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タイトルOvercoming resolution attenuation during tilted cryo-EM data collection.
ジャーナル・号・ページNat Commun, Vol. 15, Issue 1, Page 389, Year 2024
掲載日2024年1月9日
著者Sriram Aiyer / Philip R Baldwin / Shi Min Tan / Zelin Shan / Juntaek Oh / Atousa Mehrani / Marianne E Bowman / Gordon Louie / Dario Oliveira Passos / Selena Đorđević-Marquardt / Mario Mietzsch / Joshua A Hull / Shuichi Hoshika / Benjamin A Barad / Danielle A Grotjahn / Robert McKenna / Mavis Agbandje-McKenna / Steven A Benner / Joseph A P Noel / Dong Wang / Yong Zi Tan / Dmitry Lyumkis /
PubMed 要旨Structural biology efforts using cryogenic electron microscopy are frequently stifled by specimens adopting "preferred orientations" on grids, leading to anisotropic map resolution and impeding ...Structural biology efforts using cryogenic electron microscopy are frequently stifled by specimens adopting "preferred orientations" on grids, leading to anisotropic map resolution and impeding structure determination. Tilting the specimen stage during data collection is a generalizable solution but has historically led to substantial resolution attenuation. Here, we develop updated data collection and image processing workflows and demonstrate, using multiple specimens, that resolution attenuation is negligible or significantly reduced across tilt angles. Reconstructions with and without the stage tilted as high as 60° are virtually indistinguishable. These strategies allowed the reconstruction to 3 Å resolution of a bacterial RNA polymerase with preferred orientation, containing an unnatural nucleotide for studying novel base pair recognition. Furthermore, we present a quantitative framework that allows cryo-EM practitioners to define an optimal tilt angle during data acquisition. These results reinforce the utility of employing stage tilt for data collection and provide quantitative metrics to obtain isotropic maps.
リンクNat Commun / PubMed:38195598 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度1.92 - 3.2 Å
構造データ

EMDB-36766: Untilted (0 Degree Tilted) Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36767: 10 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36768: 20 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36769: 30 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36770: 40 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36771: 50 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.1 Å

EMDB-36772: 60 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of AAV2 Viral Capsid
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.2 Å

EMDB-36807: Untilted (0 Degree Tilted) Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.2 Å

EMDB-36809: 10 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

EMDB-36810: 20 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

EMDB-36811: 30 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.2 Å

EMDB-36812: 40 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.4 Å

EMDB-36813: 60 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.5 Å

EMDB-36814: 50 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.3 Å

EMDB-36816: Untilted (0 Degree Tilted) Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.6 Å

EMDB-36817: 10 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-36818: 20 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.7 Å

EMDB-36819: 30 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-36820: 40 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-36821: 50 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.9 Å

EMDB-36822: 60 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of DPS
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-41230: Untilted (0 Degree Tilted) Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.92 Å

EMDB-41231: 30 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of Apoferritin
手法: EM (単粒子) / 解像度: 1.99 Å

EMDB-41695: 60 Degree Tilted Single-Particle CryoEM Reconstruction of RNA polymerase
PDB-8txo: E. coli DNA-directed RNA polymerase transcription elongation complex bound to the unnatural dZ-PTP base pair in the active site
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.1 Å

化合物

ChemComp-ZN:
Unknown entry

ChemComp-MG:
Unknown entry / マグネシウムジカチオン

ChemComp-S9F:
[[(2~{R},3~{S},4~{R},5~{R})-5-(4-azanyl-2-oxidanylidene-1$l^{4},3,5,7-tetrazabicyclo[4.3.0]nona-1(6),3,8-trien-7-yl)-3,4-bis(oxidanyl)oxolan-2-yl]methoxy-oxidanyl-phosphoryl] phosphono hydrogen phosphate

由来
  • Homo sapiens (ヒト)
  • escherichia coli (大腸菌)
  • synthetic construct (人工物)
キーワードTRANSCRIPTION / complex / unnatural base pairs / synthetic biology

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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  • EMDB/PDB/SASBDBのエントリから引用されている文献のデータベースです
  • Pubmedのデータを利用しています

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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