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- EMDB-0564: apo-LRRC8A in MSP2N2 nanodisc constricted state -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-0564
タイトルapo-LRRC8A in MSP2N2 nanodisc constricted state
マップデータapo-LRRC8A in MSP2N2 nanodisc
試料
  • 複合体: LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state
    • タンパク質・ペプチド: Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A
キーワードIon channel / volume-regulation / MEMBRANE PROTEIN
機能・相同性
機能・相同性情報


Miscellaneous transport and binding events / pre-B cell differentiation / volume-sensitive anion channel activity / aspartate transmembrane transport / cyclic-GMP-AMP transmembrane transporter activity / cyclic-GMP-AMP transmembrane import across plasma membrane / monoatomic anion transmembrane transport / taurine transmembrane transport / protein hexamerization / cell volume homeostasis ...Miscellaneous transport and binding events / pre-B cell differentiation / volume-sensitive anion channel activity / aspartate transmembrane transport / cyclic-GMP-AMP transmembrane transporter activity / cyclic-GMP-AMP transmembrane import across plasma membrane / monoatomic anion transmembrane transport / taurine transmembrane transport / protein hexamerization / cell volume homeostasis / monoatomic anion transport / response to osmotic stress / intracellular glucose homeostasis / monoatomic ion channel complex / positive regulation of myoblast differentiation / chloride transmembrane transport / positive regulation of insulin secretion / spermatogenesis / lysosomal membrane / cell surface / identical protein binding / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
LRRC8, pannexin-like TM region / Pannexin-like TM region of LRRC8 / : / : / Leucine-rich repeat region / Leucine-rich repeat, SDS22-like subfamily / Leucine rich repeat / Leucine-rich repeat, typical subtype / Leucine-rich repeats, typical (most populated) subfamily / Leucine-rich repeat profile. ...LRRC8, pannexin-like TM region / Pannexin-like TM region of LRRC8 / : / : / Leucine-rich repeat region / Leucine-rich repeat, SDS22-like subfamily / Leucine rich repeat / Leucine-rich repeat, typical subtype / Leucine-rich repeats, typical (most populated) subfamily / Leucine-rich repeat profile. / Leucine-rich repeat / Leucine-rich repeat domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A
類似検索 - 構成要素
生物種Mus musculus (ハツカネズミ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.18 Å
データ登録者Kern DM / Hite RK
資金援助 米国, 2件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)DP2GM123496 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)F32GM128263 米国
引用ジャーナル: Elife / 年: 2019
タイトル: Cryo-EM structures of the DCPIB-inhibited volume-regulated anion channel LRRC8A in lipid nanodiscs.
著者: David M Kern / SeCheol Oh / Richard K Hite / Stephen G Brohawn /
要旨: Hypoosmotic conditions activate volume-regulated anion channels in vertebrate cells. These channels are formed by leucine-rich repeat-containing protein 8 (LRRC8) family members and contain LRRC8A in ...Hypoosmotic conditions activate volume-regulated anion channels in vertebrate cells. These channels are formed by leucine-rich repeat-containing protein 8 (LRRC8) family members and contain LRRC8A in homo- or hetero-hexameric assemblies. Here, we present single-particle cryo-electron microscopy structures of LRRC8A in complex with the inhibitor DCPIB reconstituted in lipid nanodiscs. DCPIB plugs the channel like a cork in a bottle - binding in the extracellular selectivity filter and sterically occluding ion conduction. Constricted and expanded structures reveal coupled dilation of cytoplasmic LRRs and the channel pore, suggesting a mechanism for channel gating by internal stimuli. Conformational and symmetry differences between LRRC8A structures determined in detergent micelles and lipid bilayers related to reorganization of intersubunit lipid binding sites demonstrate a critical role for the membrane in determining channel structure. These results provide insight into LRRC8 gating and inhibition and the role of lipids in the structure of an ionic-strength sensing ion channel.
履歴
登録2019年2月14日-
ヘッダ(付随情報) 公開2019年2月27日-
マップ公開2019年2月27日-
更新2025年5月28日-
現状2025年5月28日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0136
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0136
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-6o00
  • 表面レベル: 0.0136
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_0564.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_0564.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 184 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈apo-LRRC8A in MSP2N2 nanodisc
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.09 Å/pix.
x 364 pix.
= 396.032 Å		1.09 Å/pix.
x 364 pix.
= 396.032 Å		1.09 Å/pix.
x 364 pix.
= 396.032 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.088 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0136 / ムービー #1: 0.0136
最小 - 最大-0.014530764 - 0.033476103
平均 (標準偏差)0.000023918787 (±0.0010708396)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ364364364
Spacing364364364
セルA=B=C: 396.032 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.0881.0881.088
M x/y/z364364364
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z396.032396.032396.032
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ000
NX/NY/NZ364364364
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS364364364
D min/max/mean-0.0150.0330.000

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state

全体名称: LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state
要素
  • 複合体: LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state
    • タンパク質・ペプチド: Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A

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超分子 #1: LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state

超分子名称: LRRC8A-DCPIB in MSP1E3D1 nanodisc constricted state / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
分子量理論値: 565 KDa

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分子 #1: Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A

分子名称: Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
分子量理論値: 95.314562 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: MIPVTELRYF ADTQPAYRIL KPWWDVFTDY ISIVMLMIAV FGGTLQVTQD KMICLPCKWV TKDSCNDSFR GWAASSPEPT YPNSTVLPT PDTGPTGIKY DLDRHQYNYV DAVCYENRLH WFAKYFPYLV LLHTLIFLAC SNFWFKFPRT SSKLEHFVSI L LKCFDSPW ...文字列:
MIPVTELRYF ADTQPAYRIL KPWWDVFTDY ISIVMLMIAV FGGTLQVTQD KMICLPCKWV TKDSCNDSFR GWAASSPEPT YPNSTVLPT PDTGPTGIKY DLDRHQYNYV DAVCYENRLH WFAKYFPYLV LLHTLIFLAC SNFWFKFPRT SSKLEHFVSI L LKCFDSPW TTRALSETVV EESDPKPAFS KMNGSMDKKS STVSEDVEAT VPMLQRTKSR IEQGIVDRSE TGVLDKKEGE QA KALFEKV KKFRTHVEEG DIVYRLYMRQ TIIKVIKFAL IICYTVYYVH NIKFDVDCTV DIESLTGYRT YRCAHPLATL FKI LASFYI SLVIFYGLIC MYTLWWMLRR SLKKYSFESI REESSYSDIP DVKNDFAFML HLIDQYDPLY SKRFAVFLSE VSEN KLRQL NLNNEWTLDK LRQRLTKNAQ DKLELHLFML SGIPDTVFDL VELEVLKLEL IPDVTIPPSI AQLTGLKELW LYHTA AKIE APALAFLREN LRALHIKFTD IKEIPLWIYS LKTLEELHLT GNLSAENNRY IVIDGLRELK RLKVLRLKSN LSKLPQ VVT DVGVHLQKLS INNEGTKLIV LNSLKKMVNL TELELIRCDL ERIPHSIFSL HNLQEIDLKD NNLKTIEEII SFQHLHR LT CLKLWYNHIA YIPIQIGNLT NLERLYLNRN KIEKIPTQLF YCRKLRYLDL SHNNLTFLPA DIGLLQNLQN LAVTANRI E ALPPELFQCR KLRALHLGNN VLQSLPSRVG ELTNLTQIEL RGNRLECLPV ELGECPLLKR SGLVVEEDLF STLPPEVKE RLWRADKEQA SNSLEVLFQG

UniProtKB: Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.8 mg/mL
緩衝液pH: 7.4
構成要素:
濃度名称
20.0 millimolarHEPES
150.0 millimolarPotassium Chloride
1.0 millimolarEDTA
100.0 micromolarDCPIB
グリッド支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 12 / 詳細: unspecified
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 295.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: 3 microliter drop size, 3 second blot time.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: SUPER-RESOLUTION / デジタル化 - サイズ - 横: 7420 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 7676 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-40 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1786 / 平均露光時間: 8.0 sec. / 平均電子線量: 70.3 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.2 µm
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 252655
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C6 (6回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.18 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0) / 使用した粒子像数: 11507
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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