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- PDB-8glx: CryoEM structure of the TnsC(1-503)-TnsD(1-318)-DNA complex in a ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8glx
タイトルCryoEM structure of the TnsC(1-503)-TnsD(1-318)-DNA complex in a 6:2:1 stoichiometry from E. coli Tn7
要素
  • (DNA (50-MER)) x 2
  • (Transposon Tn7 transposition protein ...) x 2
キーワードDNA BINDING PROTEIN/DNA / Transposon / AAA+ ATPase / Oligomer / Complex / DNA BINDING PROTEIN / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex
機能・相同性
機能・相同性情報


transposition / DNA recombination / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding
類似検索 - 分子機能
Transposon Tn7 transposition protein TnsD, C-termianl / Tn7-like transposition protein D / Tn7 transposition regulator TnsC / Tn7 transposition regulator TnsC / TniQ / TniQ / AAA domain / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / DNA / DNA (> 10) / Transposon Tn7 transposition protein TnsC / Transposon Tn7 transposition protein TnsD
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli (大腸菌)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.88 Å
データ登録者Shen, Y. / Guarne, A.
資金援助 カナダ, 1件
組織認可番号国
Canadian Institutes of Health Research (CIHR)PJT-155941 カナダ
引用ジャーナル: Mol Cell / 年: 2024
タイトル: Assembly of the Tn7 targeting complex by a regulated stepwise process.
著者: Yao Shen / Shreya S Krishnan / Michael T Petassi / Mark A Hancock / Joseph E Peters / Alba Guarné /
要旨: The Tn7 family of transposons is notable for its highly regulated integration mechanisms, including programmable RNA-guided transposition. The targeting pathways rely on dedicated target selection ...The Tn7 family of transposons is notable for its highly regulated integration mechanisms, including programmable RNA-guided transposition. The targeting pathways rely on dedicated target selection proteins from the TniQ family and the AAA+ adaptor TnsC to recruit and activate the transposase at specific target sites. Here, we report the cryoelectron microscopy (cryo-EM) structures of TnsC bound to the TniQ domain of TnsD from prototypical Tn7 and unveil key regulatory steps stemming from unique behaviors of ATP- versus ADP-bound TnsC. We show that TnsD recruits ADP-bound dimers of TnsC and acts as an exchange factor to release one protomer with exchange to ATP. This loading process explains how TnsC assembles a heptameric ring unidirectionally from the target site. This unique loading process results in functionally distinct TnsC protomers within the ring, providing a checkpoint for target immunity and explaining how insertions at programmed sites precisely occur in a specific orientation across Tn7 elements.
履歴
登録2023年3月23日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年7月31日Provider: repository / タイプ: Initial release

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
G: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
X: Transposon Tn7 transposition protein TnsD
H: DNA (50-MER)
I: DNA (50-MER)
E: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
F: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
C: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
Y: Transposon Tn7 transposition protein TnsD
A: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
B: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)462,99124
ポリマ－459,99110
非ポリマー3,00014
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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Transposon Tn7 transposition protein ... , 2種, 8分子 GEFCABXY

#1: タンパク質
Transposon Tn7 transposition protein TnsC / Protein E


分子量: 59318.926 Da / 分子数: 6 / 変異: S2G / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: tnsC / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P05846
#2: タンパク質 Transposon Tn7 transposition protein TnsD


分子量: 36636.020 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: tnsD / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P13991

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DNA鎖 , 2種, 2分子 HI

#3: DNA鎖 DNA (50-MER)


分子量: 15438.931 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Escherichia coli (大腸菌)
#4: DNA鎖 DNA (50-MER)


分子量: 15366.818 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Escherichia coli (大腸菌)

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非ポリマー , 4種, 14分子

#5: 化合物 ChemComp-ATP / ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / ATP


分子量: 507.181 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: C10H16N5O13P3 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION / コメント: ATP, エネルギー貯蔵分子*YM
#6: 化合物
ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 6 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#7: 化合物 ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#8: 化合物
ChemComp-ADP / ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / ADP


分子量: 427.201 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: C10H15N5O10P2 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION / コメント: ADP, エネルギー貯蔵分子*YM

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詳細

研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素
ID名称タイプEntity IDParent-ID由来
1Complex of TnsC(1-503) bound to TnsD(1-318) and DNA with cofactors ATP and ADPCOMPLEX#1-#40MULTIPLE SOURCES
2TnsC(1-503)COMPLEX#11RECOMBINANT
3TnsD(1-318)COMPLEX#21RECOMBINANT
4DNACOMPLEX#3-#41SYNTHETIC
分子量値: 0.50 MDa / 実験値: YES
由来(天然)
IDEntity assembly-ID生物種Ncbi tax-ID
22Escherichia coli (大腸菌)562
33Escherichia coli (大腸菌)562
44Escherichia coli (大腸菌)562
由来(組換発現)
IDEntity assembly-ID生物種Ncbi tax-ID
22Escherichia coli (大腸菌)562
33Escherichia coli (大腸菌)562
緩衝液pH: 8
詳細: 20 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 1.4 mM beta-mercaptoethanol, 5 mM MgCl2
試料濃度: 0.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-2/1
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2750 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1250 nm
撮影電子線照射量: 79 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)

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解析

EMソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / カテゴリ: モデル精密化
CTF補正タイプ: NONE
3次元再構成解像度: 3.88 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 287141 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: OTHER / 空間: REAL
原子モデル構築PDB-ID: 8GLU

8glu


Accession code: 8GLU / 詳細: TnsC and TnsD were modelled using PDB 8GLU. / Source name: PDB / タイプ: experimental model
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00329652
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.67740602
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d16.8474724
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0424566
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0064854

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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