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- EMDB-34811: Streptococcus thermophilus Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex, conf... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-34811
タイトルStreptococcus thermophilus Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex, conformation2
マップデータStreptococcus thermophilus Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex, conformation2
試料
  • 複合体: Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex
    • タンパク質・ペプチド: Cas1
    • タンパク質・ペプチド: Cas2-DnaQ
キーワードCRISPR-Cas / adaptation / IMMUNE SYSTEM
生物種Streptococcus thermophilus (ストレプトコッカス・サリバリウス 亜種 サーモフィラス)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.12 Å
データ登録者Chen Q / Yu Y / Luo Y
資金援助1件
OrganizationGrant number国
Not funded
引用ジャーナル: Innovation (Camb) / 年: 2023
タイトル: DnaQ mediates directional spacer acquisition in the CRISPR-Cas system by a time-dependent mechanism.
著者: Dongmei Tang / Tingting Jia / Yongbo Luo / Biqin Mou / Jie Cheng / Shiqian Qi / Shaohua Yao / Zhaoming Su / Yamei Yu / Qiang Chen /
要旨: In the spacer acquisition stage of CRISPR-Cas immunity, spacer orientation and protospacer adjacent motif (PAM) removal are two prerequisites for functional spacer integration. Cas4 has been ...In the spacer acquisition stage of CRISPR-Cas immunity, spacer orientation and protospacer adjacent motif (PAM) removal are two prerequisites for functional spacer integration. Cas4 has been implicated in both processing the prespacer and determining the spacer orientation. In Cas4-lacking systems, host 3'-5' DnaQ family exonucleases were recently reported to play a Cas4-like role. However, the molecular details of DnaQ functions remain elusive. Here, we characterized the spacer acquisition of the adaptation module of the type I-E system, in which a DnaQ domain naturally fuses with Cas2. We presented X-ray crystal structures and cryo-electron microscopy structures of this adaptation module. Our biochemical data showed that DnaQ trimmed PAM-containing and PAM-deficient overhangs with different efficiencies. Based on these results, we proposed a time-dependent model for DnaQ-mediated spacer acquisition to elucidate PAM removal and spacer orientation determination in Cas4-lacking CRISPR-Cas systems.
履歴
登録2022年11月18日-
ヘッダ(付随情報) 公開2023年9月13日-
マップ公開2023年9月13日-
更新2023年9月20日-
現状2023年9月20日処理サイト: PDBj / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_34811.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_34811.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 42.9 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Streptococcus thermophilus Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex, conformation2
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.84 Å/pix.
x 224 pix.
= 188.16 Å		0.84 Å/pix.
x 224 pix.
= 188.16 Å		0.84 Å/pix.
x 224 pix.
= 188.16 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.84 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.148
最小 - 最大-0.46363914 - 0.75707215
平均 (標準偏差)0.005066233 (±0.039027963)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ224224224
Spacing224224224
セルA=B=C: 188.15999 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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ハーフマップ: the first half map of conformation2

ファイルemd_34811_half_map_1.map
注釈the first half map of conformation2
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: the second half map of conformation2

ファイルemd_34811_half_map_2.map
注釈the second half map of conformation2
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex

全体名称: Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex
要素
  • 複合体: Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex
    • タンパク質・ペプチド: Cas1
    • タンパク質・ペプチド: Cas2-DnaQ

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超分子 #1: Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex

超分子名称: Cas1-Cas2-DnaQ-prespacer complex / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
由来(天然)生物種: Streptococcus thermophilus (ストレプトコッカス・サリバリウス 亜種 サーモフィラス)

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分子 #1: Cas1

分子名称: Cas1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Streptococcus thermophilus (ストレプトコッカス・サリバリウス 亜種 サーモフィラス)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: GASGSMVEKN GAKKTSLREL PKISDRVSFI YVEHAKINRV DSAITVLDSR GTVRIPAAMI GVLLLGPGTD ISHRAVELIG DTGTSMVWVG ERGVRQYAHG RSLAHSTKFL EKQAKLVSNS RLRLAVARKM YQMRFPDEDV SAMTMQQLRG REGARVRRVY RLQSEKYQVS ...文字列:
GASGSMVEKN GAKKTSLREL PKISDRVSFI YVEHAKINRV DSAITVLDSR GTVRIPAAMI GVLLLGPGTD ISHRAVELIG DTGTSMVWVG ERGVRQYAHG RSLAHSTKFL EKQAKLVSNS RLRLAVARKM YQMRFPDEDV SAMTMQQLRG REGARVRRVY RLQSEKYQVS WTKREYNPDD FEGGDIVNQA LSAANVALYG LVHSIVIALG ASPGLGFVHT GHDLSFIYDI ADLYKAELTI PLAFEIAANF TEIDDIGKIA RQKVRDSFVD GKLIVRIVQD IQYLFDLDDD EELLVDTLSL WDDKDMLVKH GVSYKEEL

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分子 #2: Cas2-DnaQ

分子名称: Cas2-DnaQ / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Streptococcus thermophilus (ストレプトコッカス・サリバリウス 亜種 サーモフィラス)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MPFTVVTLKS VPPSLRGDLT KWMQEIAIGV YVGNFNSRIR EKLWNRIQAN VGEGEATISY YYRNEIGYQF DMINSQKSVV DFDGIPLVLI PNSKTSSENY PKLGYSNAAK SRKIKRYSSY RGPQANSLKP YVVIDIETDG LDEKKNTIIE IGAVKFNGQQ VEEFNALIKY ...文字列:
MPFTVVTLKS VPPSLRGDLT KWMQEIAIGV YVGNFNSRIR EKLWNRIQAN VGEGEATISY YYRNEIGYQF DMINSQKSVV DFDGIPLVLI PNSKTSSENY PKLGYSNAAK SRKIKRYSSY RGPQANSLKP YVVIDIETDG LDEKKNTIIE IGAVKFNGQQ VEEFNALIKY EEKLPPTIFK LTGISKSLLD QEGRDLKEVL SEFLLFIGDL TLVGYNIHFD IQFINNKLNK FGLPLLINKT HDIMRYVKDE KLFLDNYQLQ TALKSYGIED SVPHRALKDA RLIYHLSTKV NKFLARMKEK S

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.5
凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 QUANTUM (4k x 4k)
平均電子線量: 65.4 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.465 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.213 µm
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.12 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 16289
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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