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- EMDB-19687: GroEL with bound GroTAC peptide -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-19687
タイトルGroEL with bound GroTAC peptide
マップデータGroEL with bound GroTAC peptide EM map
試料
  • 複合体: A complex of GroEL with GroTAC peptide
    • 複合体: GroEL
      • タンパク質・ペプチド: Chaperonin GroEL
    • 複合体: GroTAC
      • タンパク質・ペプチド: GroTAC
キーワードGroEL / GroTAC / PROTAC / degrader / complex / CHAPERONE
機能・相同性
機能・相同性情報


GroEL-GroES complex / chaperonin ATPase / virion assembly / : / isomerase activity / ATP-dependent protein folding chaperone / response to radiation / unfolded protein binding / protein folding / response to heat ...GroEL-GroES complex / chaperonin ATPase / virion assembly / : / isomerase activity / ATP-dependent protein folding chaperone / response to radiation / unfolded protein binding / protein folding / response to heat / protein refolding / magnesium ion binding / ATP hydrolysis activity / ATP binding / identical protein binding / membrane / cytosol
類似検索 - 分子機能
Chaperonin Cpn60, conserved site / Chaperonins cpn60 signature. / Chaperonin Cpn60/GroEL / GroEL-like equatorial domain superfamily / TCP-1-like chaperonin intermediate domain superfamily / GroEL-like apical domain superfamily / TCP-1/cpn60 chaperonin family / Chaperonin Cpn60/GroEL/TCP-1 family
類似検索 - ドメイン・相同性
生物種Escherichia coli (大腸菌) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.45 Å
データ登録者Wroblewski K / Izert-Nowakowska MA / Goral TK / Klimecka MM / Kmiecik S / Gorna MW
資金援助 ポーランド, 2件
OrganizationGrant number国
Foundation for Polish SciencePOIR.04.04.00-00-5EC1 ポーランド
Polish National Science Centre2020/39/B/NZ2/01301 ポーランド
引用ジャーナル: EMBO Rep / 年: 2025
タイトル: Targeted protein degradation in Escherichia coli using CLIPPERs.
著者: Matylda Anna Izert-Nowakowska / Maria Magdalena Klimecka / Anna Antosiewicz / Karol Wróblewski / Jakub Józef Kowalski / Katarzyna Justyna Bandyra / Tomasz Góral / Sebastian Kmiecik / ...著者: Matylda Anna Izert-Nowakowska / Maria Magdalena Klimecka / Anna Antosiewicz / Karol Wróblewski / Jakub Józef Kowalski / Katarzyna Justyna Bandyra / Tomasz Góral / Sebastian Kmiecik / Remigiusz Adam Serwa / Maria Wiktoria Górna /
要旨: New, universal tools for targeted protein degradation in bacteria can help to accelerate protein function studies and antimicrobial research. We describe a new method for degrading bacterial proteins ...New, universal tools for targeted protein degradation in bacteria can help to accelerate protein function studies and antimicrobial research. We describe a new method for degrading bacterial proteins using plasmid-encoded degrader peptides which deliver target proteins for degradation by a highly conserved ClpXP protease. We demonstrate the mode of action of the degraders on a challenging essential target, GroEL. The studies in bacteria are complemented by in vitro binding and structural studies. Expression of degrader peptides results in a temperature-dependent growth inhibition and depletion of GroEL levels over time. The reduction of GroEL levels is accompanied by dramatic proteome alterations. The presented method offers a new alternative approach for regulating protein levels in bacteria without genomic modifications or tag fusions. Our studies demonstrate that ClpXP is an attractive protease for the future use in bacterial-targeted protein degradation.
履歴
登録2024年2月19日-
ヘッダ(付随情報) 公開2024年2月28日-
マップ公開2024年2月28日-
更新2025年9月10日-
現状2025年9月10日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_19687.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_19687.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 600.7 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈GroEL with bound GroTAC peptide EM map
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.59 Å/pix.
x 540 pix.
= 317.412 Å		0.59 Å/pix.
x 540 pix.
= 317.412 Å		0.59 Å/pix.
x 540 pix.
= 317.412 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.5878 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.059
最小 - 最大-0.3979776 - 0.9389116
平均 (標準偏差)-0.0010603229 (±0.02579084)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ540540540
Spacing540540540
セルA=B=C: 317.41202 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_19687_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
追加マップ: Unsharpened map

ファイルemd_19687_additional_1.map
注釈Unsharpened map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: GroEL with bound GroTAC peptide EM half map B

ファイルemd_19687_half_map_1.map
注釈GroEL with bound GroTAC peptide EM half map B
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: GroEL with bound GroTAC peptide EM half map A

ファイルemd_19687_half_map_2.map
注釈GroEL with bound GroTAC peptide EM half map A
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : A complex of GroEL with GroTAC peptide

全体名称: A complex of GroEL with GroTAC peptide
要素
  • 複合体: A complex of GroEL with GroTAC peptide
    • 複合体: GroEL
      • タンパク質・ペプチド: Chaperonin GroEL
    • 複合体: GroTAC
      • タンパク質・ペプチド: GroTAC

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超分子 #1: A complex of GroEL with GroTAC peptide

超分子名称: A complex of GroEL with GroTAC peptide / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
分子量理論値: 4 kDa/nm

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超分子 #2: GroEL

超分子名称: GroEL / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)

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超分子 #3: GroTAC

超分子名称: GroTAC / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)

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分子 #1: Chaperonin GroEL

分子名称: Chaperonin GroEL / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 14 / 光学異性体: LEVO / EC番号: chaperonin ATPase
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
分子量理論値: 57.391711 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列: MAAKDVKFGN DARVKMLRGV NVLADAVKVT LGPKGRNVVL DKSFGAPTIT KDGVSVAREI ELEDKFENMG AQMVKEVASK ANDAAGDGT TTATVLAQAI ITEGLKAVAA GMNPMDLKRG IDKAVTAAVE ELKALSVPCS DSKAIAQVGT ISANSDETVG K LIAEAMDK ...文字列:
MAAKDVKFGN DARVKMLRGV NVLADAVKVT LGPKGRNVVL DKSFGAPTIT KDGVSVAREI ELEDKFENMG AQMVKEVASK ANDAAGDGT TTATVLAQAI ITEGLKAVAA GMNPMDLKRG IDKAVTAAVE ELKALSVPCS DSKAIAQVGT ISANSDETVG K LIAEAMDK VGKEGVITVE DGTGLQDELD VVEGMQFDRG YLSPYFINKP ETGAVELESP FILLADKKIS NIREMLPVLE AV AKAGKPL LIIAEDVEGE ALATLVVNTM RGIVKVAAVK APGFGDRRKA MLQDIATLTG GTVISEEIGM ELEKATLEDL GQA KRVVIN KDTTTIIDGV GEEAAIQGRV AQIRQQIEEA TSDYDREKLQ ERVAKLAGGV AVIKVGAATE VEMKEKKARV EDAL HATRA AVEEGVVAGG GVALIRVASK LADLRGQNED QNVGIKVALR AMEAPLRQIV LNCGEEPSVV ANTVKGGDGN YGYNA ATEE YGNMIDMGIL DPTKVTRSAL QYAASVAGLM ITTECMVTDL PKNDAADLGA AGGMGGMGGM GGMM

UniProtKB: Chaperonin GroEL

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分子 #2: GroTAC

分子名称: GroTAC / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 14 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 3.176783 KDa
配列文字列:
CYRGGRPALR VVK(UNK)(UNK)(UNK)SWMT TPWGFHLP

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度4 mg/mL
緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度名称式
50.0 mMHEPES pH 8.0
200.0 mMpotassium chlorideKCl
5.0 mMmagnesium chlorideMgCl2
1.0 mMATP

詳細: ATP was added to the sample immediately before disposing on a grid
グリッドモデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.038 kPa
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡TFS GLACIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k)
検出モード: COUNTING / デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4672 / 平均露光時間: 16.67 sec. / 平均電子線量: 40.0 e/Å2
電子線加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.2 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.8 µm / 倍率（公称値）: 240000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN

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画像解析

粒子像選択選択した数: 350383
CTF補正ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.3) / タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成使用したクラス数: 40
想定した対称性 - 点群: D7 (2回x7回 2面回転対称)
アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 2.45 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.4) / 使用した粒子像数: 203031
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.4)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.4)
最終 3次元分類クラス数: 40 / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.4)
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルChain - Source name: Other / Chain - Initial model type: in silico model
詳細: The CA model was obtained by ModelAngelo (1.09) and then subsequently rebuilt to full-atom by cg2all (1.5).
詳細The C-alpha model was obtained by two rounds of ab initio modeling using machine learning-based ModelAngelo 1.09 software. The incorrectly assigned GroEL residues were then manually corrected. The C-alpha trace of the GroTAC peptide was initially constructed by ModelAngelo, with residue identities suggested through a comparison to the 1MNF PDB structure. The reconstruction to full-atom was performed using cg2all 1.5 software. The first stage of refinement was done in Coot (0.9.8.5). The final refinement stage involved two rounds of phenix.real_space_refine (Phenix 1.21.5207).
精密化空間: REAL / プロトコル: AB INITIO MODEL / 当てはまり具合の基準: 0.88
得られたモデル

PDB-8s32:
GroEL with bound GroTAC peptide

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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