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タイトルLaser flash melting cryo-EM samples to overcome preferred orientation.
ジャーナル・号・ページNat Methods, Vol. 22, Issue 9, Page 1880-1886, Year 2025
掲載日2025年8月28日
著者Monique S Straub / Oliver F Harder / Nathan J Mowry / Sarah V Barrass / Jakub Hruby / Marcel Drabbels / Ulrich J Lorenz /
PubMed 要旨Sample preparation remains a bottleneck for protein structure determination by cryo-electron microscopy. A frequently encountered issue is that proteins adsorb to the air-water interface of the ...Sample preparation remains a bottleneck for protein structure determination by cryo-electron microscopy. A frequently encountered issue is that proteins adsorb to the air-water interface of the sample in a limited number of orientations. This makes it challenging to obtain high-resolution reconstructions, or may even cause projects to fail altogether. We have previously observed that laser flash melting and revitrification of cryo-EM samples reduces preferred orientation for large, symmetric particles. Here we demonstrate that our method can in fact be used to scramble the orientation of proteins of a range of sizes and symmetries. The effect can be enhanced for some proteins by increasing the heating rate during flash melting or by depositing amorphous ice onto the sample prior to revitrification. This also allows us to shed light onto the underlying mechanism. Our experiments establish a set of tools for overcoming preferred orientation that can be easily integrated into existing workflows.
リンクNat Methods / PubMed:40877464 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度2.5 - 4.1 Å
構造データ

EMDB-51744: Cryo-EM map conventional T20S proteasome
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.6 Å

EMDB-51745: Cryo-EM map of revitrified T20S proteasome
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.5 Å

EMDB-51746: Cryo-EM map of deposited and revitrified T20S proteasome
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-51747: Cryo-EM map of conventional 50S ribosomal subunit
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.5 Å

EMDB-51748: Cryo-EM map of revitrified 50S ribosomal subunit
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-51749: Cryo-EM map of deposited and revitrified 50S ribosomal subunit
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.4 Å

EMDB-51750: Cryo-EM map of conventional 50S ribosomal subunit used as control for shaped pulses
手法: EM (単粒子) / 解像度: 4.1 Å

EMDB-51751: Cryo-EM map of shaped pulse revitrified 50S ribosomal subunit
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.9 Å

EMDB-51752: Cryo-EM map of conventional HIV-1 envelope protein
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-51753: Cryo-EM map of revitrified HIV-1 envelope protein
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.8 Å

EMDB-51754: Cryo-EM map of conventional Hemagglutinin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.9 Å

EMDB-51755: Cryo-EM map of revitrified Hemagglutinin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-51756: Cryo-EM map of deposited and revitrified Hemagglutinin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-51757: Cryo-EM map of shaped pulse revitrified Hemagglutinin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

由来
  • Thermoplasma acidophilum (好酸性)
  • E.coli K12 strain BW25113 (大腸菌)
  • E.coli K12 BW25113 (大腸菌)
  • Human immunodeficiency virus 1 (ヒト免疫不全ウイルス)
  • Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス)

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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  • EMDB/PDB/SASBDBのエントリから引用されている文献のデータベースです
  • Pubmedのデータを利用しています

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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