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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8p65 | |||||||||
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タイトル | Cytochrome bc1 complex (Bos taurus) | |||||||||
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![]() | MEMBRANE PROTEIN / Electron Transport Chain / Complex III / Respiratory Complex | |||||||||
機能・相同性 | ![]() Complex III assembly / subthalamus development / pons development / cerebellar Purkinje cell layer development / pyramidal neuron development / Respiratory electron transport / thalamus development / respiratory chain complex III / quinol-cytochrome-c reductase / quinol-cytochrome-c reductase activity ...Complex III assembly / subthalamus development / pons development / cerebellar Purkinje cell layer development / pyramidal neuron development / Respiratory electron transport / thalamus development / respiratory chain complex III / quinol-cytochrome-c reductase / quinol-cytochrome-c reductase activity / mitochondrial electron transport, ubiquinol to cytochrome c / Mitochondrial protein degradation / hypothalamus development / midbrain development / ubiquinone binding / hippocampus development / respiratory electron transport chain / mitochondrial membrane / metalloendopeptidase activity / 2 iron, 2 sulfur cluster binding / oxidoreductase activity / mitochondrial inner membrane / heme binding / mitochondrion / proteolysis / metal ion binding / membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3 Å | |||||||||
![]() | Phillips, B.P. / Barra, I.M.C.C. / Meier, T.K. / Rimle, L. / von Ballmoos, C. | |||||||||
資金援助 | ![]() ![]()
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![]() | ![]() タイトル: A splendid molecular factory: De- and reconstruction of the mammalian respiratory chain. 著者: Lukas Rimle / Ben P Phillips / Isabela M Codo Costa Barra / Noëlle Arnold / Charlie Hennebert / Thomas Meier / Christoph von Ballmoos / ![]() ![]() 要旨: Mitochondrial respiratory complexes I to IV and the FF-ATP synthase (complex V) are large protein assemblies producing the universal cellular energy currency adenosine triphosphate (ATP). Individual ...Mitochondrial respiratory complexes I to IV and the FF-ATP synthase (complex V) are large protein assemblies producing the universal cellular energy currency adenosine triphosphate (ATP). Individual complexes have been extensively studied in vitro, but functional co-reconstitution of several mammalian complexes into proteoliposomes, in particular, the combination of a primary pump with the ATP synthase, is less well understood. Here, we present a generic and scalable strategy to purify mammalian respiratory complexes I, III and the ATP synthase from enriched mitochondria in enzymatically fully active form, and procedures to reassemble the complexes into liposomes. A robust functionality can be shown by in situ monitoring of ATP synthesis rates and by using selected inhibitors of the respiratory chain complexes. By inclusion of cytochrome oxidase, our procedures allowed us to reconstruct the entire mitochondrial respiratory chain (complexes I, III, IV, and V) in ubiquinone Q containing liposomes, demonstrating oxidative phosphorylation by nicotinamide adenine dinucleotide hydrogen driven ATP synthesis. The system was fully coupled at all levels and was used to probe cardiolipin as an essential component to activate the mammalian respiratory chain. Structural characterization using electron cryomicroscopy allowed us to resolve apo-state complex III and complex V at high and medium resolution, respectively, using in silico particle sorting, confirming the presence of all protein subunits and cofactors in native stoichiometry and conformation. The reported findings will facilitate future endeavors to characterize or modulate these key bioenergetic processes. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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ダウンロードとリンク
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ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | ![]() | 828.8 KB | 表示 | ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 677.7 KB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 1.8 MB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 1.9 MB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 121.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 185.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 17461MC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 ( |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
-Cytochrome b-c1 complex subunit ... , 9種, 18分子 ANBOERFSGTHUIVJWKX
#1: タンパク質 | 分子量: 49266.254 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #2: タンパク質 | 分子量: 46576.453 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #5: タンパク質 | 分子量: 21640.580 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #6: タンパク質 | 分子量: 13502.387 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #7: タンパク質 | 分子量: 9737.223 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #8: タンパク質 | 分子量: 9189.116 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #9: タンパク質 | 分子量: 5497.398 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #10: タンパク質 | 分子量: 7469.621 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #11: タンパク質・ペプチド | 分子量: 5705.664 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() |
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-タンパク質 , 2種, 4分子 CPDQ
#3: タンパク質 | 分子量: 42620.340 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #4: タンパク質 | 分子量: 27323.277 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() |
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-非ポリマー , 3種, 8分子 




#12: 化合物 | ChemComp-HEM / #13: 化合物 | #14: 化合物 | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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Has protein modification | Y |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Cytochrome bc1 complex (bos taurus) / タイプ: COMPLEX 詳細: Cytochrome bc1 complex purified natively from bovine heart tissue Entity ID: #1-#11 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 値: 0.486 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
緩衝液 | pH: 7.5 |
試料 | 濃度: 0.1 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES 詳細: Monodisperse sample was purified un-tagged from bovine heart tissue and reconstituted into peptidiscs before freezing. |
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. グリッドのタイプ: PELCO Ultrathin Carbon with Lacey Carbon |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277 K / 詳細: Blot time of 4s with blot force of -3 |
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電子顕微鏡撮影
顕微鏡 | モデル: TFS GLACIOS |
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電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 85000 X / 倍率(補正後): 85000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2750 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm / Calibrated defocus min: 500 nm / 最大 デフォーカス(補正後): 2750 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER 最高温度: 90.5 K / 最低温度: 80 K / Residual tilt: 10 mradians |
撮影 | 平均露光時間: 8 sec. / 電子線照射量: 40 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) 実像数: 3947 |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: TFS Selectris / 詳細: Tuned using TFS Sherpa Software / エネルギーフィルタースリット幅: 10 eV / 位相板: OTHER |
画像スキャン | サンプリングサイズ: 1.416 µm / 横: 4000 / 縦: 4000 |
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解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | 詳細: CryoSPARC's own CTF correction / タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 154469 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C2 (2回回転対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 140138 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 詳細: FSC calculated in PDB server. / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 96.9 / プロトコル: FLEXIBLE FIT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 6FO2 Accession code: 6FO2 / Source name: PDB / タイプ: experimental model |