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タイトルTemperature-Resolved Cryo-EM Uncovers Structural Bases of Temperature-Dependent Enzyme Functions.
ジャーナル・号・ページJ Am Chem Soc, Vol. 141, Issue 51, Page 19983-19987, Year 2019
掲載日2019年12月26日
著者Chin-Yu Chen / Yuan-Chih Chang / Bo-Lin Lin / Chun-Hsiang Huang / Ming-Daw Tsai /
PubMed 要旨Protein functions are temperature-dependent, but protein structures are usually solved at a single (often low) temperature because of limitations on the conditions of crystal growth or protein ...Protein functions are temperature-dependent, but protein structures are usually solved at a single (often low) temperature because of limitations on the conditions of crystal growth or protein vitrification. Here we demonstrate the feasibility of solving cryo-EM structures of proteins vitrified at high temperatures, solve 12 structures of an archaeal ketol-acid reductoisomerase (KARI) vitrified at 4-70 °C, and show that structures of both the Mg form (KARI:2Mg) and its ternary complex (KARI:2Mg:NADH:inhibitor) are temperature-dependent in correlation with the temperature dependence of enzyme activity. Furthermore, structural analyses led to dissection of the induced-fit mechanism into ligand-induced and temperature-induced effects and to capture of temperature-resolved intermediates of the temperature-induced conformational change. The results also suggest that it is preferable to solve cryo-EM structures of protein complexes at functional temperatures. These studies should greatly expand the landscapes of protein structure-function relationships and enhance the mechanistic analysis of enzymatic functions.
リンクJ Am Chem Soc / PubMed:31829582
手法EM (単粒子)
解像度2.17 - 3.0 Å
構造データ

EMDB-0740, PDB-6kou:
277 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with magnesium ions
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.43 Å

EMDB-0742, PDB-6kpa:
277 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.75 Å

EMDB-0743, PDB-6kpe:
343 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.83 Å

EMDB-0746, PDB-6kph:
343 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.41 Å

EMDB-0747, PDB-6kpi:
298 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.43 Å

EMDB-0748, PDB-6kpj:
298 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.56 Å

EMDB-0749, PDB-6kpk:
309 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

EMDB-0750, PDB-6kq4:
323 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

EMDB-0751, PDB-6kq8:
328 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-0752, PDB-6kqj:
309 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.54 Å

EMDB-0753, PDB-6kqk:
323 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.17 Å

EMDB-0754, PDB-6kqo:
328 K cryoEM structure of Sso-KARI in complex with Mg2+, NADH and CPD
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.52 Å

化合物

ChemComp-MG:
Unknown entry / マグネシウムジカチオン

ChemComp-NAI:
1,4-DIHYDRONICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE / NADH

ChemComp-9TY:
cyclopropane-1,1-dicarboxylic acid / シクロプロパン-1,1-ジカルボン酸

由来
  • saccharolobus solfataricus (古細菌)
キーワードISOMERASE / Complex

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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