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万見
- EMDB-16804: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc with Tgn38 cargo peptide -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-16804
タイトルAP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc with Tgn38 cargo peptide
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試料
  • 複合体: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide
    • 複合体: AP-2 complex
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit alpha-2
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit beta
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit mu
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit sigma
    • 複合体: Tgn38 cargo peptide
      • タンパク質・ペプチド: Tgn38
キーワードClathrin-mediated endocytosis / peripheral membrane protein / ENDOCYTOSIS
機能・相同性
機能・相同性情報


Post-translational protein phosphorylation / Regulation of Insulin-like Growth Factor (IGF) transport and uptake by Insulin-like Growth Factor Binding Proteins (IGFBPs) / Retrograde transport at the Trans-Golgi-Network / Formation of annular gap junctions / Gap junction degradation / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD4 ...Post-translational protein phosphorylation / Regulation of Insulin-like Growth Factor (IGF) transport and uptake by Insulin-like Growth Factor Binding Proteins (IGFBPs) / Retrograde transport at the Trans-Golgi-Network / Formation of annular gap junctions / Gap junction degradation / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / WNT5A-dependent internalization of FZD2, FZD5 and ROR2 / LDL clearance / WNT5A-dependent internalization of FZD4 / VLDLR internalisation and degradation / Retrograde neurotrophin signalling / Trafficking of GluR2-containing AMPA receptors / Retrograde neurotrophin signalling / clathrin adaptor complex / WNT5A-dependent internalization of FZD4 / clathrin coat / extrinsic component of presynaptic endocytic zone membrane / VLDLR internalisation and degradation / Golgi to endosome transport / Golgi Associated Vesicle Biogenesis / cardiac septum development / MHC class II antigen presentation / Recycling pathway of L1 / AP-2 adaptor complex / regulation of vesicle size / postsynaptic neurotransmitter receptor internalization / Recycling pathway of L1 / Cargo recognition for clathrin-mediated endocytosis / clathrin coat assembly / Cargo recognition for clathrin-mediated endocytosis / positive regulation of synaptic vesicle endocytosis / Clathrin-mediated endocytosis / clathrin adaptor activity / Clathrin-mediated endocytosis / vesicle budding from membrane / membrane coat / clathrin-dependent endocytosis / trans-Golgi network transport vesicle / MHC class II antigen presentation / coronary vasculature development / neurotransmitter receptor internalization / positive regulation of protein localization to membrane / signal sequence binding / aorta development / negative regulation of protein localization to plasma membrane / regulation of hematopoietic stem cell differentiation / ventricular septum development / low-density lipoprotein particle receptor binding / clathrin binding / Trafficking of GluR2-containing AMPA receptors / positive regulation of endocytosis / positive regulation of receptor internalization / synaptic vesicle endocytosis / protein serine/threonine kinase binding / vesicle-mediated transport / Neutrophil degranulation / phosphatidylinositol binding / secretory granule / kidney development / intracellular protein transport / trans-Golgi network / cytoplasmic side of plasma membrane / kinase binding / disordered domain specific binding / synaptic vesicle / heart development / cytoplasmic vesicle / postsynapse / protein-containing complex assembly / transmembrane transporter binding / endosome / protein domain specific binding / intracellular membrane-bounded organelle / glutamatergic synapse / lipid binding / synapse / protein-containing complex binding / protein kinase binding / Golgi apparatus / mitochondrion / membrane / plasma membrane / cytosol
類似検索 - 分子機能
Keratinocyte-associated gene product / AP-2 complex subunit sigma / Clathrin adaptor, alpha-adaptin, appendage, C-terminal subdomain / Adaptor protein complex AP-2, alpha subunit / Alpha adaptin AP2, C-terminal domain / Mu2, C-terminal domain / AP-2 complex subunit mu, N-terminal / Adaptor protein complex, sigma subunit / Clathrin adaptor, beta-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Beta-adaptin appendage, C-terminal subdomain ...Keratinocyte-associated gene product / AP-2 complex subunit sigma / Clathrin adaptor, alpha-adaptin, appendage, C-terminal subdomain / Adaptor protein complex AP-2, alpha subunit / Alpha adaptin AP2, C-terminal domain / Mu2, C-terminal domain / AP-2 complex subunit mu, N-terminal / Adaptor protein complex, sigma subunit / Clathrin adaptor, beta-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Beta-adaptin appendage, C-terminal subdomain / AP-1/2/4 complex subunit beta / Beta2-adaptin appendage, C-terminal sub-domain / Beta2-adaptin appendage, C-terminal sub-domain / AP complex subunit beta / Clathrin adaptor complex, small chain / Clathrin adaptor complexes small chain signature. / Clathrin adaptor complexes medium chain signature 1. / Clathrin adaptor, mu subunit / Clathrin adaptor, mu subunit, conserved site / Clathrin adaptor complexes medium chain signature 2. / Coatomer/calthrin adaptor appendage, C-terminal subdomain / Adaptor complexes medium subunit family / AP complex, mu/sigma subunit / Clathrin adaptor complex small chain / AP-2 complex subunit mu, C-terminal superfamily / Mu homology domain / Mu homology domain (MHD) profile. / Clathrin adaptor, alpha/beta/gamma-adaptin, appendage, Ig-like subdomain / Adaptin C-terminal domain / Adaptin C-terminal domain / Clathrin/coatomer adaptor, adaptin-like, N-terminal / Adaptin N terminal region / Clathrin adaptor, appendage, Ig-like subdomain superfamily / Longin-like domain superfamily / TBP domain superfamily / Armadillo/beta-catenin-like repeats / Armadillo / Armadillo-like helical / Armadillo-type fold
類似検索 - ドメイン・相同性
AP-2 complex subunit alpha-2 / Trans-Golgi network integral membrane protein TGN38 / AP-2 complex subunit sigma / AP-2 complex subunit mu / AP-2 complex subunit beta
類似検索 - 構成要素
生物種Mus musculus (ハツカネズミ) / Rattus norvegicus (ドブネズミ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.8 Å
データ登録者Baker RW / Sarsam R / Cannon KS
資金援助1件
OrganizationGrant number国
Not funded
引用ジャーナル: J Struct Biol / 年: 2023
タイトル: Lipid nanodiscs as a template for high-resolution cryo-EM structures of peripheral membrane proteins.
著者: Kevin S Cannon / Reta D Sarsam / Tanita Tedamrongwanish / Kevin Zhang / Richard W Baker /
要旨: Peripheral membrane proteins are ubiquitous throughout cell biology and are required for a variety of cellular processes such as signal transduction, membrane trafficking, and autophagy. Transient ...Peripheral membrane proteins are ubiquitous throughout cell biology and are required for a variety of cellular processes such as signal transduction, membrane trafficking, and autophagy. Transient binding to the membrane has a profound impact on protein function, serving to induce conformational changes and alter biochemical and biophysical parameters by increasing the local concentration of factors and restricting diffusion to two dimensions. Despite the centrality of the membrane in serving as a template for cell biology, there are few reported high-resolution structures of peripheral membrane proteins bound to the membrane. We analyzed the utility of lipid nanodiscs to serve as a template for cryo-EM analysis of peripheral membrane proteins. We tested a variety of nanodiscs and we report a 3.3 Å structure of the AP2 clathrin adaptor complex bound to a 17-nm nanodisc, with sufficient resolution to visualize a bound lipid head group. Our data demonstrate that lipid nanodiscs are amenable to high-resolution structure determination of peripheral membrane proteins and provide a framework for extending this analysis to other systems.
履歴
登録2023年3月7日-
ヘッダ(付随情報) 公開2023年7月12日-
マップ公開2023年7月12日-
更新2023年7月19日-
現状2023年7月19日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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添付画像

emd_16804.png

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_16804.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 27 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
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その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.76 Å/pix.
x 192 pix.
= 337.92 Å		1.76 Å/pix.
x 192 pix.
= 337.92 Å		1.76 Å/pix.
x 192 pix.
= 337.92 Å

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ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.76 Å
密度

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表面レベル登録者による: 0.2
最小 - 最大-0.6114211 - 1.5467027
平均 (標準偏差)0.000641149 (±0.03712365)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ192192192
Spacing192192192
セルA=B=C: 337.91998 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_16804_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

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追加マップ: cryoSPARC sharpened map

ファイルemd_16804_additional_1.map
注釈cryoSPARC sharpened map
投影像・断面図
軸ZYX

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密度ヒストグラム

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投影像・断面図
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注釈locally filtered map
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密度ヒストグラム

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追加マップ: deepEMhancer sharpened map

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注釈deepEMhancer sharpened map
投影像・断面図
軸ZYX

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密度ヒストグラム

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ハーフマップ: half map 2

ファイルemd_16804_half_map_1.map
注釈half map 2
投影像・断面図
軸ZYX

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密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: half map 2

ファイルemd_16804_half_map_2.map
注釈half map 2
投影像・断面図
軸ZYX

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密度ヒストグラム

ヒストグラム

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試料の構成要素

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全体 : AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide

全体名称: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide
要素
  • 複合体: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide
    • 複合体: AP-2 complex
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit alpha-2
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit beta
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit mu
      • タンパク質・ペプチド: AP-2 complex subunit sigma
    • 複合体: Tgn38 cargo peptide
      • タンパク質・ペプチド: Tgn38

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超分子 #1: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide

超分子名称: AP2 bound to MSP1E3D1 nanodisc and Tgn38 cargo peptide
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
詳細: Nanodiscs were assembled with a lipid mixture containing 73 mol% DOPC, 15 mol% DOPS, 10 mol% PIP2, 2 mol% Tgn38 cargo peptide. Complex was formed by co-elution via gel filtration chromatography.
分子量理論値: 200 KDa

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超分子 #2: AP-2 complex

超分子名称: AP-2 complex / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#4 / 詳細: AP-2 complex
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)

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超分子 #3: Tgn38 cargo peptide

超分子名称: Tgn38 cargo peptide / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #5 / 詳細: Tgn38 cargo peptide

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分子 #1: AP-2 complex subunit alpha-2

分子名称: AP-2 complex subunit alpha-2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MPAVSKGDGM RGLAVFISDI RNCKSKEAEI KRINKELANI RSKFKGDKAL DGYSKKKYVC KLLFIFLLGH DIDFGHMEAV NLLSSNRYTE KQIGYLFISV LVNSNSELIR LINNAIKNDL ASRNPTFMGL ALHCIANVGS REMAEAFAGE IPKILVAGDT MDSVKQSAAL ...文字列:
MPAVSKGDGM RGLAVFISDI RNCKSKEAEI KRINKELANI RSKFKGDKAL DGYSKKKYVC KLLFIFLLGH DIDFGHMEAV NLLSSNRYTE KQIGYLFISV LVNSNSELIR LINNAIKNDL ASRNPTFMGL ALHCIANVGS REMAEAFAGE IPKILVAGDT MDSVKQSAAL CLLRLYRTSP DLVPMGDWTS RVVHLLNDQH LGVVTAATSL ITTLAQKNPE EFKTSVSLAV SRLSRIVTSA STDLQDYTYY FVPAPWLSVK LLRLLQCYPP PEDPAVRGRL TECLETILNK AQEPPKSKKV QHSNAKNAVL FEAISLIIHH DSEPNLLVRA CNQLGQFLQH RETNLRYLAL ESMCTLASSE FSHEAVKTHI ETVINALKTE RDVSVRQRAV DLLYAMCDRS NAQQIVAEML SYLETADYSI REEIVLKVAI LAEKYAVDYT WYVDTILNLI RIAGDYVSEE VWYRVIQIVI NRDDVQGYAA KTVFEALQAP ACHENLVKVG GYILGEFGNL IAGDPRSSPL IQFNLLHSKF HLCSVPTRAL LLSTYIKFVN LFPEVKATIQ DVLRSDSQLK NADVELQQRA VEYLRLSTVA STDILATVLE EMPPFPERES SILAKLKKKK GGSGLEVLFQ

UniProtKB: AP-2 complex subunit alpha-2

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分子 #2: AP-2 complex subunit beta

分子名称: AP-2 complex subunit beta / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MTDSKYFTTN KKGEIFELKA ELNNEKKEKR KEAVKKVIAA MTVGKDVSSL FPDVVNCMQT DNLELKKLVY LYLMNYAKSQ PDMAIMAVNS FVKDCEDPNP LIRALAVRTM GCIRVDKITE YLCEPLRKCL KDEDPYVRKT AAVCVAKLHD INAQMVEDQG FLDSLRDLIA ...文字列:
MTDSKYFTTN KKGEIFELKA ELNNEKKEKR KEAVKKVIAA MTVGKDVSSL FPDVVNCMQT DNLELKKLVY LYLMNYAKSQ PDMAIMAVNS FVKDCEDPNP LIRALAVRTM GCIRVDKITE YLCEPLRKCL KDEDPYVRKT AAVCVAKLHD INAQMVEDQG FLDSLRDLIA DSNPMVVANA VAALSEISES HPNSNLLDLN PQNINKLLTA LNECTEWGQI FILDCLSNYN PKDDREAQSI CERVTPRLSH ANSAVVLSAV KVLMKFLELL PKDSDYYNML LKKLAPPLVT LLSGEPEVQY VALRNINLIV QKRPEILKQE IKVFFVKYND PIYVKLEKLD IMIRLASQAN IAQVLAELKE YATEVDVDFV RKAVRAIGRC AIKVEQSAER CVSTLLDLIQ TKVNYVVQEA IVVIRDIFRK YPNKYESIIA TLCENLDSLD EPDARAAMIW IVGEYAERID NADELLESFL EGFHDESTQV QLTLLTAIVK LFLKKPSETQ ELVQQVLSLA TQDSDNPDLR DRGYIYWRLL STDPVTAKEV VLSEKPLISE ETDLIEPTLL DELICHIGSL ASVYHKPPNA FVEGSHGIHR K

UniProtKB: AP-2 complex subunit beta

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分子 #3: AP-2 complex subunit mu

分子名称: AP-2 complex subunit mu / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MIGGLFIYNH KGEVLISRVY RDDIGRNAVD AFRVNVIHAR QQVRSPVTNI ARTSFFHVKR SNIWLAAVTK QNVNAAMVFE FLYKMCDVMA AYFGKISEEN IKNNFVLIYE LLDEILDFGY PQNSETGALK TFITQQGIKS QHQTKEEQSQ ITSQVTGQIG WRREGIKYRR ...文字列:
MIGGLFIYNH KGEVLISRVY RDDIGRNAVD AFRVNVIHAR QQVRSPVTNI ARTSFFHVKR SNIWLAAVTK QNVNAAMVFE FLYKMCDVMA AYFGKISEEN IKNNFVLIYE LLDEILDFGY PQNSETGALK TFITQQGIKS QHQTKEEQSQ ITSQVTGQIG WRREGIKYRR NELFLDVLES VNLLMSPQGQ VLSAHVSGRV VMKSYLSGMP ECKFGMNDKI VIEKQGKGTA DETSKS GKQ SIAIDDCTFH QCVRLSKFDS ERSISFIPPD GEFELMRYRT TKDIILPFRV IPLVREVGRT KLEVKVVIKS NFKPSLL AQ KIEVRIPTPL NTSGVQVICM KGKAKYKASE NAIVWKIKRM AGMKESQISA EIELLPTNDK KKWARPPISM NFEVPFAP S GLKVRYLKVF EPKLNYSDHD VIKWVRYIGR SGIYETRC

UniProtKB: AP-2 complex subunit mu

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分子 #4: AP-2 complex subunit sigma

分子名称: AP-2 complex subunit sigma / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列:
MIRFILIQNR AGKTRLAKWY MQFDDDEKQK LIEEVHAVVT VRDAKHTNFV EFRNFKIIYR RYAGLYFCIC VDVNDNNLAY LEAIHNFVE VLNEYFHNVC ELDLVFNFYK VYTVVDEMFL AGEIRETSQT KVLKQLLMLQ SLE

UniProtKB: AP-2 complex subunit sigma

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分子 #5: Tgn38

分子名称: Tgn38 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 5 / 詳細: N-terminal oleic acid and FITC moieties / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Rattus norvegicus (ドブネズミ)
配列文字列:
KVTRRPKASD YQRL

UniProtKB: Trans-Golgi network integral membrane protein TGN38

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度1 mg/mL
緩衝液pH: 7.4 / 詳細: 20 mM HEPES pH 7.4, 100 mM NaCl
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER / 詳細: Tergeo EM plasma cleaner
凍結凍結剤: ETHANE-PROPANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: Two sample applications..
詳細Nanodiscs were assembled with a lipid mixture containing 73 mol% DOPC, 15 mol% DOPS, 10 mol% PIP2, 2 mol% Tgn38 cargo peptide. Complex was formed by co-elution via gel filtration chromatography.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TALOS ARCTICA
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
平均電子線量: 55.0 e/Å2
電子線加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 倍率（補正後）: 45000 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.5 µm / 倍率（公称値）: 45000
試料ステージホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company

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画像解析

詳細Data collected in counting mode.
粒子像選択選択した数: 2800000
詳細: General model gmodel_phosnet_202005_N63_c17.h5 used for crYOLO picking.
初期モデルモデルのタイプ: OTHER / 詳細: Ab inition model generation in cryoSPARC v3.2.
最終 再構成アルゴリズム: BACK PROJECTION / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 3.2) / 使用した粒子像数: 62324
初期 角度割当タイプ: OTHER
最終 角度割当タイプ: OTHER
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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