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万見
- PDB-6y6k: Cryo-EM structure of a Phenuiviridae L protein -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 6y6k
タイトルCryo-EM structure of a Phenuiviridae L protein
要素RNA-dependent RNA polymerase
キーワードVIRAL PROTEIN / Bunyavirus / Phenuiviridae / L protein / viral polymerase / cap-snatching
機能・相同性
機能・相同性情報


host cell endoplasmic reticulum / virion component / host cell endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment / host cell Golgi apparatus / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / hydrolase activity / RNA-directed RNA polymerase / viral RNA genome replication / RNA-dependent RNA polymerase activity / DNA-templated transcription / metal ion binding
類似検索 - 分子機能
RNA-directed RNA polymerase L, PA-C-like domain / RNA-directed RNA polymerase L, PA-C-like domain / RNA-directed RNA polymerase L, N-terminal / L protein N-terminus / RNA-dependent RNA polymerase, bunyaviral / Bunyavirus RNA dependent RNA polymerase / RNA-directed RNA polymerase, negative-strand RNA virus / RdRp of negative ssRNA viruses with segmented genomes catalytic domain profile.
類似検索 - ドメイン・相同性
RNA-directed RNA polymerase L
類似検索 - 構成要素
生物種SFTS virus AH12 (ウイルス)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.78 Å
データ登録者Vogel, D. / Thorkelsson, S.R. / Quemin, E. / Meier, K. / Kouba, T. / Gogrefe, N. / Busch, C. / Reindl, S. / Guenther, S. / Cusack, S. ...Vogel, D. / Thorkelsson, S.R. / Quemin, E. / Meier, K. / Kouba, T. / Gogrefe, N. / Busch, C. / Reindl, S. / Guenther, S. / Cusack, S. / Gruenewald, K. / Rosenthal, M.
資金援助 ドイツ, 2件
組織認可番号国
Leibniz AssociationK27/2017 ドイツ
German Research Foundation (DFG)INST 152/777-1 FUGG ドイツ
引用
ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2020
タイトル: Structural and functional characterization of the severe fever with thrombocytopenia syndrome virus L protein.
著者: Dominik Vogel / Sigurdur Rafn Thorkelsson / Emmanuelle R J Quemin / Kristina Meier / Tomas Kouba / Nadja Gogrefe / Carola Busch / Sophia Reindl / Stephan Günther / Stephen Cusack / Kay ...著者: Dominik Vogel / Sigurdur Rafn Thorkelsson / Emmanuelle R J Quemin / Kristina Meier / Tomas Kouba / Nadja Gogrefe / Carola Busch / Sophia Reindl / Stephan Günther / Stephen Cusack / Kay Grünewald / Maria Rosenthal /
要旨: The Bunyavirales order contains several emerging viruses with high epidemic potential, including Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV). The lack of medical countermeasures, such ...The Bunyavirales order contains several emerging viruses with high epidemic potential, including Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV). The lack of medical countermeasures, such as vaccines and antivirals, is a limiting factor for the containment of any virus outbreak. To develop such antivirals a profound understanding of the viral replication process is essential. The L protein of bunyaviruses is a multi-functional and multi-domain protein performing both virus transcription and genome replication and, therefore, is an ideal drug target. We established expression and purification procedures for the full-length L protein of SFTSV. By combining single-particle electron cryo-microscopy and X-ray crystallography, we obtained 3D models covering ∼70% of the SFTSV L protein in the apo-conformation including the polymerase core region, the endonuclease and the cap-binding domain. We compared this first L structure of the Phenuiviridae family to the structures of La Crosse peribunyavirus L protein and influenza orthomyxovirus polymerase. Together with a comprehensive biochemical characterization of the distinct functions of SFTSV L protein, this work provides a solid framework for future structural and functional studies of L protein-RNA interactions and the development of antiviral strategies against this group of emerging human pathogens.
#1: ジャーナル: Acta Crystallogr D Struct Biol / 年: 2018
タイトル: Real-space refinement in PHENIX for cryo-EM and crystallography.
著者: Pavel V Afonine / Billy K Poon / Randy J Read / Oleg V Sobolev / Thomas C Terwilliger / Alexandre Urzhumtsev / Paul D Adams /
要旨: This article describes the implementation of real-space refinement in the phenix.real_space_refine program from the PHENIX suite. The use of a simplified refinement target function enables very fast ...This article describes the implementation of real-space refinement in the phenix.real_space_refine program from the PHENIX suite. The use of a simplified refinement target function enables very fast calculation, which in turn makes it possible to identify optimal data-restraint weights as part of routine refinements with little runtime cost. Refinement of atomic models against low-resolution data benefits from the inclusion of as much additional information as is available. In addition to standard restraints on covalent geometry, phenix.real_space_refine makes use of extra information such as secondary-structure and rotamer-specific restraints, as well as restraints or constraints on internal molecular symmetry. The re-refinement of 385 cryo-EM-derived models available in the Protein Data Bank at resolutions of 6 Å or better shows significant improvement of the models and of the fit of these models to the target maps.
#2: ジャーナル: J Struct Biol / 年: 2012
タイトル: RELION: implementation of a Bayesian approach to cryo-EM structure determination.
著者: Sjors H W Scheres /
要旨: RELION, for REgularized LIkelihood OptimizatioN, is an open-source computer program for the refinement of macromolecular structures by single-particle analysis of electron cryo-microscopy (cryo-EM) ...RELION, for REgularized LIkelihood OptimizatioN, is an open-source computer program for the refinement of macromolecular structures by single-particle analysis of electron cryo-microscopy (cryo-EM) data. Whereas alternative approaches often rely on user expertise for the tuning of parameters, RELION uses a Bayesian approach to infer parameters of a statistical model from the data. This paper describes developments that reduce the computational costs of the underlying maximum a posteriori (MAP) algorithm, as well as statistical considerations that yield new insights into the accuracy with which the relative orientations of individual particles may be determined. A so-called gold-standard Fourier shell correlation (FSC) procedure to prevent overfitting is also described. The resulting implementation yields high-quality reconstructions and reliable resolution estimates with minimal user intervention and at acceptable computational costs.
履歴
登録2020年2月26日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02020年4月8日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12020年4月29日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_ASTM / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _citation_author.name
改定 1.22020年6月10日Group: Database references / カテゴリ: citation
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last
改定 1.32024年5月22日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond / database_2
Item: _database_2.pdbx_DOI / _database_2.pdbx_database_accession

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-10706
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: RNA-dependent RNA polymerase
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)235,7672
ポリマ－235,7431
非ポリマー241
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551
Buried area120 Å2
ΔGint-8 kcal/mol
Surface area60910 Å2
手法PISA

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要素

#1: タンパク質 RNA-dependent RNA polymerase


分子量: 235742.531 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) SFTS virus AH12 (ウイルス) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: F1BV96
#2: 化合物 ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus L Protein
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.238 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: SFTS virus AH12 (ウイルス)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
緩衝液pH: 7
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
120 mMHEPESC8H18N2O4S1
2500 mMsodium chlorideNaCl1
320 mMmagnesium chlorideMgCl1
試料濃度: 0.15 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持詳細: Harrick Plasma cleaner / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE-PROPANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K / 詳細: Blot for 2s using blotting force -10

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 105000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 3000 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 70 µm / アライメント法: BASIC
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 3 sec. / 電子線照射量: 59.45 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2626
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV

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解析

ソフトウェア
名称バージョン分類
phenix.real_space_refine1.17_3644精密化
PHENIX1.17_3644精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
2EPU1.X画像取得
3Warp1.0.7画像取得
4RELION3画像取得
6Gctf1.18CTF補正
11RELION3初期オイラー角割当
12RELION3最終オイラー角割当
13RELION3分類
14RELION3３次元再構成
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 780000
詳細: Particles were picked with Warp's pretrained agent BoxNet2Mask_20180918
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 3.78 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 220000 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築B value: 225.217 / プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: REAL
精密化交差検証法: NONE
立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2
原子変位パラメータBiso mean: 64.75 Å2
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.011710568
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.981814272
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.06011585
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.00581821
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d22.16753936

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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