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タイトルStructural basis of deoxynucleotide addition by HIV-1 RT during reverse transcription.
ジャーナル・号・ページNat Commun, Vol. 15, Issue 1, Page 10553, Year 2024
掲載日2024年12月4日
著者Sandra Vergara / Xiaohong Zhou / Ulises Santiago / Mounia Alaoui-El-Azher / James F Conway / Nicolas Sluis-Cremer / Guillermo Calero /
PubMed 要旨Reverse transcription of the retroviral RNA genome into DNA is an integral step during HIV-1 replication. Despite a wealth of structural information on reverse transcriptase (RT), we lack insight ...Reverse transcription of the retroviral RNA genome into DNA is an integral step during HIV-1 replication. Despite a wealth of structural information on reverse transcriptase (RT), we lack insight into the intermediate states of DNA synthesis. Using catalytically active substrates, and a blot/diffusion cryo-electron microscopy approach, we capture 11 structures encompassing reactant, intermediate and product states of dATP addition by RT at 2.2 to 3.0 Å resolution. In the reactant state, dATP binding to RT-template/primer involves a single Mg (site B) inducing formation of a negatively charged pocket where a second floating Mg can bind (site A). During the intermediate state, the α-phosphate oxygen from a previously unobserved dATP conformer aligns with site A Mg and the primer 3'-OH for nucleophilic attack. The product state, comprises two substrate conformations including an incorporated dAMP with the pyrophosphate leaving group coordinated by metal B and stabilized through H-bonds. Moreover, K220 mutants significantly impact the rate of dNTP incorporation by RT and HIV-1 replication capacity. This work sheds light into the dynamic components of a reaction that is central to HIV-1 replication.
リンクNat Commun / PubMed:39632888 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度2.2 - 3.0 Å
構造データ

EMDB-43114, PDB-8vb6:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.7 Å

EMDB-43115, PDB-8vb7:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.5 Å

EMDB-43116, PDB-8vb8:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-43117, PDB-8vb9:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-43120, PDB-8vbc:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-43121, PDB-8vbd:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.7 Å

EMDB-43122, PDB-8vbe:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.6 Å

EMDB-43123, PDB-8vbf:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-43124, PDB-8vbg:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.4 Å

EMDB-43125, PDB-8vbh:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.2 Å

EMDB-43126, PDB-8vbi:
Kinetic intermediate states of HIV-1 RT DNA synthesis captured by cryo-EM
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

化合物

ChemComp-MG:
Unknown entry / マグネシウムジカチオン

ChemComp-DTP:
2'-DEOXYADENOSINE 5'-TRIPHOSPHATE / dATP

ChemComp-POP:
PYROPHOSPHATE 2-

ChemComp-F2A:
2'-deoxy-5'-O-[(S)-hydroxy{[(S)-hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl]methyl}phosphoryl]adenosine

ChemComp-UNX:
Unknown entry

由来
  • human immunodeficiency virus 1 (ヒト免疫不全ウイルス)
  • synthetic construct (人工物)
キーワードTRANSCRIPTION / TRANSFERASE/DNA / Reverse Transcription / Time-resolved / HIV-1 / Cryo-EM / TRANSFERASE-DNA complex

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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