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- EMDB-0314: Structure of McrBC without DNA binding domains (Class 4) -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-0314
タイトルStructure of McrBC without DNA binding domains (Class 4)
マップデータ
試料
  • 複合体: McrB and McrC complex without DNA binding domains
    • タンパク質・ペプチド: 5-methylcytosine-specific restriction enzyme B
    • タンパク質・ペプチド: Protein McrC
  • リガンド: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-GUANYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE
キーワードAAA+ superfamily / restriction enzyme / DNA BINDING PROTEIN
機能・相同性
機能・相同性情報


type IV site-specific deoxyribonuclease activity / restriction endodeoxyribonuclease activity / endonuclease complex / double-stranded methylated DNA binding / hemi-methylated DNA-binding / DNA catabolic process / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素; 5'-リン酸モノエステル産生エンドデオキシリボヌクレアーゼ / DNA restriction-modification system / endonuclease activity / GTPase activity ...type IV site-specific deoxyribonuclease activity / restriction endodeoxyribonuclease activity / endonuclease complex / double-stranded methylated DNA binding / hemi-methylated DNA-binding / DNA catabolic process / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素; 5'-リン酸モノエステル産生エンドデオキシリボヌクレアーゼ / DNA restriction-modification system / endonuclease activity / GTPase activity / GTP binding / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding / identical protein binding
類似検索 - 分子機能
5-methylcytosine restriction system component, bacterial / Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrBC / McrBC 5-methylcytosine restriction system component / Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrB subunit, DNA-binding domain / MrcB-like, N-terminal domain / : / ATPase, dynein-related, AAA domain / AAA domain (dynein-related subfamily) / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrB subunit / Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrBC
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli K-12 (大腸菌) / Escherichia coli (strain K12) (大腸菌)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.3 Å
データ登録者Itoh Y / Nirwan N
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2019
タイトル: Structure-based mechanism for activation of the AAA+ GTPase McrB by the endonuclease McrC.
著者: Neha Nirwan / Yuzuru Itoh / Pratima Singh / Sutirtha Bandyopadhyay / Kutti R Vinothkumar / Alexey Amunts / Kayarat Saikrishnan /
要旨: The AAA+ GTPase McrB powers DNA cleavage by the endonuclease McrC. The GTPase itself is activated by McrC. The architecture of the GTPase and nuclease complex, and the mechanism of their activation ...The AAA+ GTPase McrB powers DNA cleavage by the endonuclease McrC. The GTPase itself is activated by McrC. The architecture of the GTPase and nuclease complex, and the mechanism of their activation remained unknown. Here, we report a 3.6 Å structure of a GTPase-active and DNA-binding deficient construct of McrBC. Two hexameric rings of McrB are bridged by McrC dimer. McrC interacts asymmetrically with McrB protomers and inserts a stalk into the pore of the ring, reminiscent of the γ subunit complexed to αβ of F-ATPase. Activation of the GTPase involves conformational changes of residues essential for hydrolysis. Three consecutive nucleotide-binding pockets are occupied by the GTP analogue 5'-guanylyl imidodiphosphate and the next three by GDP, which is suggestive of sequential GTP hydrolysis.
履歴
登録2018年10月22日-
ヘッダ(付随情報) 公開2019年7月24日-
マップ公開2019年7月24日-
更新2024年5月15日-
現状2024年5月15日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.026
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.026
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-6hz8
  • 表面レベル: 0.026
  • UCSF Chimeraによる作画
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ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_0314.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_0314.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 52.7 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.05 Å/pix.
x 240 pix.
= 252. Å		1.05 Å/pix.
x 240 pix.
= 252. Å		1.05 Å/pix.
x 240 pix.
= 252. Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.05 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.026 / ムービー #1: 0.026
最小 - 最大-0.0564868 - 0.09403547
平均 (標準偏差)0.0006663471 (±0.004887842)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ240240240
Spacing240240240
セルA=B=C: 251.99998 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.051.051.05
M x/y/z240240240
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z252.000252.000252.000
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS240240240
D min/max/mean-0.0560.0940.001

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_0314_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_0314_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_0314_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : McrB and McrC complex without DNA binding domains

全体名称: McrB and McrC complex without DNA binding domains
要素
  • 複合体: McrB and McrC complex without DNA binding domains
    • タンパク質・ペプチド: 5-methylcytosine-specific restriction enzyme B
    • タンパク質・ペプチド: Protein McrC
  • リガンド: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-GUANYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE

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超分子 #1: McrB and McrC complex without DNA binding domains

超分子名称: McrB and McrC complex without DNA binding domains / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#2
詳細: The N-terminal DNA binding domain of McrB is truncated
由来(天然)生物種: Escherichia coli K-12 (大腸菌)
分子量理論値: 510 KDa

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分子 #1: 5-methylcytosine-specific restriction enzyme B

分子名称: 5-methylcytosine-specific restriction enzyme B / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 12 / 光学異性体: LEVO
EC番号: 加水分解酵素; エステル加水分解酵素; 5'-リン酸モノエステル産生エンドデオキシリボヌクレアーゼ
由来(天然)生物種: Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) / 株: K12
分子量理論値: 35.758492 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MSKTESYCLE DALNDLFIPE TTIETILKRL TIKKNIILQG PPGVGKTFVA RRLAYLLTGE KAPQRVNMVQ FHQSYSYEDF IQGYRPNGV GFRRKDGIFY NFCQQAKEQP EKKYIFIIDE INRANLSKVF GEVMMLMEHD KRGENWSVPL TYSENDEERF Y VPENVYII ...文字列:
MSKTESYCLE DALNDLFIPE TTIETILKRL TIKKNIILQG PPGVGKTFVA RRLAYLLTGE KAPQRVNMVQ FHQSYSYEDF IQGYRPNGV GFRRKDGIFY NFCQQAKEQP EKKYIFIIDE INRANLSKVF GEVMMLMEHD KRGENWSVPL TYSENDEERF Y VPENVYII GLMNTADRSL AVVDYALRRR FSFIDIEPGF DTPQFRNFLL NKKAEPSFVE SLCQKMNELN QEISKEATIL GK GFRIGHS YFCCGLEDGT SPDTQWLNEI VMTDIAPLLE EYFFDDPYKQ QKWTNKLLGD SSGSHHHHHH

UniProtKB: Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrB subunit

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分子 #2: Protein McrC

分子名称: Protein McrC / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) / 株: K12
分子量理論値: 40.643625 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MEQPVIPVRN IYYMLTYAWG YLQEIKQANL EAIPGNNLLD ILGYVLNKGV LQLSRRGLEL DYNPNTEIIP GIKGRIEFAK TIRGFHLNH GKTVSTFDML NEDTLANRII KSTLAILIKH EKLNSTIRDE ARSLYRKLPG ISTLHLTPQH FSYLNGGKNT R YYKFVISV ...文字列:
MEQPVIPVRN IYYMLTYAWG YLQEIKQANL EAIPGNNLLD ILGYVLNKGV LQLSRRGLEL DYNPNTEIIP GIKGRIEFAK TIRGFHLNH GKTVSTFDML NEDTLANRII KSTLAILIKH EKLNSTIRDE ARSLYRKLPG ISTLHLTPQH FSYLNGGKNT R YYKFVISV CKFIVNNSIP GQNKGHYRFY DFERNEKEMS LLYQKFLYEF CRRELTSANT TRSYLKWDAS SISDQSLNLL PR METDITI RSSEKILIVD AKYYKSIFSR RMGTEKFHSQ NLYQLMNYLW SLKPENGENI GGLLIYPHVD TAVKHRYKIN GFD IGLCTV NLGQEWPCIH QELLDIFDEY LK

UniProtKB: Type IV methyl-directed restriction enzyme EcoKMcrBC

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分子 #3: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-GUANYLATE ESTER

分子名称: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-GUANYLATE ESTER / タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 6 / 式: GNP
分子量理論値: 522.196 Da
Chemical component information

ChemComp-GNP:
PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-GUANYLATE ESTER / Gpp(NH)p / GppNHp, GMPPNP, エネルギー貯蔵分子類似体*YM

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分子 #4: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 6 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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分子 #5: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE

分子名称: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 6 / 式: GDP
分子量理論値: 443.201 Da
Chemical component information

ChemComp-GDP:
GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE / GDP / GDP, エネルギー貯蔵分子*YM

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度4.0 mg/mL
緩衝液pH: 7.4
構成要素:
濃度式名称
0.1 MNaClsodium chloride
10.0 mMTris-HCltris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride buffer
5.0 mMMgCl2Magnesium chloride
2.0 mMC10H17N6O13P35'-Guanylyl imidodiphosphate
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 2-20 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3326 / 平均露光時間: 8.0 sec. / 平均電子線量: 1.5 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 最大 デフォーカス（補正後）: 5.0 µm / 最小 デフォーカス（補正後）: 0.3 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 倍率（公称値）: 130000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 771763
初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C2 (2回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2.1.0) / 使用した粒子像数: 225201
初期 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2.1.0)
最終 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2.1.0)
最終 3次元分類ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2.1.0)
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL / プロトコル: AB INITIO MODEL / 温度因子: 74
当てはまり具合の基準: Cross-correlation coefficient
得られたモデル

PDB-6hz8:
Structure of McrBC without DNA binding domains (Class 4)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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