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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-25164 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of AdnA-AdnB(W325A) in complex with DNA and AMPPNP | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | homologous recombination / DNA end resection / cryoelectron microscopy / DNA curtain / DNA BINDING PROTEIN / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 DNA 3'-5' helicase / exonuclease activity / DNA helicase activity / isomerase activity / DNA helicase / hydrolase activity / DNA repair / DNA binding / ATP binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Mycolicibacterium smegmatis (バクテリア) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å | |||||||||
データ登録者 | Wang J / Warren GM | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2022 タイトル: Structure-activity relationships at a nucleobase-stacking tryptophan required for chemomechanical coupling in the DNA resecting motor-nuclease AdnAB. 著者: Garrett M Warren / Aviv Meir / Juncheng Wang / Dinshaw J Patel / Eric C Greene / Stewart Shuman / 要旨: Mycobacterial AdnAB is a heterodimeric helicase-nuclease that initiates homologous recombination by resecting DNA double-strand breaks. The AdnB subunit hydrolyzes ATP to drive single-nucleotide ...Mycobacterial AdnAB is a heterodimeric helicase-nuclease that initiates homologous recombination by resecting DNA double-strand breaks. The AdnB subunit hydrolyzes ATP to drive single-nucleotide steps of 3'-to-5' translocation of AdnAB on the tracking DNA strand via a ratchet-like mechanism. Trp325 in AdnB motif III, which intercalates into the tracking strand and makes a π stack on a nucleobase 5' of a flipped-out nucleoside, is the putative ratchet pawl without which ATP hydrolysis is mechanically futile. Here, we report that AdnAB mutants wherein Trp325 was replaced with phenylalanine, tyrosine, histidine, leucine, or alanine retained activity in ssDNA-dependent ATP hydrolysis but displayed a gradient of effects on DSB resection. The resection velocities of Phe325 and Tyr325 mutants were 90% and 85% of the wild-type AdnAB velocity. His325 slowed resection rate to 3% of wild-type and Leu325 and Ala325 abolished DNA resection. A cryo-EM structure of the DNA-bound Ala325 mutant revealed that the AdnB motif III peptide was disordered and the erstwhile flipped out tracking strand nucleobase reverted to a continuous base-stacked arrangement with its neighbors. We conclude that π stacking of Trp325 on a DNA nucleobase triggers and stabilizes the flipped-out conformation of the neighboring nucleoside that underlies formation of a ratchet pawl. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_25164.map.gz | 59.7 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-25164-v30.xml emd-25164.xml | 15.8 KB 15.8 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_25164.png | 55 KB | ||
Filedesc metadata | emd-25164.cif.gz | 7.3 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-25164 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-25164 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_25164_validation.pdf.gz | 538.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_25164_full_validation.pdf.gz | 538.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_25164_validation.xml.gz | 5.5 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_25164_validation.cif.gz | 6.3 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-25164 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-25164 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_25164.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.064 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : Cryo-EM map of AdnA-AdnB(W325A) in complex with DNA and AMPPNP
全体 | 名称: Cryo-EM map of AdnA-AdnB(W325A) in complex with DNA and AMPPNP |
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要素 |
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-超分子 #1: Cryo-EM map of AdnA-AdnB(W325A) in complex with DNA and AMPPNP
超分子 | 名称: Cryo-EM map of AdnA-AdnB(W325A) in complex with DNA and AMPPNP タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3 |
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由来(天然) | 生物種: Mycolicibacterium smegmatis (バクテリア) |
-分子 #1: DNA helicase
分子 | 名称: DNA helicase / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA helicase |
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由来(天然) | 生物種: Mycolicibacterium smegmatis (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 118.013406 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) |
配列 | 文字列: MTQVASPVVQ ARYSPVELSA ALGLFPPTDE QAAVIAAPPG PLVVIAGAGA GKTETMAARV VWLVANGFAT PSQVLGLTFT RKAAGQLLR RVRTRLARLA GAGLAPGSGA SDESATVSTY HAFAGTLLRE HGLLLPVEPD TRLLSETELW QLAYDVVCAH P GHLDTEKT ...文字列: MTQVASPVVQ ARYSPVELSA ALGLFPPTDE QAAVIAAPPG PLVVIAGAGA GKTETMAARV VWLVANGFAT PSQVLGLTFT RKAAGQLLR RVRTRLARLA GAGLAPGSGA SDESATVSTY HAFAGTLLRE HGLLLPVEPD TRLLSETELW QLAYDVVCAH P GHLDTEKT PAAVTAMVLR LSGALAEHLV DTDQLRDTHV ELERLVHTLP AGPYQRDRGP SQWLLRMLAT QTERTELVPL ID ALHQRMR AEKVMDFGMQ MAAAARLAAR FPQVGEQLRQ RFRVVLLDEY QDTGHAQRIA LSSLFGGGAD DGLALTAVGD PIQ SIYGAR GASATNLPRF TTDFPYSDGT PAPTLELRTS WRNPPSTLHV ANAVSEEARR RSVAVRALRP RPDAEPGTIR CALL NNVAA ERDWVADHLA RAYHGAIGRG EAAPTAAVLV RRNADAAPMA EALTARGVPV EVVGVAGLLA VPEVADLVAM LRLIA DPTA GSAVMRILTG PRWRFGARDI AALWRRAVEL DDRPKGELGT ADIVAQAAPD ADTACVADAI CDPGDAERYS PAGYER IVA LGRELTMLRA HLGHPLPELV AEVRRVLGLD AEARAARPVA AGWAGTENLD RFSDLVSDFA GHAGASVSAL LAYLDAA VE VENGLAPAEL TVSHDRVQIL TVHAAKGLEW QVVAVPHLSA RVFPSTTQAR TWLTDASDLP PLLRGDRATE SEIGVPVL D TSDIYDRKIL SDKISDHKKS LDQRRVDEER RLLYVAITRA EDTLLLSGHH WGATESKPRG PSEFLCELKT ILEEATAAG TPCGEIEHWA PDPAPGETNP LRDQVVEALW PPVASADDHV HRGAQLVAAA MAGEVSAEAD QEGWAADVDA LLAERERPPQ QEDTELPGQ LSVSTLVELS RDPKAALTRL RRRLPQRPDP HALLGTTFHE WVQRYFHAER LFDLDDLPGA VDSDSGRAVE E SLAELQDA FVKSPWAART PVEVEVPFDM VLGETVVRGR IDAVFAEPDG TTMVLDWKTG DPPETPEAKE HAAVQLAVYR LA WAAMRGC PPESVRAAFH YVRSGQTVIP ETLPGAEELV KLLAAAPTET AEEADRIT UniProtKB: DNA 3'-5' helicase |
-分子 #2: DNA helicase
分子 | 名称: DNA helicase / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA helicase |
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由来(天然) | 生物種: Mycolicibacterium smegmatis (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 111.030656 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) |
配列 | 文字列: SMTTRPAESA PQTASTLLEP GSNGVVRLLG GPGTGKSSLL VDTAVQHILA GADPESVLLL TGSARLRTAA RAAITARLLG AGTVGVVRE PLVRTVHSYA FAVLRLAAQR NGDPPPRLIT SAEQDGIIRE LLAGDLEDGH RSPVGWPEQL WPALTTAGFA T ELRDLMAR ...文字列: SMTTRPAESA PQTASTLLEP GSNGVVRLLG GPGTGKSSLL VDTAVQHILA GADPESVLLL TGSARLRTAA RAAITARLLG AGTVGVVRE PLVRTVHSYA FAVLRLAAQR NGDPPPRLIT SAEQDGIIRE LLAGDLEDGH RSPVGWPEQL WPALTTAGFA T ELRDLMAR CTERGVDPIA LQRLGRTAKR PEWLAAGRFA QAYEQIMLLR SAVGMAAPQA TVPALGAAEL VGAALEALGA DD ELLDTER NRIKLLLVDD AQHLDPQAAR LVRALAAGTG LTVIAGDPDQ SVFGYRGADP VLLRDDTHPA ITLTQSYRCA PEI ASAITG LGQRLPGVSD TRHWTGNPQR EGTVTVRLAA STHAEGTMIA DALRRAHLVD GIPWSQMAVI VRSVPRVGTA LARA LTAAG VPVQDNGTDV PVGRQPAAAA LLTVLDVTAT GHLDADSAVA LLTGPIGRVD PVTLRQLRRA LRRADGSQPP RDFGD LLVD AIEREPKGLS AEHARTLRRL RAVLTAARRS DASGADPRYT LWQAWHASGL QRRWLAASER GGSVGAQADR DLDAVT TLF DVADQYVNRT AGASLRGLVD HVTRLGAAVA RTEPETAAEA VAVLSVHGAL AGEWDFVVIA GVQEGLWPNM IPRGGVL GT QHLVDVLDGV ADMTDRTVST RAPLVAEERR LLMAAMGRAR TRVMITAVDS DTGDESLLPS PFCAEISAWA TEPVAEPP L VAPRVLAPSA LVGRLRAVVC APDGAVDDDA RACAAAQLAR LAAAGVPGAD PSQWHAMTSL TTEEPLWSEP GHVVTLSPS TLQMLTDCPL RWLLERHGGD DGRDVRSTVG SLVHALVSEP GKTESQLVNE LEKVWDDLPY DAKWYSDNEL ARHRAMLETF TRWREDTRR QLTEVATEIP VEGIVVEPGE NTPGVRVRGR LDRLERDEAG RLVVVDLKTG KSPVTKDDAQ NHAQLAMYQL A VAAGLLDD GDEPGGGKLV YLGKAGAAGA TEREQDPLTP DKRAEWLETV GEAAAATAGP RFVARVNNGC ANCPVRSSCP AQ ANGDRP UniProtKB: DNA helicase |
-分子 #3: DNA (70-MER)
分子 | 名称: DNA (70-MER) / タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 1 / 分類: DNA |
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由来(天然) | 生物種: Mycolicibacterium smegmatis (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 21.477703 KDa |
配列 | 文字列: (DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DC)(DT)(DA) (DA)(DT)(DG)(DC)(DG)(DA)(DG)(DC)(DA)(DC) (DT)(DG)(DC)(DT)(DA)(DT)(DT)(DC)(DC) (DC)(DT)(DA)(DG)(DC)(DA)(DG)(DT)(DG)(DC) (DT) (DC)(DG)(DC)(DA)(DT) ...文字列: (DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DC)(DT)(DA) (DA)(DT)(DG)(DC)(DG)(DA)(DG)(DC)(DA)(DC) (DT)(DG)(DC)(DT)(DA)(DT)(DT)(DC)(DC) (DC)(DT)(DA)(DG)(DC)(DA)(DG)(DT)(DG)(DC) (DT) (DC)(DG)(DC)(DA)(DT)(DT)(DA)(DG) (DA)(DT)(DT)(DT)(DT)(DG)(DT)(DT)(DT)(DT) (DT)(DT) (DT)(DA)(DG)(DC)(DG)(DG)(DT) (DT)(DT)(DT) |
-分子 #4: MAGNESIUM ION
分子 | 名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 1 / 式: MG |
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分子量 | 理論値: 24.305 Da |
-分子 #5: IRON/SULFUR CLUSTER
分子 | 名称: IRON/SULFUR CLUSTER / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 1 / 式: SF4 |
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分子量 | 理論値: 351.64 Da |
Chemical component information | ChemComp-FS1: |
-分子 #6: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER
分子 | 名称: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 1 / 式: ANP |
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分子量 | 理論値: 506.196 Da |
Chemical component information | ChemComp-ANP: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 8 |
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グリッド | モデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 53.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: PDB ENTRY PDBモデル - PDB ID: |
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最終 再構成 | 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 98408 |
初期 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD |
最終 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD |