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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-43753 | |||||||||
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タイトル | Yeast U1 snRNP with humanized U1C Zinc-Finger domain | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | U1snRNP / U1C humanization / SPLICING | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 mRNA splice site recognition / splicing factor binding / U4/U6 snRNP / 7-methylguanosine cap hypermethylation / pICln-Sm protein complex / snRNP binding / small nuclear ribonucleoprotein complex / SMN-Sm protein complex / spliceosomal tri-snRNP complex / poly(U) RNA binding ...mRNA splice site recognition / splicing factor binding / U4/U6 snRNP / 7-methylguanosine cap hypermethylation / pICln-Sm protein complex / snRNP binding / small nuclear ribonucleoprotein complex / SMN-Sm protein complex / spliceosomal tri-snRNP complex / poly(U) RNA binding / commitment complex / U2-type prespliceosome assembly / U4 snRNP / positive regulation of mRNA splicing, via spliceosome / U2 snRNP / U1 snRNP / pre-mRNA 5'-splice site binding / U2-type prespliceosome / precatalytic spliceosome / spliceosomal complex assembly / mRNA 5'-splice site recognition / U5 snRNP / spliceosomal snRNP assembly / U1 snRNA binding / U4/U6 x U5 tri-snRNP complex / catalytic step 2 spliceosome / spliceosomal complex / mRNA splicing, via spliceosome / mRNA binding / RNA binding / zinc ion binding / nucleus / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.49 Å | |||||||||
データ登録者 | Shi SS / Kuang ZL / Zhao R | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: RNA / 年: 2024 タイトル: Selected humanization of yeast U1 snRNP leads to global suppression of pre-mRNA splicing and mitochondrial dysfunction in the budding yeast. 著者: Subbaiah Chalivendra / Shasha Shi / Xueni Li / Zhiling Kuang / Joseph Giovinazzo / Lingdi Zhang / John Rossi / Jingxin Wang / Anthony J Saviola / Robb Welty / Shiheng Liu / Katherine F Vaeth ...著者: Subbaiah Chalivendra / Shasha Shi / Xueni Li / Zhiling Kuang / Joseph Giovinazzo / Lingdi Zhang / John Rossi / Jingxin Wang / Anthony J Saviola / Robb Welty / Shiheng Liu / Katherine F Vaeth / Z Hong Zhou / Kirk C Hansen / J Matthew Taliaferro / Rui Zhao / 要旨: The recognition of the 5' splice site (5' ss) is one of the earliest steps of pre-mRNA splicing. To better understand, the mechanism and regulation of 5' ss recognition, we selectively humanized ...The recognition of the 5' splice site (5' ss) is one of the earliest steps of pre-mRNA splicing. To better understand, the mechanism and regulation of 5' ss recognition, we selectively humanized components of the yeast U1 (yU1) snRNP to reveal the function of these components in 5' ss recognition and splicing. We targeted U1C and Luc7, two proteins that interact with and stabilize the yU1 snRNA and the 5' ss RNA duplex. We replaced the zinc-finger (ZnF) domain of yeast U1C (yU1C) with its human counterpart, which resulted in a cold-sensitive growth phenotype and moderate splicing defects. We next added an auxin-inducible degron to yeast Luc7 (yLuc7) protein (to mimic the lack of Luc7Ls in human U1 snRNP). We found that Luc7-depleted yU1 snRNP resulted in the concomitant loss of Prp40 and Snu71 (two other essential yU1 snRNP proteins), and further biochemical analyses suggest a model of how these three proteins interact with each other in the U1 snRNP. The loss of these proteins resulted in a significant growth retardation accompanied by a global suppression of pre-mRNA splicing. The splicing suppression led to mitochondrial dysfunction as revealed by a release of Fe into the growth medium and an induction of mitochondrial reactive oxygen species. Together, these observations indicate that the human U1C ZnF can substitute that of yeast, Luc7 is essential for the incorporation of the Luc7-Prp40-Snu71 trimer into yU1 snRNP, and splicing plays a major role in the regulation of mitochondrial function in yeast. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_43753.map.gz | 945.1 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-43753-v30.xml emd-43753.xml | 38.3 KB 38.3 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_43753_fsc.xml | 21.2 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_43753.png | 101.8 KB | ||
Filedesc metadata | emd-43753.cif.gz | 10.1 KB | ||
その他 | emd_43753_half_map_1.map.gz emd_43753_half_map_2.map.gz | 927.9 MB 927.9 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-43753 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-43753 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_43753_validation.pdf.gz | 922.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_43753_full_validation.pdf.gz | 922.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_43753_validation.xml.gz | 31 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_43753_validation.cif.gz | 41.1 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-43753 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-43753 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8w2oMC M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_43753.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 1000 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.83 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_43753_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_43753_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : U1snRNP
+超分子 #1: U1snRNP
+分子 #1: U1 small nuclear ribonucleoprotein 70 kDa homolog
+分子 #2: U1 small nuclear ribonucleoprotein C
+分子 #3: U1 small nuclear ribonucleoprotein A
+分子 #4: U1 small nuclear ribonucleoprotein component PRP42
+分子 #5: Pre-mRNA-processing factor 39
+分子 #6: Protein NAM8
+分子 #7: 56 kDa U1 small nuclear ribonucleoprotein component
+分子 #8: U1 small nuclear ribonucleoprotein component SNU71
+分子 #9: Protein LUC7
+分子 #10: Small nuclear ribonucleoprotein-associated protein B
+分子 #11: Small nuclear ribonucleoprotein Sm D1
+分子 #12: Small nuclear ribonucleoprotein Sm D2
+分子 #13: Small nuclear ribonucleoprotein Sm D3
+分子 #14: Small nuclear ribonucleoprotein E
+分子 #15: Small nuclear ribonucleoprotein F
+分子 #16: Small nuclear ribonucleoprotein G
+分子 #17: ACT1 pre-mRNA
+分子 #18: U1 snRNA
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.5 mg/mL | ||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.9 構成要素:
詳細: 20 mM Hepes, pH7.9, 120 mM KCl, 2 mM EGTA | ||||||||||||
グリッド | モデル: EMS Lacey Carbon / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 20 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 20 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER | ||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV 詳細: The grids were obtained with the chamber at 100% humidity, 2.5 s blotting time, -6 blotting force and 15 s wait time and flash-frozen into liquid ethane with a Vitrobot Mark IV (Thermo Fisher Scientific). | ||||||||||||
詳細 | This sample is monodisperse |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 1.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.2 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |