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- EMDB-49516: Structure of R2 retrotransposon protein from Taeniopygia guttata ... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-49516
タイトルStructure of R2 retrotransposon protein from Taeniopygia guttata initiating target-primed reverse transcription
マップデータ
試料
  • 複合体: R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage
    • タンパク質・ペプチド: R2 retrotransposon protein
    • DNA: Bottom strand for target rDNA
    • DNA: Primer
    • RNA: 3'UTR RNA
    • DNA: Top strand for target rDNA
  • リガンド: ZINC ION
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: THYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE
キーワードRetrotransposon / Reverse transcriptase / RNA BINDING PROTEIN-RNA-DNA complex
生物種Taeniopygia guttata (キンカチョウ) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å
データ登録者Thawani A / Collins K / Nogales E
資金援助 米国, 2件
OrganizationGrant number国
Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)DP1 HL156819 米国
引用ジャーナル: Sci Adv / 年: 2025
タイトル: Structures of vertebrate R2 retrotransposon complexes during target-primed reverse transcription and after second-strand nicking.
著者: Akanksha Thawani / Anthony Rodríguez-Vargas / Briana Van Treeck / Nozhat T Hassan / David L Adelson / Eva Nogales / Kathleen Collins /
要旨: R2 retrotransposons are site-specific eukaryotic non-long terminal repeat retrotransposons that copy and paste into gene loci encoding ribosomal RNAs. Recently, we demonstrated that avian A-clade R2 ...R2 retrotransposons are site-specific eukaryotic non-long terminal repeat retrotransposons that copy and paste into gene loci encoding ribosomal RNAs. Recently, we demonstrated that avian A-clade R2 proteins achieve efficient and precise insertion of transgenes into their native safe-harbor loci in human cells. The features of A-clade R2 proteins that support gene insertion are not well characterized. Here, we report high-resolution cryo-electron microscopy structures of two vertebrate A-clade R2 proteins at the initiation of target-primed reverse transcription and after cDNA synthesis and second-strand nicking. Using biochemical and cellular assays, we illuminate the basis for high selectivity of template use and unique roles for each of the three zinc-finger domains in nucleic acid recognition. Reverse transcriptase active site architecture is reinforced by an unanticipated insertion motif specific to vertebrate A-clade R2 proteins. Our work provides the first insights into A-clade R2 protein structure during gene insertion and may enable future improvement and adaptation of R2-based systems for precise transgene insertion.
履歴
登録2025年3月2日-
ヘッダ(付随情報) 公開2025年6月18日-
マップ公開2025年6月18日-
更新2025年7月2日-
現状2025年7月2日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_49516.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_49516.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 42.9 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.05 Å/pix.
x 224 pix.
= 234.752 Å		1.05 Å/pix.
x 224 pix.
= 234.752 Å		1.05 Å/pix.
x 224 pix.
= 234.752 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.048 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0256
最小 - 最大-0.062972754 - 0.1316263
平均 (標準偏差)0.00029006152 (±0.0038644671)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ224224224
Spacing224224224
セルA=B=C: 234.752 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_49516_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_49516_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage

全体名称: R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage
要素
  • 複合体: R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage
    • タンパク質・ペプチド: R2 retrotransposon protein
    • DNA: Bottom strand for target rDNA
    • DNA: Primer
    • RNA: 3'UTR RNA
    • DNA: Top strand for target rDNA
  • リガンド: ZINC ION
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: THYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE

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超分子 #1: R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage

超分子名称: R2 retrotransposon protein in TPRT initiation stage / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#5
由来(天然)生物種: Taeniopygia guttata (キンカチョウ)
分子量理論値: 200 KDa

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分子 #1: R2 retrotransposon protein

分子名称: R2 retrotransposon protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Taeniopygia guttata (キンカチョウ)
分子量理論値: 133.494391 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MVTVPDKNPP CPCCGTRVNS VLNLIEHLKV SHGKRGVCFR CAKCGKENSN YHSVVCHFPK CRGPETEKAP AGEWICEVCN RDFTTKIGL GQHKRLAHPA VRNQERIVAS QPKETSNRGA HKRCWTKEEE ELLIRLEAQF EGNKNINKLI AEHITTKTAK Q ISDKRRLL ...文字列:
MVTVPDKNPP CPCCGTRVNS VLNLIEHLKV SHGKRGVCFR CAKCGKENSN YHSVVCHFPK CRGPETEKAP AGEWICEVCN RDFTTKIGL GQHKRLAHPA VRNQERIVAS QPKETSNRGA HKRCWTKEEE ELLIRLEAQF EGNKNINKLI AEHITTKTAK Q ISDKRRLL SRKPAEEPRE EPGTCHHTRR AAASLRTEPE MSHHAQAEDR DNGPGRRPLP GRAAAGGRTM DEIRRHPDKG NG QQRPTKQ KSEEQLQAYY KKTLEERLSA GALNTFPRAF KQVMEGRDIK LVINQTAQDC FGCLESISQI RTATRDKKDT VTR EKHPKK PFQKWMKDRA IKKGNYLRFQ RLFYLDRGKL AKIILDDIEC LSCDIPLSEI YSVFKTRWET TGSFKSLGDF KTYG KADNT AFRELITAKE IEKNVQEMSK GSAPGPDGIT LGDVVKMDPE FSRTMEIFNL WLTTGKIPDM VRGCRTVLIP KSSKP DRLK DINNWRPITI GSILLRLFSR IVTARLSKAC PLNPRQRGFI RAAGCSENLK LLQTIIWSAK REHRPLGVVF VDIAKA FDT VSHQHIIHAL QQREVDPHIV GLVSNMYENI STYITTKRNT HTDKIQIRVG VKQGDPMSPL LFNLAMDPLL CKLEESG KG YHRGQSSITA MAFADDLVLL SDSWENMNTN ISILETFCNL TGLKTQGQKC HGFYIKPTKD SYTINDCAAW TINGTPLN M IDPGESEKYL GLQFDPWIGI ARSGLSTKLD FWLQRIDQAP LKPLQKTDIL KTYTIPRLIY IADHSEVKTA LLETLDQKI RTAVKEWLHL PPCTCDAILY SSTRDGGLGI TKLAGLIPSV QARRLHRIAQ SSDDTMKCFM EKEKMEQLHK KLWIQAGGDR ENIPSIWEA PPSSEPPNNV STNSEWEAPT QKDKFPKPCN WRKNEFKKWT KLASQGRGIV NFERDKISNH WIQYYRRIPH R KLLTALQL RANVYPTREF LARGRQDQYI KACRHCDADI ESCAHIIGNC PVTQDARIKR HNYICELLLE EAKKKDWVVF KE PHIRDSN KELYKPDLIF VKDARALVVD VTVRYEAAKS SLEEAAAEKV RKYKHLETEV RHLTNAKDVT FVGFPLGARG KWH QDNFKL LTELGLSKSR QVKMAETFST VALFSSVDIV HMFASRARKS MVM

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分子 #2: Bottom strand for target rDNA

分子名称: Bottom strand for target rDNA / タイプ: dna / ID: 2 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 21.507758 KDa
配列文字列: (DT)(DT)(DA)(DG)(DA)(DT)(DG)(DA)(DC)(DG) (DA)(DG)(DG)(DC)(DA)(DT)(DT)(DT)(DG)(DG) (DC)(DT)(DA)(DC)(DC)(DT)(DT)(DA)(DA) (DG)(DA)(DG)(DA)(DG)(DT)(DC)(DA)(DT)(DA) (DG) (DT)(DT)(DA)(DC)(DT) ...文字列:
(DT)(DT)(DA)(DG)(DA)(DT)(DG)(DA)(DC)(DG) (DA)(DG)(DG)(DC)(DA)(DT)(DT)(DT)(DG)(DG) (DC)(DT)(DA)(DC)(DC)(DT)(DT)(DA)(DA) (DG)(DA)(DG)(DA)(DG)(DT)(DC)(DA)(DT)(DA) (DG) (DT)(DT)(DA)(DC)(DT)(DC)(DC)(DC) (DG)(DC)(DC)(DG)(DT)(DT)(DT)(DA)(DC)(DC) (DC)(DG) (DC)(DG)(DC)(DT)(DT)(DC)(DA) (DC)(DA)(DG)

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分子 #3: Primer

分子名称: Primer / タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 3.997607 KDa
配列文字列:
(DG)(DG)(DC)(DA)(DT)(DT)(DT)(DG)(DG)(DC) (DT)(DA)(DT)

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分子 #5: Top strand for target rDNA

分子名称: Top strand for target rDNA / タイプ: dna / ID: 5 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 21.654875 KDa
配列文字列: (DC)(DT)(DG)(DT)(DG)(DA)(DA)(DG)(DC)(DG) (DC)(DG)(DG)(DG)(DT)(DA)(DA)(DA)(DC)(DG) (DG)(DC)(DG)(DG)(DG)(DA)(DG)(DT)(DA) (DA)(DC)(DT)(DA)(DT)(DG)(DA)(DC)(DT)(DC) (DT) (DC)(DT)(DT)(DA)(DA) ...文字列:
(DC)(DT)(DG)(DT)(DG)(DA)(DA)(DG)(DC)(DG) (DC)(DG)(DG)(DG)(DT)(DA)(DA)(DA)(DC)(DG) (DG)(DC)(DG)(DG)(DG)(DA)(DG)(DT)(DA) (DA)(DC)(DT)(DA)(DT)(DG)(DA)(DC)(DT)(DC) (DT) (DC)(DT)(DT)(DA)(DA)(DG)(DG)(DT) (DA)(DG)(DC)(DC)(DA)(DA)(DA)(DT)(DG)(DC) (DC)(DT) (DC)(DG)(DT)(DC)(DA)(DT)(DC) (DT)(DA)(DA)

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分子 #4: 3'UTR RNA

分子名称: 3'UTR RNA / タイプ: rna / ID: 4 / コピー数: 1
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 95.589312 KDa
配列文字列: UAGGGUAGAU AAUCUUUGUA UAGUGGGGGG GGAUCUCAUG UACCGGGUUU CUUUUAUUUG AUUUUCAAUA AAACAGACGG UAGCUAGGU UCGCAAGGCA GCCACAAGCC AAAGAUAGGU AGGGUGCUCA UAGUGAGUAG GGACAGUGCC UUUUGAUUCA C AACGCGUC ...文字列:
UAGGGUAGAU AAUCUUUGUA UAGUGGGGGG GGAUCUCAUG UACCGGGUUU CUUUUAUUUG AUUUUCAAUA AAACAGACGG UAGCUAGGU UCGCAAGGCA GCCACAAGCC AAAGAUAGGU AGGGUGCUCA UAGUGAGUAG GGACAGUGCC UUUUGAUUCA C AACGCGUC AAUACCAUCU GACACGGAUA CCCUUACCGG ACUUGUCAUG AUCUCCCAGA CUUGUCCAAG GUGGACGGGC CA CCUUUAC UUAACCCGGA AAAGGAACAU AUAUUAAUUA UAUGUGUUCG GAAAAUAGCC

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分子 #6: ZINC ION

分子名称: ZINC ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 4 / 式: ZN
分子量理論値: 65.409 Da

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分子 #7: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 7 / コピー数: 1 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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分子 #8: THYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE

分子名称: THYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 8 / コピー数: 1 / 式: TTP
分子量理論値: 482.168 Da
Chemical component information

ChemComp-TTP:
THYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.1 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡法

顕微鏡TFS KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
デジタル化 - サイズ - 横: 11520 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 8184 pixel / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 5096 / 平均露光時間: 1.0 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm / 倍率（公称値）: 81000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
初期モデルモデルのタイプ: INSILICO MODEL / In silico モデル: RELION SGD
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 18892
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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