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万見
- PDB-8tc3: CryoEM structure of nucleotide-free form of the nitrogenase iron ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8tc3
タイトルCryoEM structure of nucleotide-free form of the nitrogenase iron protein from A. vinelandii
要素Nitrogenase iron protein,Fluorescent protein plum
キーワードOXIDOREDUCTASE / nitrogenase / ATPase / metalloprotein / iron-sulfur
機能・相同性
機能・相同性情報


nitrogenase / : / nitrogenase activity / nitrogen fixation / bioluminescence / generation of precursor metabolites and energy / 4 iron, 4 sulfur cluster binding / ATP binding / metal ion binding
類似検索 - 分子機能
Nitrogenase iron protein NifH / NifH/frxC family / NifH/chlL conserved site / 4Fe-4S iron sulfur cluster binding proteins, NifH/frxC family / NifH/frxC family signature 2. / NifH/frxC family signature 1. / NIFH_FRXC family profile. / Green fluorescent protein, GFP / Green fluorescent protein-related / Green fluorescent protein ...Nitrogenase iron protein NifH / NifH/frxC family / NifH/chlL conserved site / 4Fe-4S iron sulfur cluster binding proteins, NifH/frxC family / NifH/frxC family signature 2. / NifH/frxC family signature 1. / NIFH_FRXC family profile. / Green fluorescent protein, GFP / Green fluorescent protein-related / Green fluorescent protein / Green fluorescent protein / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
IRON/SULFUR CLUSTER / Nitrogenase iron protein / Fluorescent protein plum
類似検索 - 構成要素
生物種Azotobacter vinelandii DJ (窒素固定)
Discosoma sp. LW-2004 (イソギンチャク)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.57 Å
データ登録者Warmack, R.A. / Rees, D.C.
資金援助 米国, 3件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM045162 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM143836-01 米国
Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 米国
引用ジャーナル: Nat Protoc / 年: 2024
タイトル: Anaerobic cryoEM protocols for air-sensitive nitrogenase proteins.
著者: Rebeccah A Warmack / Belinda B Wenke / Thomas Spatzal / Douglas C Rees /
要旨: Single-particle cryo-electron microscopy (cryoEM) provides an attractive avenue for advancing our atomic resolution understanding of materials, molecules and living systems. However, the vast ...Single-particle cryo-electron microscopy (cryoEM) provides an attractive avenue for advancing our atomic resolution understanding of materials, molecules and living systems. However, the vast majority of published cryoEM methodologies focus on the characterization of aerobically purified samples. Air-sensitive enzymes and microorganisms represent important yet understudied systems in structural biology. We have recently demonstrated the success of an anaerobic single-particle cryoEM workflow applied to the air-sensitive nitrogenase enzymes. In this protocol, we detail the use of Schlenk lines and anaerobic chambers to prepare samples, including a protein tag for monitoring sample exposure to oxygen in air. We describe how to use a plunge freezing apparatus inside of a soft-sided vinyl chamber of the type we routinely use for anaerobic biochemistry and crystallography of oxygen-sensitive proteins. Manual control of the airlock allows for introduction of liquid cryogens into the tent. A custom vacuum port provides slow, continuous evacuation of the tent atmosphere to avoid accumulation of flammable vapors within the enclosed chamber. These methods allowed us to obtain high-resolution structures of both nitrogenase proteins using single-particle cryoEM. The procedures involved can be generally subdivided into a 4 d anaerobic sample generation procedure, and a 1 d anaerobic cryoEM sample preparation step, followed by conventional cryoEM imaging and processing steps. As nitrogen is a substrate for nitrogenase, the Schlenk lines and anaerobic chambers described in this procedure are operated under an argon atmosphere; however, the system and these procedures are compatible with other controlled gas environments.
履歴
登録2023年6月29日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年4月17日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年7月17日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / em_admin
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first ..._citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _em_admin.last_update

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Nitrogenase iron protein,Fluorescent protein plum
B: Nitrogenase iron protein,Fluorescent protein plum
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)114,7463
ポリマ－114,3942
非ポリマー3521
水30617
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 Nitrogenase iron protein,Fluorescent protein plum / Nitrogenase iron protein 1


分子量: 57197.016 Da / 分子数: 2 / 断片: nitrogenase + C-terminal mPlum tag / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Azotobacter vinelandii DJ (窒素固定), (組換発現) Discosoma sp. LW-2004 (イソギンチャク)
遺伝子: nifH / 発現宿主: unidentified (未定義) / 参照: UniProt: C1DGZ6, UniProt: Q5S3G7
#2: 化合物 ChemComp-SF4 / IRON/SULFUR CLUSTER


分子量: 351.640 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: Fe4S4 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#3: 水 ChemComp-HOH / water


分子量: 18.015 Da / 分子数: 17 / 由来タイプ: 天然 / 式: H2O
研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Homodimeric nitrogenase Fe-protein / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.114 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Azotobacter vinelandii DJ (窒素固定)
由来(組換発現)生物種: unidentified (未定義)
緩衝液pH: 7.8
試料濃度: 2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結凍結剤: ETHANE-PROPANE

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: OTHER
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: -3000 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: -800 nm
撮影電子線照射量: 60 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k)

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解析

CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 2.57 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 552324 / 対称性のタイプ: POINT
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.0024162
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.4395608
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d8.504582
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.04644
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.003730

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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