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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8b7v | |||||||||
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タイトル | Automated simulation-based refinement of maltoporin into a cryo-EM density | |||||||||
![]() | Maltoporin | |||||||||
![]() | MEMBRANE PROTEIN / maltoporin / density fit / automated refinement / cryo-em | |||||||||
機能・相同性 | ![]() maltodextrin transmembrane transporter activity / maltose transporting porin activity / pore complex / monoatomic ion transport / cell outer membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3 Å | |||||||||
![]() | Yvonnesdotter, L. / Rovsnik, U. / Blau, C. / Lycksell, M. / Howard, R.J. / Lindahl, E. | |||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Automated simulation-based membrane protein refinement into cryo-EM data. 著者: Linnea Yvonnesdotter / Urška Rovšnik / Christian Blau / Marie Lycksell / Rebecca Joy Howard / Erik Lindahl / ![]() 要旨: The resolution revolution has increasingly enabled single-particle cryogenic electron microscopy (cryo-EM) reconstructions of previously inaccessible systems, including membrane proteins-a category ...The resolution revolution has increasingly enabled single-particle cryogenic electron microscopy (cryo-EM) reconstructions of previously inaccessible systems, including membrane proteins-a category that constitutes a disproportionate share of drug targets. We present a protocol for using density-guided molecular dynamics simulations to automatically refine atomistic models into membrane protein cryo-EM maps. Using adaptive force density-guided simulations as implemented in the GROMACS molecular dynamics package, we show how automated model refinement of a membrane protein is achieved without the need to manually tune the fitting force ad hoc. We also present selection criteria to choose the best-fit model that balances stereochemistry and goodness of fit. The proposed protocol was used to refine models into a new cryo-EM density of the membrane protein maltoporin, either in a lipid bilayer or detergent micelle, and we found that results do not substantially differ from fitting in solution. Fitted structures satisfied classical model-quality metrics and improved the quality and the model-to-map correlation of the x-ray starting structure. Additionally, the density-guided fitting in combination with generalized orientation-dependent all-atom potential was used to correct the pixel-size estimation of the experimental cryo-EM density map. This work demonstrates the applicability of a straightforward automated approach to fitting membrane protein cryo-EM densities. Such computational approaches promise to facilitate rapid refinement of proteins under different conditions or with various ligands present, including targets in the highly relevant superfamily of membrane proteins. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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ダウンロードとリンク
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ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | ![]() | 213.5 KB | 表示 | ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 172.3 KB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 1.3 MB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 1.3 MB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 41.9 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 65.2 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 15903MC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 ( |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
#1: タンパク質 | 分子量: 47425.785 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Trimeric maltoporin (LamB protein) / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: NATURAL |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
緩衝液 | pH: 7.4 |
試料 | 濃度: 3 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2800 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1400 nm |
撮影 | 電子線照射量: 42 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) |
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解析
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION |
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3次元再構成 | 解像度: 3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 579000 / 対称性のタイプ: POINT |