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万見
- PDB-8dep: Cryo-EM structure of the human reduced folate carrier, apo condition -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8dep
タイトルCryo-EM structure of the human reduced folate carrier, apo condition
要素Reduced folate transporter,Soluble cytochrome b562
キーワードTRANSPORT PROTEIN / reduced folate carrier / membrane protein / membrane transporter / methotrexate / SLC19A1 / solute carrier family 19
機能・相同性
機能・相同性情報


folate:monoatomic anion antiporter activity / methotrexate transport / folic acid transmembrane transporter activity / methotrexate transmembrane transporter activity / folic acid transport / folate transmembrane transport / folate import across plasma membrane / cyclic-GMP-AMP transmembrane transporter activity / cyclic-GMP-AMP transmembrane import across plasma membrane / 2',3'-cyclic GMP-AMP binding ...folate:monoatomic anion antiporter activity / methotrexate transport / folic acid transmembrane transporter activity / methotrexate transmembrane transporter activity / folic acid transport / folate transmembrane transport / folate import across plasma membrane / cyclic-GMP-AMP transmembrane transporter activity / cyclic-GMP-AMP transmembrane import across plasma membrane / 2',3'-cyclic GMP-AMP binding / organic anion transport / xenobiotic transmembrane transport / positive regulation of cGAS/STING signaling pathway / Metabolism of folate and pterines / organic anion transmembrane transporter activity / folic acid binding / antiporter activity / folic acid metabolic process / xenobiotic transmembrane transporter activity / transport across blood-brain barrier / female pregnancy / electron transport chain / brush border membrane / basolateral plasma membrane / electron transfer activity / periplasmic space / apical plasma membrane / iron ion binding / heme binding / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
Reduced folate transporter SLC19A1 / Reduced folate carrier / Reduced folate carrier / Cytochrome b562 / Cytochrome b562 / MFS transporter superfamily / Cytochrome c/b562
類似検索 - ドメイン・相同性
Soluble cytochrome b562 / Reduced folate transporter
類似検索 - 構成要素
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å
データ登録者Wright, N.J. / Fedor, J.G. / Lee, S.-Y.
資金援助 米国, 3件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM137421 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM129547 米国
American Heart Association20PRE35210058 米国
引用ジャーナル: Nature / 年: 2022
タイトル: Methotrexate recognition by the human reduced folate carrier SLC19A1.
著者: Nicholas J Wright / Justin G Fedor / Han Zhang / Pyeonghwa Jeong / Yang Suo / Jiho Yoo / Jiyong Hong / Wonpil Im / Seok-Yong Lee /
要旨: Folates are essential nutrients with important roles as cofactors in one-carbon transfer reactions, being heavily utilized in the synthesis of nucleic acids and the metabolism of amino acids during ...Folates are essential nutrients with important roles as cofactors in one-carbon transfer reactions, being heavily utilized in the synthesis of nucleic acids and the metabolism of amino acids during cell division. Mammals lack de novo folate synthesis pathways and thus rely on folate uptake from the extracellular milieu. The human reduced folate carrier (hRFC, also known as SLC19A1) is the major importer of folates into the cell, as well as chemotherapeutic agents such as methotrexate. As an anion exchanger, RFC couples the import of folates and antifolates to anion export across the cell membrane and it is a major determinant in methotrexate (antifolate) sensitivity, as genetic variants and its depletion result in drug resistance. Despite its importance, the molecular basis of substrate specificity by hRFC remains unclear. Here we present cryo-electron microscopy structures of hRFC in the apo state and captured in complex with methotrexate. Combined with molecular dynamics simulations and functional experiments, our study uncovers key determinants of hRFC transport selectivity among folates and antifolate drugs while shedding light on important features of anion recognition by hRFC.
履歴
登録2022年6月21日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02022年9月21日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年10月12日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first ..._citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _citation_author.identifier_ORCID
改定 1.22024年6月12日Group: Data collection / Refinement description
カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond ...chem_comp_atom / chem_comp_bond / em_3d_fitting_list / pdbx_initial_refinement_model
Item: _em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id ..._em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id / _em_3d_fitting_list.source_name / _em_3d_fitting_list.type

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Reduced folate transporter,Soluble cytochrome b562
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)79,7145
ポリマ－74,7971
非ポリマー4,9174
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551
Buried area0 Å2
ΔGint0 kcal/mol
Surface area20380 Å2
手法PISA

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要素

#1: タンパク質 Reduced folate transporter,Soluble cytochrome b562 / FOLT / Intestinal folate carrier 1 / IFC-1 / Placental folate transporter / Reduced folate carrier ...FOLT / Intestinal folate carrier 1 / IFC-1 / Placental folate transporter / Reduced folate carrier protein / RFC / hRFC / Reduced folate transporter 1 / RFT-1 / Solute carrier family 19 member 1 / hSLC19A1 / Cytochrome b-562


分子量: 74797.195 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
詳細: UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome ...詳細: UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562,UNPID P41440 residues 215-241 removed and replaced with a fragment of soluble cytochrome b562
由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: SLC19A1, FLOT1, RFC1, cybC / 細胞株 (発現宿主): HEK293S GnTI- / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P41440, UniProt: P0ABE7
#2: 化合物
ChemComp-AJP / Digitonin / ジギトニン


分子量: 1229.312 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: C56H92O29 / コメント: 可溶化剤*YM
研究の焦点であるリガンドがあるかN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Human reduced folate carrier / タイプ: COMPLEX / 詳細: apo state / Entity ID: #1 / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
由来(組換発現)生物種: Homo sapiens (ヒト)
緩衝液pH: 8
試料濃度: 5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3
急速凍結装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 85 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 81000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 1800 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 800 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 2.3 sec. / 電子線照射量: 60 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 12201
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV
画像スキャン横: 5760 / 縦: 4092

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
4cryoSPARC3CTF補正
5CTFFIND4CTF補正
8Coot0.88モデルフィッティング
10cryoSPARC3初期オイラー角割当
11cryoSPARC3最終オイラー角割当
13cryoSPARC3３次元再構成
14PHENIX1.13-2998モデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 2536392
3次元再構成解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 138522 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築B value: 75 / プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL
原子モデル構築PDB-ID: 7XT7

7xt7


PDB chain-ID: A / Accession code: 7XT7 / Source name: PDB / タイプ: experimental model
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.0033333
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.9664615
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d12.2041046
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.048582
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.005521

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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