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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8ffz | ||||||||||||
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タイトル | TFIIIA-TFIIIC-Brf1-TBP complex bound to 5S rRNA gene | ||||||||||||
要素 |
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キーワード | TRANSCRIPTION/DNA / transcription factor / TRANSCRIPTION / TRANSCRIPTION-DNA complex | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 RNA polymerase II sequence-specific DNA-binding transcription factor recruiting activity / 5S class rRNA transcription by RNA polymerase III / transcription factor TFIIIC complex / RNA polymerase III core binding / RNA polymerase III type 1 promoter sequence-specific DNA binding / TFIIA-class transcription factor complex binding / DNA-templated transcription open complex formation / transcription factor TFIIIB complex / RNA polymerase III preinitiation complex assembly / RNA polymerase III transcription regulatory region sequence-specific DNA binding ...RNA polymerase II sequence-specific DNA-binding transcription factor recruiting activity / 5S class rRNA transcription by RNA polymerase III / transcription factor TFIIIC complex / RNA polymerase III core binding / RNA polymerase III type 1 promoter sequence-specific DNA binding / TFIIA-class transcription factor complex binding / DNA-templated transcription open complex formation / transcription factor TFIIIB complex / RNA polymerase III preinitiation complex assembly / RNA polymerase III transcription regulatory region sequence-specific DNA binding / TFIIIC-class transcription factor complex binding / RNA polymerase III type 3 promoter sequence-specific DNA binding / regulation of transcription by RNA polymerase III / RNA polymerase I general transcription initiation factor binding / RNA polymerase III general transcription initiation factor activity / transcription factor TFIIA complex / RNA polymerase I preinitiation complex assembly / transcription preinitiation complex / DNA binding, bending / RNA Polymerase III Transcription Initiation From Type 2 Promoter / RNA polymerase II transcribes snRNA genes / transcription factor TFIID complex / RNA Polymerase II Promoter Escape / RNA Polymerase II Transcription Pre-Initiation And Promoter Opening / RNA Polymerase II Transcription Initiation / RNA Polymerase II Transcription Initiation And Promoter Clearance / RNA polymerase II general transcription initiation factor activity / RNA Polymerase II Pre-transcription Events / transcription initiation at RNA polymerase III promoter / RNA Polymerase I Promoter Escape / nucleolar large rRNA transcription by RNA polymerase I / phosphatase activity / Estrogen-dependent gene expression / transcription by RNA polymerase III / RNA polymerase II core promoter sequence-specific DNA binding / RNA polymerase II preinitiation complex assembly / protein localization to chromatin / TBP-class protein binding / DNA-templated transcription initiation / disordered domain specific binding / DNA-binding transcription factor binding / RNA polymerase II-specific DNA-binding transcription factor binding / transcription regulator complex / DNA-binding transcription factor activity, RNA polymerase II-specific / RNA polymerase II cis-regulatory region sequence-specific DNA binding / negative regulation of DNA-templated transcription / chromatin binding / regulation of DNA-templated transcription / positive regulation of transcription by RNA polymerase II / protein-containing complex / mitochondrion / DNA binding / RNA binding / nucleoplasm / nucleus / metal ion binding / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Talyzina, A. / He, Y. | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 3件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2023 タイトル: Structural basis of TFIIIC-dependent RNA polymerase III transcription initiation. 著者: Anna Talyzina / Yan Han / Chiranjib Banerjee / Susan Fishbain / Alexis Reyes / Reza Vafabakhsh / Yuan He / 要旨: RNA polymerase III (Pol III) is responsible for transcribing 5S ribosomal RNA (5S rRNA), tRNAs, and other short non-coding RNAs. Its recruitment to the 5S rRNA promoter requires transcription factors ...RNA polymerase III (Pol III) is responsible for transcribing 5S ribosomal RNA (5S rRNA), tRNAs, and other short non-coding RNAs. Its recruitment to the 5S rRNA promoter requires transcription factors TFIIIA, TFIIIC, and TFIIIB. Here, we use cryoelectron microscopy (cryo-EM) to visualize the S. cerevisiae complex of TFIIIA and TFIIIC bound to the promoter. Gene-specific factor TFIIIA interacts with DNA and acts as an adaptor for TFIIIC-promoter interactions. We also visualize DNA binding of TFIIIB subunits, Brf1 and TBP (TATA-box binding protein), which results in the full-length 5S rRNA gene wrapping around the complex. Our smFRET study reveals that the DNA within the complex undergoes both sharp bending and partial dissociation on a slow timescale, consistent with the model predicted from our cryo-EM results. Our findings provide new insights into the transcription initiation complex assembly on the 5S rRNA promoter and allow us to directly compare Pol III and Pol II transcription adaptations. #1: ジャーナル: bioRxiv / 年: 2023 タイトル: Structural basis of TFIIIC-dependent RNA Polymerase III transcription initiation. 著者: Anna Talyzina / Yan Han / Chiranjib Banerjee / Susan Fishbain / Alexis Reyes / Reza Vafabakhsh / Yuan He / 要旨: RNA Polymerase III (Pol III) is responsible for transcribing 5S ribosomal RNA (5S rRNA), tRNAs, and other short non-coding RNAs. Its recruitment to the 5S rRNA promoter requires transcription factors ...RNA Polymerase III (Pol III) is responsible for transcribing 5S ribosomal RNA (5S rRNA), tRNAs, and other short non-coding RNAs. Its recruitment to the 5S rRNA promoter requires transcription factors TFIIIA, TFIIIC, and TFIIIB. Here we use cryo-electron microscopy to visualize the complex of TFIIIA and TFIIIC bound to the promoter. Brf1-TBP binding further stabilizes the DNA, resulting in the full-length 5S rRNA gene wrapping around the complex. Our smFRET study reveals that the DNA undergoes both sharp bending and partial dissociation on a slow timescale, consistent with the model predicted from our cryo-EM results. Our findings provide new insights into the mechanism of how the transcription initiation complex assembles on the 5S rRNA promoter, a crucial step in Pol III transcription regulation. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8ffz.cif.gz | 917.6 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8ffz.ent.gz | 702.2 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8ffz.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8ffz_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8ffz_full_validation.pdf.gz | 1.5 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8ffz_validation.xml.gz | 117.7 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8ffz_validation.cif.gz | 185.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ff/8ffz ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ff/8ffz | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 29071MC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-Transcription factor ... , 8種, 8分子 ABCDEFGH
#1: タンパク質 | 分子量: 52522.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: PZF1, TFC2, TFIIIA, YPR186C, P9677.9 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P39933 |
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#2: タンパク質 | 分子量: 132313.062 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC3, TSV115, YAL001C, FUN24 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P34111 |
#3: タンパク質 | 分子量: 120388.609 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC4, PCF1, YGR047C / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P33339 |
#4: タンパク質 | 分子量: 73649.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC1, YBR123C, YBR0919 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P32367 |
#5: タンパク質 | 分子量: 74803.297 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC6, YDR362C / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: Q06339 |
#6: タンパク質 | 分子量: 67755.172 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC8, YPL007C / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: Q12308 |
#7: タンパク質 | 分子量: 49198.898 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) 遺伝子: TFC7, YOR110W, O3234, YOR3234w / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: Q12415 |
#8: タンパク質 | 分子量: 82097.867 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) 遺伝子: BRF1, PCF4, TDS4, YGR246C, SPT15, BTF1, TBP1, YER148W 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P29056, UniProt: P13393 |
-DNA鎖 , 2種, 2分子 IJ
#9: DNA鎖 | 分子量: 52636.594 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: GenBank: 834774822 |
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#10: DNA鎖 | 分子量: 52934.797 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: GenBank: 834774822 |
-非ポリマー , 1種, 9分子
#11: 化合物 | ChemComp-ZN / |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: TFIIIA-TFIIIC-Brf1-TBP complex bound to 5SrRNA gene / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#10 / 由来: RECOMBINANT |
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分子量 | 値: 810 kDa/nm / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) |
由来(組換発現) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
緩衝液 | pH: 7.9 |
試料 | 濃度: 0.02 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1 |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 5000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 2000 nm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 60 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) |
-解析
ソフトウェア | 名称: UCSF ChimeraX / バージョン: 1.3/v9 / 分類: モデル構築 / URL: https://www.rbvi.ucsf.edu/chimerax/ / Os: macOS / タイプ: package | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 5748589 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 78512 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL |