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万見
- PDB-9ayc: Tetra-phosphorylated, E1435Q Ycf1 mutant in inward-facing wide co... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 9ayc
タイトルTetra-phosphorylated, E1435Q Ycf1 mutant in inward-facing wide conformation
要素Metal resistance protein YCF1
キーワードMEMBRANE PROTEIN / ABC-transporter / ycf1 / r-domain / phosphorylation / heavy metal
機能・相同性
機能・相同性情報


ABC-type Cd2+ transporter / ABC-type cadmium transporter activity / Recycling of bile acids and salts / Heme degradation / Aspirin ADME / Atorvastatin ADME / Paracetamol ADME / P-type cadmium transporter activity / bilirubin transmembrane transporter activity / bilirubin transport ...ABC-type Cd2+ transporter / ABC-type cadmium transporter activity / Recycling of bile acids and salts / Heme degradation / Aspirin ADME / Atorvastatin ADME / Paracetamol ADME / P-type cadmium transporter activity / bilirubin transmembrane transporter activity / bilirubin transport / ABC-family proteins mediated transport / vacuole fusion, non-autophagic / ABC-type glutathione S-conjugate transporter activity / ABC-type glutathione-S-conjugate transporter / fungal-type vacuole / fungal-type vacuole membrane / response to metal ion / ATPase-coupled transmembrane transporter activity / response to cadmium ion / glutathione metabolic process / cell redox homeostasis / transmembrane transport / membrane raft / ATP hydrolysis activity / ATP binding / membrane
類似検索 - 分子機能
: / ABC transporter TMD0 domain / : / ABC transporter transmembrane region / ABC transporter type 1, transmembrane domain / ABC transporter integral membrane type-1 fused domain profile. / ABC transporter type 1, transmembrane domain superfamily / ABC transporter-like, conserved site / ABC transporters family signature. / ABC transporter ...: / ABC transporter TMD0 domain / : / ABC transporter transmembrane region / ABC transporter type 1, transmembrane domain / ABC transporter integral membrane type-1 fused domain profile. / ABC transporter type 1, transmembrane domain superfamily / ABC transporter-like, conserved site / ABC transporters family signature. / ABC transporter / ABC transporter-like, ATP-binding domain / ATP-binding cassette, ABC transporter-type domain profile. / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
Metal resistance protein YCF1
類似検索 - 構成要素
生物種Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.23 Å
データ登録者Carvalho, R.S.A. / Rasel, M.S.I. / Khandelwal, N.K. / Tomasiak, T.M.
資金援助 米国, 2件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute Of Allergy and Infectious Diseases (NIH/NIAID)NIH R01 AI156270 米国
National Institutes of Health/National Institute Of Allergy and Infectious Diseases (NIH/NIAID)NIH S10 OD011981 米国
引用ジャーナル: Life Sci Alliance / 年: 2024
タイトル: Cryo-EM reveals a phosphorylated R-domain envelops the NBD1 catalytic domain in an ABC transporter.
著者: Rodolpho Souza Amado de Carvalho / Md Shamiul Islam Rasel / Nitesh K Khandelwal / Thomas M Tomasiak /
要旨: Many ATP-binding cassette transporters are regulated by phosphorylation on long and disordered loops which presents a challenge to visualize with structural methods. We have trapped an activated ...Many ATP-binding cassette transporters are regulated by phosphorylation on long and disordered loops which presents a challenge to visualize with structural methods. We have trapped an activated state of the regulatory domain (R-domain) of yeast cadmium factor 1 (Ycf1) by enzymatically enriching the phosphorylated state. A 3.23 Å cryo-EM structure reveals an R-domain structure with four phosphorylated residues and the position for the entire R-domain. The structure reveals key R-domain interactions including a bridging interaction between NBD1 and NBD2 and an interaction with the R-insertion, another regulatory region. We scanned these interactions by systematically replacing segments along the entire R-domain with scrambled combinations of alanine, glycine, and glutamine and probing function under cellular conditions that require the Ycf1 function. We find a close match with these interactions and interacting regions on our R-domain structure that points to the importance of most well-structured segments for function. We propose a model where the R-domain stabilizes a transport-competent state upon phosphorylation by enveloping NBD1 entirely.
履歴
登録2024年3月7日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年8月21日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年11月13日Group: Data collection / Structure summary
カテゴリ: em_admin / pdbx_entry_details / pdbx_modification_feature
Item: _em_admin.last_update / _pdbx_entry_details.has_protein_modification
改定 1.22025年9月3日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / citation_author / em_admin
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.journal_volume / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _citation_author.name / _em_admin.last_update

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Metal resistance protein YCF1


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)176,2631
ポリマ－176,2631
非ポリマー00
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1

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要素

#1: タンパク質 Metal resistance protein YCF1 / ABC-type Cd(2+) transporter / ABC-type glutathione-S-conjugate transporter / Yeast cadmium factor 1


分子量: 176263.234 Da / 分子数: 1 / 変異: E1435Q / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: YCF1, YDR135C, YD9302.11C / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
参照: UniProt: P39109, ABC-type Cd2+ transporter, ABC-type glutathione-S-conjugate transporter
研究の焦点であるリガンドがあるかY
Has protein modificationY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Phosphorylated, E1435Q Ycf1 mutant in inward-facing wide conformation
タイプ: ORGANELLE OR CELLULAR COMPONENT / 詳細: c-AMP PKA treated E1435Q Ycf1 mutant / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 176462 kDa/nm / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
由来(組換発現)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
緩衝液pH: 7
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
150 mMTrisTRIS-Hcl1
2300 mMNaClNaCl1
30.02 %GDNGDN1
試料濃度: 5.94 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: This sample was monodisperse
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 80 % / 凍結前の試料温度: 283 K
詳細: 5 microliters of sample of concentrated E1435Q (5.94 mg/mL) PKA-treated Ycf1 sample was applied to QF-1.2/1,3 Au grid. Grids were place inside of a Leica EM GP2 equilibrated at 10 degress ...詳細: 5 microliters of sample of concentrated E1435Q (5.94 mg/mL) PKA-treated Ycf1 sample was applied to QF-1.2/1,3 Au grid. Grids were place inside of a Leica EM GP2 equilibrated at 10 degress Celcius amd 80% humidity. Following 10 seconds incubation, the side of the grid to which the sample was applied was blotted on a Whatman 1 paper (3.5 seconds) then immediately plunge frrozen in liquid ethan equilibrated at -185 degree Celcius.

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2100 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 900 nm
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
撮影平均露光時間: 0.9 sec. / 電子線照射量: 54 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 8587
詳細: Movies were collected at 22,500X magnification with automated super-resolution mode and defocus range of -0.9 to -2.1 micrometer. Moview frames cotained 60 frames with a per frame expousre of ...詳細: Movies were collected at 22,500X magnification with automated super-resolution mode and defocus range of -0.9 to -2.1 micrometer. Moview frames cotained 60 frames with a per frame expousre of 0.9 electrons per angstrom squared (54 electron/angstrom square total dose)

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1cryoSPARC4.2.1粒子像選択
2cryoSPARC画像取得
4cryoSPARC4.2.1CTF補正
7ISOLDE1.3モデルフィッティング
9PHENIX1.20.1モデル精密化
13cryoSPARC4.2.1３次元再構成
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 4840688
詳細: Manual and auto particle picking and extraction from 8380 curated micropgrahs
3次元再構成解像度: 3.23 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 68169 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: AB INITIO MODEL
原子モデル構築Accession code: p39109 / Source name: AlphaFold / タイプ: in silico model
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00412022
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.58816299
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d11.324378
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0391883
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0042036

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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