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タイトルStructural insights into Cas9-mediated prespacer selection in CRISPR-Cas adaptation.
ジャーナル・号・ページMol Cell, Vol. 86, Issue 5, Page 791-804.e9, Year 2026
掲載日2026年3月5日
著者Ugne Gaizauskaite / Giedre Tamulaitiene / Arunas Silanskas / Giedrius Gasiunas / Virginijus Siksnys / Giedrius Sasnauskas
PubMed 要旨During CRISPR-Cas adaptation, prokaryotic cells become immunized by the insertion of foreign DNA fragments, termed spacers, into the host genome to serve as templates for RNA-guided immunity. Spacer ...During CRISPR-Cas adaptation, prokaryotic cells become immunized by the insertion of foreign DNA fragments, termed spacers, into the host genome to serve as templates for RNA-guided immunity. Spacer acquisition relies on the Cas1-Cas2 integrase and accessory proteins, which select DNA sequences flanked by the protospacer adjacent motif (PAM) and insert them into the CRISPR array. It has been shown that in type II-A systems, selection of PAM-proximal prespacers is mediated by the effector nuclease Cas9, which forms a "supercomplex" with the Cas1-Cas2 integrase and the Csn2 protein. Here, we present cryo-electron microscopy structures of the Streptococcus thermophilus type II-A prespacer selection supercomplex in the DNA-scanning and two distinct PAM-bound configurations, providing insights into the mechanism of Cas9-mediated prespacer selection in type II-A CRISPR-Cas systems. Repurposing Cas9 by the CRISPR adaptation machinery for prespacer selection, as characterized here, demonstrates Cas9 plasticity and expands our knowledge of Cas9 biology.
リンクMol Cell / PubMed:41702403
手法EM (単粒子)
解像度2.89 - 4.25 Å
構造データ

EMDB-17702, PDB-8pj9:
Cas9 bound to cognate DNA, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.24 Å

EMDB-51766, PDB-9h1h:
Cas1-Cas2 CRISPR integrase bound to prespacer DNA, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.06 Å

EMDB-51773, PDB-9h1v:
Cas1-Cas2 CRISPR integrase bound to prespacer and target DNA, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.89 Å

EMDB-51787, PDB-9h21:
Cas9 in complex with tracrRNA and crRNA, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.33 Å

EMDB-51801, PDB-9h2g:
Cas9:crRNA:tracrRNA in complex with PAM-containing non-cognate DNA, PAM-bound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.28 Å

EMDB-51812, PDB-9h2m:
Cas9:crRNA:tracrRNA in complex with PAM-containing non-cognate DNA, PAM-unbound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.06 Å

EMDB-51900, PDB-9h6t:
Partial Cas1-Cas2 CRISPR integrase complex bound to a half-integration product, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.93 Å

EMDB-51909, PDB-9h72:
Csn2 (point mutations Y212R, I213R and M215R) in complex with Cas1-Cas2 integrase and dsDNA, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.38 Å

EMDB-52317: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the docked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.73 Å

EMDB-52318: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the docked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.7 Å

EMDB-52319: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the docked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 4.25 Å

EMDB-52320, PDB-9hp8:
PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the docked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.7 Å

EMDB-52321: Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex with dsDNA in PAM-unbound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.39 Å

EMDB-52322: Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex with dsDNA in PAM-unbound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.39 Å

EMDB-52323: Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex with dsDNA in PAM-unbound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.85 Å

EMDB-52324, PDB-9hp9:
Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex with dsDNA in PAM-unbound conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.39 Å

EMDB-52883: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the locked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 (consensus map)
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.62 Å

EMDB-52884: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the locked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.62 Å

EMDB-52885: PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the locked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 4.2 Å

EMDB-52886, PDB-9q85:
PAM-bound Cas9-Cas1-Cas2-Csn2 supercomplex in the locked conformation, Streptococcus thermophilus DGCC 7710 CRISPR3 system
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.62 Å

化合物

ChemComp-MG:
Unknown entry

ChemComp-CA:
Unknown entry

由来
  • streptococcus thermophilus dgcc 7710 (ストレプトコッカス・サリバリウス 亜種 サーモフィラス)
  • synthetic construct (人工物)
キーワードRNA BINDING PROTEIN / Cas9 / CRISPR-Cas / PAM / spacer acquisition / DNA BINDING PROTEIN / Cas1-Cas2 integrase / prespacer / CRISPR leader / CRISPR repeat / CIRSPR-Cas / Cas1 / Cas2 / CRISPR integrase / Csn2

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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