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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-15417 | |||||||||
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タイトル | human MutSalpha (MSH2/MSH6) binding to DNA with a GT mismatch | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | DNA mismatch repair / MMR / MutSa / Lynch Syndrome / DNA BINDING PROTEIN | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 somatic recombination of immunoglobulin genes involved in immune response / MutSbeta complex / Defective Mismatch Repair Associated With MSH3 / MutSalpha complex / Defective Mismatch Repair Associated With MSH2 / Defective Mismatch Repair Associated With MSH6 / guanine/thymine mispair binding / somatic recombination of immunoglobulin gene segments / B cell mediated immunity / maintenance of DNA repeat elements ...somatic recombination of immunoglobulin genes involved in immune response / MutSbeta complex / Defective Mismatch Repair Associated With MSH3 / MutSalpha complex / Defective Mismatch Repair Associated With MSH2 / Defective Mismatch Repair Associated With MSH6 / guanine/thymine mispair binding / somatic recombination of immunoglobulin gene segments / B cell mediated immunity / maintenance of DNA repeat elements / positive regulation of helicase activity / positive regulation of isotype switching to IgA isotypes / meiotic mismatch repair / centromeric DNA binding / mitotic recombination / positive regulation of isotype switching to IgG isotypes / mismatched DNA binding / negative regulation of DNA recombination / Mismatch repair (MMR) directed by MSH2:MSH3 (MutSbeta) / Mismatch repair (MMR) directed by MSH2:MSH6 (MutSalpha) / isotype switching / oxidative phosphorylation / response to UV-B / postreplication repair / mitotic intra-S DNA damage checkpoint signaling / ATP-dependent DNA damage sensor activity / germ cell development / response to X-ray / intrinsic apoptotic signaling pathway in response to DNA damage by p53 class mediator / somatic hypermutation of immunoglobulin genes / mismatch repair / ATP-dependent activity, acting on DNA / response to UV / protein localization to chromatin / intrinsic apoptotic signaling pathway / methylated histone binding / B cell differentiation / determination of adult lifespan / TP53 Regulates Transcription of DNA Repair Genes / intrinsic apoptotic signaling pathway in response to DNA damage / male gonad development / double-strand break repair / spermatogenesis / in utero embryonic development / negative regulation of neuron apoptotic process / damaged DNA binding / chromosome, telomeric region / intracellular membrane-bounded organelle / DNA repair / chromatin binding / chromatin / Golgi apparatus / enzyme binding / protein homodimerization activity / ATP hydrolysis activity / DNA binding / nucleoplasm / ATP binding / membrane / nucleus / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) / synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.8 Å | |||||||||
データ登録者 | Bruekner SR / Sixma TK | |||||||||
資金援助 | オランダ, European Union, 2件
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引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2023 タイトル: Unexpected moves: a conformational change in MutSα enables high-affinity DNA mismatch binding. 著者: Susanne R Bruekner / Wietske Pieters / Alexander Fish / A Manuel Liaci / Serge Scheffers / Emily Rayner / Daphne Kaldenbach / Lisa Drost / Marleen Dekker / Sandrine van Hees-Stuivenberg / ...著者: Susanne R Bruekner / Wietske Pieters / Alexander Fish / A Manuel Liaci / Serge Scheffers / Emily Rayner / Daphne Kaldenbach / Lisa Drost / Marleen Dekker / Sandrine van Hees-Stuivenberg / Elly Delzenne-Goette / Charlotte de Konink / Hellen Houlleberghs / Hendrikus Jan Dubbink / Abeer AlSaegh / Niels de Wind / Friedrich Förster / Hein Te Riele / Titia K Sixma / 要旨: The DNA mismatch repair protein MutSα recognizes wrongly incorporated DNA bases and initiates their correction during DNA replication. Dysfunctions in mismatch repair lead to a predisposition to ...The DNA mismatch repair protein MutSα recognizes wrongly incorporated DNA bases and initiates their correction during DNA replication. Dysfunctions in mismatch repair lead to a predisposition to cancer. Here, we study the homozygous mutation V63E in MSH2 that was found in the germline of a patient with suspected constitutional mismatch repair deficiency syndrome who developed colorectal cancer before the age of 30. Characterization of the mutant in mouse models, as well as slippage and repair assays, shows a mildly pathogenic phenotype. Using cryogenic electron microscopy and surface plasmon resonance, we explored the mechanistic effect of this mutation on MutSα function. We discovered that V63E disrupts a previously unappreciated interface between the mismatch binding domains (MBDs) of MSH2 and MSH6 and leads to reduced DNA binding. Our research identifies this interface as a 'safety lock' that ensures high-affinity DNA binding to increase replication fidelity. Our mechanistic model explains the hypomorphic phenotype of the V63E patient mutation and other variants in the MBD interface. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_15417.map.gz | 28.4 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-15417-v30.xml emd-15417.xml | 27.3 KB 27.3 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_15417_fsc.xml | 12.8 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_15417.png | 156.1 KB | ||
Filedesc metadata | emd-15417.cif.gz | 8.6 KB | ||
その他 | emd_15417_half_map_1.map.gz emd_15417_half_map_2.map.gz | 141 MB 141.1 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15417 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15417 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_15417_validation.pdf.gz | 986.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_15417_full_validation.pdf.gz | 986.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_15417_validation.xml.gz | 21.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_15417_validation.cif.gz | 26.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15417 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15417 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8ag6MC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このマップから作成された原子モデル |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_15417.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 178 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.839 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_15417_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_15417_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : MutSalpha on mismatched DNA
+超分子 #1: MutSalpha on mismatched DNA
+超分子 #2: MSH2
+超分子 #3: MSH6
+超分子 #4: DNA containing a G/T mismatch
+分子 #1: DNA mismatch repair protein Msh2
+分子 #2: DNA mismatch repair protein Msh6
+分子 #3: DNA (50-MER)
+分子 #4: DNA (50-MER)
+分子 #5: MAGNESIUM ION
+分子 #6: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.53 mg/mL | |||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
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グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 45 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.01 kPa | |||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: 3 s blotting with blot force 10. | |||||||||||||||
詳細 | 2 uM MutSa with 2-fold excess DNA oligo |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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詳細 | collected on Krios 1 at Netherlands Center for Electron Nanoscopy (NeCEN) |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4821 / 平均露光時間: 1.9 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.000000001 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.4 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.9 µm / 倍率(公称値): 105000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |