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万見
- PDB-9ec8: Active state of wild-type EsCas13d ternary complex -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 9ec8
タイトルActive state of wild-type EsCas13d ternary complex
要素
  • EsCas13d
  • Target RNA (matched)
  • crRNA
キーワードRNA BINDING PROTEIN/RNA / Cas13 / CRISPR / HEPN / RNA nuclease / RNA BINDING PROTEIN-RNA complex
機能・相同性RNA / RNA (> 10) / Uncharacterized protein
機能・相同性情報
生物種[Eubacterium] siraeum DSM 15702 (バクテリア)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.07 Å
データ登録者Chou, C.W. / Finkelstein, I.J.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
Welch FoundationF-1808 米国
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2024
タイトル: Distinct horizontal transfer mechanisms for type I and type V CRISPR-associated transposons.
著者: Kuang Hu / Chia-Wei Chou / Claus O Wilke / Ilya J Finkelstein /
要旨: CASTs use both CRISPR-associated proteins and Tn7-family transposons for RNA-guided vertical and horizontal transmission. CASTs encode minimal CRISPR arrays but can't acquire new spacers. Here, we ...CASTs use both CRISPR-associated proteins and Tn7-family transposons for RNA-guided vertical and horizontal transmission. CASTs encode minimal CRISPR arrays but can't acquire new spacers. Here, we report that CASTs can co-opt defense-associated CRISPR arrays for horizontal transmission. A bioinformatic analysis shows that CASTs co-occur with defense-associated CRISPR systems, with the highest prevalence for type I-B and type V CAST sub-types. Using an E. coli quantitative transposition assay and in vitro reconstitution, we show that CASTs can use CRISPR RNAs from these defense systems. A high-resolution structure of the type I-F CAST-Cascade in complex with a type III-B CRISPR RNA reveals that Cas6 recognizes direct repeats via sequence-independent π - π interactions. In addition to using heterologous CRISPR arrays, type V CASTs can also transpose via an unguided mechanism, even when the S15 co-factor is over-expressed. Over-expressing S15 and the trans-activating CRISPR RNA or a single guide RNA reduces, but does not abrogate, off-target integration for type V CASTs. Our findings suggest that some CASTs may exploit defense-associated CRISPR arrays and that this fact must be considered when porting CASTs to heterologous bacterial hosts. More broadly, this work will guide further efforts to engineer the activity and specificity of CASTs for gene editing applications.
履歴
登録2024年11月13日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02025年8月6日Provider: repository / タイプ: Initial release

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: EsCas13d
B: crRNA
C: Target RNA (matched)
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)137,2055
ポリマ－137,1573
非ポリマー492
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 EsCas13d


分子量: 110828.938 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) [Eubacterium] siraeum DSM 15702 (バクテリア)
遺伝子: EUBSIR_02687 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: B0MS50
#2: RNA鎖 crRNA


分子量: 16739.029 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) [Eubacterium] siraeum DSM 15702 (バクテリア)
発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
#3: RNA鎖 Target RNA (matched)


分子量: 9588.762 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) [Eubacterium] siraeum DSM 15702 (バクテリア)
発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
#4: 化合物 ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg
研究の焦点であるリガンドがあるかN
Has protein modificationN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: The active state of EsCas13d protein with crRNA and matched target
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#3 / 由来: NATURAL
分子量値: 0.135 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: [Eubacterium] siraeum DSM 15702 (バクテリア)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
緩衝液pH: 7.5
試料濃度: 0.135 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2200 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1200 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE
撮影電子線照射量: 80 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 7786

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解析

EMソフトウェア
ID名称カテゴリ
7Cootモデルフィッティング
9PHENIXモデル精密化
10ISOLDEモデル精密化
11cryoSPARC初期オイラー角割当
12cryoSPARC最終オイラー角割当
13cryoSPARC分類
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 3.07 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 176095 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: REAL
精密化交差検証法: NONE
立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2
原子変位パラメータBiso mean: 93.24 Å2
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00338967
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.552312429
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0371435
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.00331312
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d16.70222035

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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