png | 46.7 KB | ||
Filedesc metadata | emd-29025.cif.gz | 10.6 KB | ||
その他 | emd_29025_additional_1.map.gz emd_29025_additional_10.map.gz emd_29025_additional_11.map.gz emd_29025_additional_12.map.gz emd_29025_additional_13.map.gz emd_29025_additional_14.map.gz emd_29025_additional_15.map.gz emd_29025_additional_2.map.gz emd_29025_additional_3.map.gz emd_29025_additional_4.map.gz emd_29025_additional_5.map.gz emd_29025_additional_6.map.gz emd_29025_additional_7.map.gz emd_29025_additional_8.map.gz emd_29025_additional_9.map.gz emd_29025_half_map_1.map.gz emd_29025_half_map_2.map.gz | 168 MB 168 MB 165 MB 165 MB 168 MB 929.3 MB 929.3 MB 945.3 MB 165.1 MB 165.1 MB 164.9 MB 164.9 MB 168 MB 165 MB 165 MB 926.7 MB 926.7 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-29025 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-29025 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_29025_validation.pdf.gz | 1.1 MB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_29025_full_validation.pdf.gz | 1.1 MB | 表示 | |
XML形式データ | emd_29025_validation.xml.gz | 31.5 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_29025_validation.cif.gz | 42.3 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-29025 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-29025 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8fefMC 8fedC 8feeC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このマップから作成された原子モデル |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_29025.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 1000 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Composite density map (Map0) for consensus set of particles. Map was generated by in PHENIX by using the raw map (boxsize 640 px) and combining Map0a,0b,0c,0d (boxsize 360 px). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.8255 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
+追加マップ: Constituent Map0a used to in composite Map0. Map...
+追加マップ: Constituent Map0c used to in composite Map0. Map...
+追加マップ: Half map A for Map0d
+追加マップ: Half map B for Map0d
+追加マップ: Constituent Map0d used to in composite Map0. Map...
+追加マップ: Half map A for raw map used as...
+追加マップ: Half map B for raw map used as...
+追加マップ: Raw map used as template to generate composite...
+追加マップ: Half map A for Map0a
+追加マップ: Half map B for Map0a
+追加マップ: Half map A for Map0b
+追加マップ: Half map B for Map0b
+追加マップ: Constituent Map0b used to in composite Map0. Map...
+追加マップ: Half map A for Map0c
+追加マップ: Half map B for Map0c
+ハーフマップ: Composite half map A for Map0
+ハーフマップ: Composite half map B for Map0
-試料の構成要素
+全体 : Mce1 lipid transporter composed of Mce1 MCE proteins (Mce1ABCDEF)...
+超分子 #1: Mce1 lipid transporter composed of Mce1 MCE proteins (Mce1ABCDEF)...
+分子 #1: Virulence factor Mce family protein
+分子 #2: Virulence factor Mce family protein
+分子 #3: MCE-family protein MCE1c
+分子 #4: Virulence factor mce family protein
+分子 #5: Virulence factor Mce family protein
+分子 #6: Mce-family protein mce1f
+分子 #7: ABC transporter, ATP-binding protein,Green fluorescent protein chimera
+分子 #8: Conserved hypothetical integral membrane protein Yrbe1a
+分子 #9: ABC-transporter integral membrane protein
+分子 #10: UNKNOWN LIGAND
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.7 mg/mL | ||||||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
詳細: 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 5 mM MgSO4, 150 mM NaCl, 1 mM DDM, 1 mM DTT | ||||||||||||||||||
グリッド | モデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 支持フィルム - Film thickness: 2 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 5 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.04 kPa | ||||||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 295.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV | ||||||||||||||||||
詳細 | This sample contains a mixture of MCE proteins endogenously purified from Mycobacterium smegmatis. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) デジタル化 - サイズ - 横: 11520 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 8184 pixel / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 43925 / 平均露光時間: 2.0 sec. / 平均電子線量: 60.0 e/Å2 詳細: Images were collected in super resolution mode (nominal pixel size of 0.8255 A/pix after binning by 2). |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.4 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm / 倍率(公称値): 105000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
詳細 | Model was initial fitted into the map using Chimera follow-by rigid body refinement in PHENIX. Models were further refined using PHENIX real-space refinement and then manually inspected in Coot. |
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精密化 | 空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT 当てはまり具合の基準: Cross-correlation coefficient |
得られたモデル | PDB-8fef: |