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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 3j32 | ||||||
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タイトル | An asymmetric unit map from electron cryo-microscopy of Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) | ||||||
要素 | Hemocyanin isoform 1 | ||||||
キーワード | OXYGEN TRANSPORT / allosteric | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 | ||||||
生物種 | Haliotis diversicolor (無脊椎動物) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.5 Å | ||||||
データ登録者 | Zhang, Q. / Dai, X. / Cong, Y. / Zhang, J. / Chen, D.-H. / Dougherty, M. / Wang, J. / Ludtke, S. / Schmid, M.F. / Chiu, W. | ||||||
引用 | ジャーナル: Structure / 年: 2013 タイトル: Cryo-EM structure of a molluscan hemocyanin suggests its allosteric mechanism. 著者: Qinfen Zhang / Xinghong Dai / Yao Cong / Junjie Zhang / Dong-Hua Chen / Matthew T Dougherty / Jiangyong Wang / Steven J Ludtke / Michael F Schmid / Wah Chiu / 要旨: Hemocyanins are responsible for transporting O2 in the arthropod and molluscan hemolymph. Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) is an 8 MDa oligomer. Each subunit is made up of ...Hemocyanins are responsible for transporting O2 in the arthropod and molluscan hemolymph. Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) is an 8 MDa oligomer. Each subunit is made up of eight functional units (FUs). Each FU contains two Cu ions, which can reversibly bind an oxygen molecule. Here, we report a 4.5 A° cryo-EM structure of HdH1. The structure clearly shows ten asymmetric units arranged with D5 symmetry. Each asymmetric unit contains two structurally distinct but chemically identical subunits. The map is sufficiently resolved to trace the entire subunit Ca backbone and to visualize densities corresponding to some large side chains, Cu ion pairs, and interaction networks of adjacent subunits. A FU topology path intertwining between the two subunits of the asymmetric unit is unambiguously determined. Our observations suggest a structural mechanism for the stability of the entire hemocyanin didecamer and 20 ‘‘communication clusters’’ across asymmetric units responsible for its allosteric property upon oxygen binding. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 3j32.cif.gz | 213.5 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb3j32.ent.gz | 122.5 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 3j32.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 3j32_validation.pdf.gz | 690.8 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 3j32_full_validation.pdf.gz | 701.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | 3j32_validation.xml.gz | 79.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 3j32_validation.cif.gz | 116 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j3/3j32 ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j3/3j32 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
| x 10
2 |
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3 |
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対称性 | 点対称性: (シェーンフリース記号: D5 (2回x5回 2面回転対称)) |
-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 378672.812 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Haliotis diversicolor (無脊椎動物) / 組織: lymph / 参照: UniProt: C7FEG7 |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: An asymmetric unit of Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) タイプ: COMPLEX / 詳細: one asymmetric unit contains two subunits |
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分子量 | 値: 0.8 MDa / 実験値: NO |
緩衝液 | 名称: 0.2M NaCl, 50mM Tris-HCl, 5mM CaCl2, 5mM MgCl2, pH 7.5 pH: 7.5 詳細: 0.2M NaCl, 50mM Tris-HCl, 5mM CaCl2, 5mM MgCl2, pH 7.5 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | 詳細: 400 mesh copper 1.2/1.3 quantifoil grid with continuous carbon support, glow discharged. |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % 詳細: Blot for 2 seconds before plunging in to liquid ethane (FEI VITROBOT MARK III) 手法: blot for 2 seconds before plunging |
-電子顕微鏡撮影
顕微鏡 | モデル: JEOL 3200FSC / 日付: 2008年7月7日 / 詳細: MDS |
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電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 60000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3600 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm / Cs: 4.1 mm 非点収差: Objective lens astigmatism was corrected at 400,000 nominal magnification カメラ長: 0 mm |
試料ホルダ | 試料ホルダーモデル: JEOL 3200FSC CRYOHOLDER / 資料ホルダタイプ: liquid N2 cooled / 温度: 88 K / 最高温度: 100 K / 最低温度: 80 K / 傾斜角・最大: 0 ° / 傾斜角・最小: 0 ° |
撮影 | 電子線照射量: 20 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: In-column Omega Filter エネルギーフィルター 上限: 20 eV / エネルギーフィルター 下限: 0 eV |
画像スキャン | デジタル画像の数: 784 |
放射 | プロトコル: SINGLE WAVELENGTH / 単色(M)・ラウエ(L): M / 散乱光タイプ: x-ray |
放射波長 | 相対比: 1 |
-解析
EMソフトウェア | 名称: EMAN / バージョン: 1 / カテゴリ: 3次元再構成 | ||||||||||||
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CTF補正 | 詳細: each micrograph | ||||||||||||
対称性 | 点対称性: D5 (2回x5回 2面回転対称) | ||||||||||||
3次元再構成 | 手法: projection matching / 解像度: 4.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / 粒子像の数: 28641 / ピクセルサイズ(実測値): 1.02 Å 詳細: (Single particle details: processed with EMAN1 followed by segmentation of asymmetric unit.) (Single particle--Applied symmetry: D5) 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST
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