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- PDB-7t7r: Structure of Munc13-1 C1-C2B-MUN-C2C trimer between lipid bilayers -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 7t7r
タイトルStructure of Munc13-1 C1-C2B-MUN-C2C trimer between lipid bilayers
要素Protein unc-13 homolog A
キーワードEXOCYTOSIS / Synaptic Transmission / Munc13 / Membrane Fusion
機能・相同性
機能・相同性情報


dense core granule priming / neuronal dense core vesicle exocytosis / diacylglycerol binding / regulation of synaptic vesicle priming / presynaptic dense core vesicle exocytosis / synaptic vesicle docking / positive regulation of glutamate receptor signaling pathway / synaptic vesicle maturation / presynaptic active zone cytoplasmic component / positive regulation of synaptic plasticity ...dense core granule priming / neuronal dense core vesicle exocytosis / diacylglycerol binding / regulation of synaptic vesicle priming / presynaptic dense core vesicle exocytosis / synaptic vesicle docking / positive regulation of glutamate receptor signaling pathway / synaptic vesicle maturation / presynaptic active zone cytoplasmic component / positive regulation of synaptic plasticity / innervation / neurotransmitter secretion / regulation of short-term neuronal synaptic plasticity / regulation of amyloid precursor protein catabolic process / syntaxin-1 binding / positive regulation of neurotransmitter secretion / syntaxin binding / synaptic vesicle priming / Golgi-associated vesicle / neuromuscular junction development / spectrin binding / presynaptic active zone / synaptic vesicle exocytosis / calyx of Held / excitatory synapse / amyloid-beta metabolic process / SNARE binding / synaptic membrane / synaptic transmission, glutamatergic / long-term synaptic potentiation / neuromuscular junction / terminal bouton / phospholipid binding / synaptic vesicle membrane / presynapse / presynaptic membrane / cell differentiation / calmodulin binding / neuron projection / protein domain specific binding / axon / glutamatergic synapse / synapse / calcium ion binding / protein-containing complex binding / protein-containing complex / identical protein binding / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
Mammalian uncoordinated homology 13, domain 2 / Protein Unc-13 / Protein Unc-13, C2B domain / Munc13-homology domain 2 (MHD2) profile. / MUN domain / Munc13 homology 1 / MUN domain / Munc13-homology domain 1 (MHD1) profile. / Domain of Unknown Function (DUF1041) / Phorbol esters/diacylglycerol binding domain (C1 domain) ...Mammalian uncoordinated homology 13, domain 2 / Protein Unc-13 / Protein Unc-13, C2B domain / Munc13-homology domain 2 (MHD2) profile. / MUN domain / Munc13 homology 1 / MUN domain / Munc13-homology domain 1 (MHD1) profile. / Domain of Unknown Function (DUF1041) / Phorbol esters/diacylglycerol binding domain (C1 domain) / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type signature. / C2 domain / Protein kinase C conserved region 2 (CalB) / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type profile. / Protein kinase C conserved region 1 (C1) domains (Cysteine-rich domains) / Protein kinase C-like, phorbol ester/diacylglycerol-binding domain / C2 domain / C2 domain profile. / C1-like domain superfamily / C2 domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Protein unc-13 homolog A
類似検索 - 構成要素
生物種Mus musculus (ハツカネズミ)
手法電子顕微鏡法 / サブトモグラム平均法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 10 Å
データ登録者Grushin, K. / Sindelar, C.V.
資金援助 米国, 2件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Disease (NIH/NIDDK)NIH DK 027044 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)NIH GM 110530 米国
引用ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2022
タイトル: Munc13 structural transitions and oligomers that may choreograph successive stages in vesicle priming for neurotransmitter release.
著者: Kirill Grushin / R Venkat Kalyana Sundaram / Charles V Sindelar / James E Rothman /
要旨: How can exactly six SNARE complexes be assembled under each synaptic vesicle? Here we report cryo-EM crystal structures of the core domain of Munc13, the key chaperone that initiates SNAREpin ...How can exactly six SNARE complexes be assembled under each synaptic vesicle? Here we report cryo-EM crystal structures of the core domain of Munc13, the key chaperone that initiates SNAREpin assembly. The functional core of Munc13, consisting of C1-C2B-MUN-C2C (Munc13C) spontaneously crystallizes between phosphatidylserine-rich bilayers in two distinct conformations, each in a radically different oligomeric state. In the open conformation (state 1), Munc13C forms upright trimers that link the two bilayers, separating them by ∼21 nm. In the closed conformation, six copies of Munc13C interact to form a lateral hexamer elevated ∼14 nm above the bilayer. Open and closed conformations differ only by a rigid body rotation around a flexible hinge, which when performed cooperatively assembles Munc13 into a lateral hexamer (state 2) in which the key SNARE assembly-activating site of Munc13 is autoinhibited by its neighbor. We propose that each Munc13 in the lateral hexamer ultimately assembles a single SNAREpin, explaining how only and exactly six SNARE complexes are templated. We suggest that state 1 and state 2 may represent two successive states in the synaptic vesicle supply chain leading to "primed" ready-release vesicles in which SNAREpins are clamped and ready to release (state 3).
履歴
登録2021年12月15日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02022年2月9日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年2月23日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.journal_volume / _citation.pdbx_database_id_PubMed ..._citation.journal_volume / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation_author.identifier_ORCID
改定 1.22024年2月28日Group: Data collection / カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • 単純化した表面モデル + あてはめた原子モデル
  • マップデータ: EMDB-25738
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-25738
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Protein unc-13 homolog A
B: Protein unc-13 homolog A
C: Protein unc-13 homolog A


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)392,6883
ポリマ－392,6883
非ポリマー00
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 Protein unc-13 homolog A / Munc13-1


分子量: 130895.867 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 遺伝子: Unc13a / 細胞株 (発現宿主): ExpiHEK-293 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: Q4KUS2

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: 2D ARRAY / ３次元再構成法: サブトモグラム平均法

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試料調製

構成要素名称: 2D crystal of Munc13-1 C1-C2B-MUN-C2C domains between two lipid bilayers.
タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.13 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Rattus norvegicus (ドブネズミ)
由来(組換発現)生物種: Homo sapiens (ヒト) / 細胞: ExpiHEK-293
緩衝液pH: 7.4
緩衝液成分
ID濃度名称Buffer-ID
120 mMMOPS1
2150 mMpotassium chloride1
31 mMEDTA1
40.5 mMTCEP1
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 281 K / 詳細: blot for 5 sec before plunging, blot force -1

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 5000 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 3500 nm
撮影電子線照射量: 3.1 e/Å2 / Avg electron dose per subtomogram: 110 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k)
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
2SerialEM画像取得
7ISOLDE1.2.0モデルフィッティング
8UCSF ChimeraX1.2モデルフィッティング
9UCSF Chimera1.16モデルフィッティング
12RELION3.1最終オイラー角割当
14RELION3.1３次元再構成
CTF補正詳細: CTF correction was performed during 3D reconstruction in RELION 3.1
タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
対称性点対称性: C3 (3回回転対称)
3次元再構成解像度: 10 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 42237 / 対称性のタイプ: POINT
EM volume selection詳細: Particles were extracted and refined using Warp/M software
Num. of tomograms: 62 / Num. of volumes extracted: 70467
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT
詳細: Model for fitting was generated by AlphaFold using the construct's amino acid sequence. Flexible fitting into corresponding density was performed using ISOLDE tool in ChimeraX. The resulting ...詳細: Model for fitting was generated by AlphaFold using the construct's amino acid sequence. Flexible fitting into corresponding density was performed using ISOLDE tool in ChimeraX. The resulting structure was copied and fitted as rigid bodies into the 3D map by "fit in map" function in Chimera.

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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