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- EMDB-23757: Cryo-electron microscopy structure of TnsC(1-503)A225V bound to DNA -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-23757
タイトルCryo-electron microscopy structure of TnsC(1-503)A225V bound to DNA
マップデータ
試料
  • 複合体: Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.
    • 複合体: TnsC(1-503)A225V bound to DNA
      • タンパク質・ペプチド: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
      • DNA: DNA (5'-D(P*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*C)-3')
      • DNA: DNA (5'-D(P*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*G)-3')
  • リガンド: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION
キーワードAAA+ ATPase / DNA binding / Transposition / Complex / DNA BINDING PROTEIN / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex
機能・相同性
機能・相同性情報


transposition / DNA recombination / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding
類似検索 - 分子機能
Tn7 transposition regulator TnsC / Tn7 transposition regulator TnsC / : / AAA domain / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
Transposon Tn7 transposition protein TnsC
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli (大腸菌) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.56 Å
データ登録者Shen Y / Ortega J
資金援助 カナダ, 1件
OrganizationGrant number国
Canadian Institutes of Health Research (CIHR)PJT-155941 カナダ
引用ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2022
タイトル: Structural basis for DNA targeting by the Tn7 transposon.
著者: Yao Shen / Josue Gomez-Blanco / Michael T Petassi / Joseph E Peters / Joaquin Ortega / Alba Guarné /
要旨: Tn7 transposable elements are unique for their highly specific, and sometimes programmable, target-site selection mechanisms and precise insertions. All the elements in the Tn7 family utilize an AAA+ ...Tn7 transposable elements are unique for their highly specific, and sometimes programmable, target-site selection mechanisms and precise insertions. All the elements in the Tn7 family utilize an AAA+ adaptor (TnsC) to coordinate target-site selection with transpososome assembly and to prevent insertions at sites already containing a Tn7 element. Owing to its multiple functions, TnsC is considered the linchpin in the Tn7 element. Here we present the high-resolution cryo-EM structure of TnsC bound to DNA using a gain-of-function variant of the protein and a DNA substrate that together recapitulate the recruitment to a specific DNA target site. TnsC forms an asymmetric ring on target DNA that segregates target-site selection and interaction with the paired-end complex to opposite faces of the ring. Unlike most AAA+ ATPases, TnsC uses a DNA distortion to find the target site but does not remodel DNA to activate transposition. By recognizing pre-distorted substrates, TnsC creates a built-in regulatory mechanism where ATP hydrolysis abolishes ring formation proximal to an existing element. This work unveils how Tn7 and Tn7-like elements determine the strict spacing between the target and integration sites.
履歴
登録2021年4月2日-
ヘッダ(付随情報) 公開2022年2月23日-
マップ公開2022年2月23日-
更新2024年5月29日-
現状2024年5月29日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0145
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0145
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-7mcs
  • 表面レベル: 0.0145
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_23757.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_23757.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.86 Å/pix.
x 300 pix.
= 256.5 Å		0.86 Å/pix.
x 300 pix.
= 256.5 Å		0.86 Å/pix.
x 300 pix.
= 256.5 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.855 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0145 / ムービー #1: 0.0145
最小 - 最大-0.05757957 - 0.10468085
平均 (標準偏差)0.000044002394 (±0.003446926)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ300300300
Spacing300300300
セルA=B=C: 256.5 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z0.8550.8550.855
M x/y/z300300300
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z256.500256.500256.500
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS300300300
D min/max/mean-0.0580.1050.000

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.

全体名称: Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.
要素
  • 複合体: Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.
    • 複合体: TnsC(1-503)A225V bound to DNA
      • タンパク質・ペプチド: Transposon Tn7 transposition protein TnsC
      • DNA: DNA (5'-D(P*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*C)-3')
      • DNA: DNA (5'-D(P*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*G)-3')
  • リガンド: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION

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超分子 #1: Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.

超分子名称: Complex of TnsC bound to DNA in the presence of AMPPnP.
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
分子量理論値: 30 KDa

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超分子 #2: TnsC(1-503)A225V bound to DNA

超分子名称: TnsC(1-503)A225V bound to DNA / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)

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分子 #1: Transposon Tn7 transposition protein TnsC

分子名称: Transposon Tn7 transposition protein TnsC / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 7 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
分子量理論値: 59.34698 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MGATRIQAVY RDTGVEAYRD NPFIEALPPL QESVNSAASL KSSLQLTSSD LQKSRVIRAH TICRIPDDYF QPLGTHLLLS ERISVMIRG GYVGRNPKTG DLQKHLQNGY ERVQTGELET FRFEEARSTA QSLLLIGCSG SGKTTSLHRI LATYPQVIYH R ELNVEQVV ...文字列:
MGATRIQAVY RDTGVEAYRD NPFIEALPPL QESVNSAASL KSSLQLTSSD LQKSRVIRAH TICRIPDDYF QPLGTHLLLS ERISVMIRG GYVGRNPKTG DLQKHLQNGY ERVQTGELET FRFEEARSTA QSLLLIGCSG SGKTTSLHRI LATYPQVIYH R ELNVEQVV YLKIDCSHNG SLKEICLNFF RALDRALGSN YERRYGLKRH GIETMLALMS QIANAHVLGL LVIDEIQHLS RS RSGGSQE MLNFFVTMVN IIGVPVMLIG TPKAREIFEA DLRSARRGAG FGAIFWDPIQ QTQRGKPNQE WIAFTDNLWQ LQL LQRKDA LLSDEVRDVW YELSQGVMDI VVKLFVLAQL RALALGNERI TAGLLRQVYQ DELKPVHPML EALRSGIPER IARY SDLVV PEIDKRLIQL QLDIAAIQEQ TPEEKALQEL DTEDQRHLYL MLKEDYDSSL LIPTIKKAFS QNPTMTRQKL LPLVL QWLM EGETVVSELE KPSKSKKVSP NSSSVDKLAA ALEHHHHHH

UniProtKB: Transposon Tn7 transposition protein TnsC

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分子 #2: DNA (5'-D(P*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*C)-3')

分子名称: DNA (5'-D(P*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*C)-3')
タイプ: dna / ID: 2 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 4.572937 KDa
配列文字列:
(DC)(DG)(DC)(DG)(DC)(DG)(DC)(DG)(DC)(DG) (DC)(DG)(DC)(DG)(DC)

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分子 #3: DNA (5'-D(P*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*G)-3')

分子名称: DNA (5'-D(P*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*GP*CP*G)-3')
タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 4.612961 KDa
配列文字列:
(DG)(DC)(DG)(DC)(DG)(DC)(DG)(DC)(DG)(DC) (DG)(DC)(DG)(DC)(DG)

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分子 #4: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER

分子名称: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 6 / 式: ANP
分子量理論値: 506.196 Da
Chemical component information

ChemComp-ANP:
PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER / AMP-PNP, エネルギー貯蔵分子類似体*YM

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分子 #5: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 6 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 8
グリッドモデル: C-flat-2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 15 sec.
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 295 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 78.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.75 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.5 µm / 倍率（公称値）: 105000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 905856
初期モデルモデルのタイプ: OTHER / 詳細: Stochastic Gradient Descent (SGD)
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.56 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1) / 使用した粒子像数: 155988
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1)
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL
得られたモデル

PDB-7mcs:
Cryo-electron microscopy structure of TnsC(1-503)A225V bound to DNA

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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