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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-1966 | |||||||||
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タイトル | CFTR map generated from 2D crystals grown using the epitaxial method. | |||||||||
![]() | EM map generated from 2D crystals of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR or ABCC7). | |||||||||
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![]() | Cystic fibrosis / CFTR / ion channel / ATP binding cassette protein | |||||||||
機能・相同性 | ![]() ATPase-coupled lipid transmembrane transporter activity / トランスロカーゼ; 他の化合物の輸送を触媒; ヌクレオシド三リン酸の加水分解に伴う / ABC-type transporter activity / membrane => GO:0016020 / ATP hydrolysis activity / ATP binding / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 電子線結晶学 / クライオ電子顕微鏡法 / ネガティブ染色法 / 解像度: 9.0 Å | |||||||||
![]() | Rosenberg MF / ORyan LP / Hughes G / Zhao Z / Aleksandrov LA / Riordan JR / Ford RC | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR): three-dimensional structure and localization of a channel gate. 著者: Mark F Rosenberg / Liam P O'Ryan / Guy Hughes / Zhefeng Zhao / Luba A Aleksandrov / John R Riordan / Robert C Ford / ![]() 要旨: Cystic fibrosis affects about 1 in 2500 live births and involves loss of transmembrane chloride flux due to a lack of a membrane protein channel termed the cystic fibrosis transmembrane conductance ...Cystic fibrosis affects about 1 in 2500 live births and involves loss of transmembrane chloride flux due to a lack of a membrane protein channel termed the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR). We have studied CFTR structure by electron crystallography. The data were compared with existing structures of other ATP-binding cassette transporters. The protein was crystallized in the outward facing state and resembled the well characterized Sav1866 transporter. We identified regions in the CFTR map, not accounted for by Sav1866, which were potential locations for the regulatory region as well as the channel gate. In this analysis, we were aided by the fact that the unit cell was composed of two molecules not related by crystallographic symmetry. We also identified regions in the fitted Sav1866 model that were missing from the map, hence regions that were either disordered in CFTR or differently organized compared with Sav1866. Apart from the N and C termini, this indicated that in CFTR, the cytoplasmic end of transmembrane helix 5/11 and its associated loop could be partly disordered (or alternatively located). | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 7.4 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 12.6 KB 12.6 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 200.1 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 222.4 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 221.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 4.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 4a82MC M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 ( |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
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注釈 | EM map generated from 2D crystals of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR or ABCC7). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X: 0.7 Å / Y: 0.76 Å / Z: 2.5 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
全体 | 名称: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator |
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要素 |
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-超分子 #1000: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
超分子 | 名称: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator / タイプ: sample / ID: 1000 詳細: Human ortholog. Sample was glycosylated and mostly dephosphorylated. No nucleotide was added. 集合状態: 2 Monomers / Number unique components: 1 |
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分子量 | 実験値: 200 KDa / 理論値: 168.142 KDa / 手法: SDS-PAGE |
-分子 #1: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
分子 | 名称: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: CFTR 詳細: Human protein is glycosylated but non-phosphorylated, as expressed and purified from BHK cells. No nucleotide is present during purification and crystallisation. コピー数: 2 / 集合状態: Monomer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 実験値: 200 KDa / 理論値: 168 KDa |
組換発現 | 生物種: Chinese Hamster Kidney cells |
配列 | GO: membrane => GO:0016020 InterPro: Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator |
-実験情報
-構造解析
手法 | ネガティブ染色法, クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 電子線結晶学 |
試料の集合状態 | 2D array |
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試料調製
濃度 | 0.05 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 8 詳細: 0.05% dodecyl maltoside, polyethylene glycol 4000 (10% w/v), 100mM ammonium sulphate, 50 mM Tris-HCl. |
染色 | タイプ: NEGATIVE / 詳細: Unstained |
グリッド | 詳細: 400 mesh carbon, gold |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 90 % / チャンバー内温度: 80 K / 装置: OTHER / 詳細: Vitrification instrument: Vitrobot / 手法: 10 seconds |
詳細 | on carbon (epitaxial) |
結晶化 | 詳細: on carbon (epitaxial) |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI POLARA 300 |
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温度 | 最低: 97 K / 最高: 97 K / 平均: 97 K |
撮影 | カテゴリ: CCD フィルム・検出器のモデル: GENERIC GATAN (4k x 4k) デジタル化 - サンプリング間隔: 1.9 µm / 実像数: 121 / ビット/ピクセル: 16 |
Tilt angle min | 0 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.0 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.1 µm |
試料ステージ | 試料ホルダー: Eucentric / 試料ホルダーモデル: GATAN HELIUM / Tilt angle max: 70 / Tilt series - Axis1 - Min angle: 0 ° / Tilt series - Axis1 - Max angle: 70 ° |
実験機器 | ![]() モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
最終 再構成 | アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 9.0 Å / 解像度の算出法: OTHER / ソフトウェア - 名称: MRC 詳細: Lattice unbending and origin refinement were carried out with 2dx and 2dxmerge software. |
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結晶パラメータ | 単位格子 - A: 72.300 Å / 単位格子 - B: 75.800 Å / 単位格子 - C: 300.000 Å / 単位格子 - γ: 125.00 ° / 単位格子 - α: 90.00 ° / 単位格子 - β: 90.00 ° / 面群: P 1 |
CTF補正 | 詳細: TTREFINE |
-原子モデル構築 1
初期モデル | PDB ID: |
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ソフトウェア | 名称: ![]() |
詳細 | Protocol: Rigid Body. Initial manual docking then refinement using Chimera fir-in-map routine. |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT 当てはまり具合の基準: Cross-correlation between calculated map vs experimental map |
得られたモデル | ![]() PDB-4a82: |