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タイトルCryo-EM structures reveal that RFC recognizes both the 3'- and 5'-DNA ends to load PCNA onto gaps for DNA repair.
ジャーナル・号・ページElife, Vol. 11, Year 2022
掲載日2022年7月13日
著者Fengwei Zheng / Roxana Georgescu / Nina Y Yao / Huilin Li / Michael E O'Donnell /
PubMed 要旨RFC uses ATP to assemble PCNA onto primed sites for replicative DNA polymerases δ and ε. The RFC pentamer forms a central chamber that binds 3' ss/ds DNA junctions to load PCNA onto DNA during ...RFC uses ATP to assemble PCNA onto primed sites for replicative DNA polymerases δ and ε. The RFC pentamer forms a central chamber that binds 3' ss/ds DNA junctions to load PCNA onto DNA during replication. We show here five structures that identify a second DNA binding site in RFC that binds a 5' duplex. This 5' DNA site is located between the N-terminal BRCT domain and AAA+ module of the large Rfc1 subunit. Our structures reveal ideal binding to a 7-nt gap, which includes 2 bp unwound by the clamp loader. Biochemical studies show enhanced binding to 5 and 10 nt gaps, consistent with the structural results. Because both 3' and 5' ends are present at a ssDNA gap, we propose that the 5' site facilitates RFC's PCNA loading activity at a DNA damage-induced gap to recruit gap-filling polymerases. These findings are consistent with genetic studies showing that base excision repair of gaps greater than 1 base requires PCNA and involves the 5' DNA binding domain of Rfc1. We further observe that a 5' end facilitates PCNA loading at an RPA coated 30-nt gap, suggesting a potential role of the RFC 5'-DNA site in lagging strand DNA synthesis.
リンクElife / PubMed:35829698 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度3.09 - 3.41 Å
構造データ

EMDB-25872: Cryo-EM 3D map of the S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to two DNA molecules, one at the 5'-recessed end and the other at the 3'-recessed end
PDB-7tfh: Atomic model of the S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to two DNA molecules, one at the 5'-recessed end and the other at the 3'-recessed end
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.09 Å

EMDB-25873: Cryo-EM 3D map of the S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to DNA with an open clamp
PDB-7tfi: Atomic model of the S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to DNA with an open clamp
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.41 Å

EMDB-25874: Cryo-EM 3D map of S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to DNA with a closed clamp ring
PDB-7tfj: Atomic model of S. cerevisiae clamp-clamp loader complex PCNA-RFC bound to DNA with a closed clamp ring
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.3 Å

EMDB-25875: Cryo-EM 3D map of S. cerevisiae clamp loader RFC bound to two DNA molecules, one at the 5'-recessed end and the other at the 3'-recessed end
PDB-7tfk: Atomic model of S. cerevisiae clamp loader RFC bound to two DNA molecules, one at the 5'-recessed end and the other at the 3'-recessed end
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.25 Å

EMDB-25876: Cryo-EM 3D map of S. cerevisiae clamp loader RFC bound to DNA
PDB-7tfl: Atomic model of S. cerevisiae clamp loader RFC bound to DNA
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.33 Å

化合物

ChemComp-AGS:
PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / ATP-γ-S / ATP-gamma-S, エネルギー貯蔵分子類似体*YM

ChemComp-MG:
Unknown entry / マグネシウムジカチオン

ChemComp-ADP:
ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / ADP / ADP, エネルギー貯蔵分子*YM

由来
  • synthetic construct (人工物)
  • saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
キーワードDNA BINDING PROTEIN/DNA / DNA replication / DNA damage repair / RFC loader / PCNA clamp / DNA polymerase processivity factor / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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  • Pubmedのデータを利用しています

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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