0.30-0.35 mM [U-15N] RbpA, 100 mM potassium chloride, 25 mM potassium phosphate, 0.5 mM DTT, 0.5 mM EDTA, 0.02 w/v sodium azide, 0.5 mM TCEP, 0.2 mM AEBSF protease inhibitor, 100% D2O
100% D2O
2
0.30-0.35 mM [U-13C; U-15N]-His-Phe-Tyr-Trp RbpA, 100 mM potassium chloride, 25 mM potassium phosphate, 0.5 mM DTT, 0.5 mM EDTA, 0.02 w/v sodium azide, 0.5 mM TCEP, 0.2 mM AEBSF protease inhibitor, 95% H2O/5% D2O
95% H2O/5% D2O
3
0.30-0.35 mM [U-15N] RbpA, 100 mM potassium chloride, 25 mM potassium phosphate, 0.5 mM DTT, 0.5 mM EDTA, 0.02 w/v sodium azide, 0.5 mM TCEP, 0.2 mM AEBSF protease inhibitor, 95% H2O/5% D2O
95% H2O/5% D2O
試料
濃度 (mg/ml)
単位
構成要素
Isotopic labeling
Conc. range (mg/ml)
Solution-ID
mM
RbpA-1
[U-15N]
0.30-0.35
1
100mM
potassium chloride-2
1
25mM
potassium phosphate-3
1
0.5mM
DTT-4
1
0.5mM
EDTA-5
1
0.02w/v
sodium azide-6
1
0.5mM
TCEP-7
1
0.2mM
AEBSF protease inhibitor-8
1
mM
RbpA-9
[U-13C; U-15N]-His-Phe-Tyr-Trp
0.30-0.35
2
100mM
potassium chloride-10
2
25mM
potassium phosphate-11
2
0.5mM
DTT-12
2
0.5mM
EDTA-13
2
0.02w/v
sodium azide-14
2
0.5mM
TCEP-15
2
0.2mM
AEBSF protease inhibitor-16
2
mM
RbpA-17
[U-15N]
0.30-0.35
3
100mM
potassium chloride-18
3
25mM
potassium phosphate-19
3
0.5mM
DTT-20
3
0.5mM
EDTA-21
3
0.02w/v
sodium azide-22
3
0.5mM
TCEP-23
3
0.2mM
AEBSF protease inhibitor-24
3
試料状態
イオン強度: 0.1 / pH: 6.5 / 圧: ambient / 温度: 308 K
-
NMR測定
NMRスペクトロメーター
タイプ
製造業者
モデル
磁場強度 (MHz)
Spectrometer-ID
Bruker Avance
Bruker
AVANCE
600
1
Bruker DRX
Bruker
DRX
600
2
Bruker Avance II
Bruker
AVANCEII
800
3
-
解析
NMR software
名称
開発者
分類
TopSpin
BrukerBiospin
解析
TopSpin
BrukerBiospin
collection
Amber
Case, Darden, Cheatham, III, Simmerling, Wang, Duke, Luo, ... andKollman
精密化
CYANA
Guntert, MumenthalerandWuthrich
構造決定
Sparky
Goddard
データ解析
精密化
手法: simulated annealing / ソフトェア番号: 1
代表構造
選択基準: closest to the average
NMRアンサンブル
コンフォーマー選択の基準: structures with the lowest energy 計算したコンフォーマーの数: 100 / 登録したコンフォーマーの数: 35