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- EMDB-43769: CryoEM structure of ThermoCas9 in post-cleavage state bound with ... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-43769
タイトルCryoEM structure of ThermoCas9 in post-cleavage state bound with the DNA containing NNNNCCA PAM
マップデータ
試料
  • 複合体: ThermoCas9 Post-cleavage complex
    • RNA: Single guide RNA
    • DNA: Cleaved 3' target DNA strand
    • DNA: Cleaved 3' non-target DNA strand
    • DNA: Cleaved 5' target DNA strand
    • DNA: Cleaved 5' non-target DNA strand
    • タンパク質・ペプチド: CRISPR-associated endonuclease Cas9
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE
  • リガンド: water
キーワードCRISPR-Cas9 / Cas9 / Epigenetics / endonuclease / HNH / RuvC / metal binding / RNA / DNA BINDING PROTEIN-DNA-RNA complex
機能・相同性:
機能・相同性情報
生物種Geobacillus thermodenitrificans (バクテリア) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.2 Å
データ登録者Shu Y / Zhao Y / Li H
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM099604 米国
引用ジャーナル: To Be Published
タイトル: Molecular Basis for Epigenetic-sensitive Editing by Cas9
著者: Roth M / Shu Y / Trasanidis D / Zhao Y / Hoffman R / van der Oost J / Li H
履歴
登録2024年2月22日-
ヘッダ(付随情報) 公開2025年2月26日-
マップ公開2025年2月26日-
更新2025年2月26日-
現状2025年2月26日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_43769.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.82 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.36
最小 - 最大-4.5290713 - 7.8119097
平均 (標準偏差)0.0031039466 (±0.1424203)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ300300300
Spacing300300300
セルA=B=C: 246.0 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : ThermoCas9 Post-cleavage complex

全体名称: ThermoCas9 Post-cleavage complex
要素
  • 複合体: ThermoCas9 Post-cleavage complex
    • RNA: Single guide RNA
    • DNA: Cleaved 3' target DNA strand
    • DNA: Cleaved 3' non-target DNA strand
    • DNA: Cleaved 5' target DNA strand
    • DNA: Cleaved 5' non-target DNA strand
    • タンパク質・ペプチド: CRISPR-associated endonuclease Cas9
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE
  • リガンド: water

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超分子 #1: ThermoCas9 Post-cleavage complex

超分子名称: ThermoCas9 Post-cleavage complex / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#6
由来(天然)生物種: Geobacillus thermodenitrificans (バクテリア)

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分子 #1: Single guide RNA

分子名称: Single guide RNA / タイプ: rna / ID: 1 / コピー数: 1
由来(天然)生物種: Geobacillus thermodenitrificans (バクテリア)
分子量理論値: 47.798094 KDa
配列文字列:
GGUAGGAUGG CAAGAUCCUG GUAGUCAUAG UUCCCCUGGA AACAGGGUUA CUAUGAUAAG GGCUUUCUGC CUAUAGGCAG ACUGACCCG UGGCGUUGGG GAUCGCCUAU CGCCCGCUUU CUUCGGGCAU UCCCCACUCU UAGGCGUUUU

+
分子 #2: Cleaved 3' target DNA strand

分子名称: Cleaved 3' target DNA strand / タイプ: dna / ID: 2 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 7.883092 KDa
配列文字列:
(DC)(DA)(DG)(DG)(DA)(DT)(DC)(DT)(DT)(DG) (DC)(DC)(DA)(DT)(DC)(DC)(DT)(DA)(DC)(DC) (DT)(DC)(DT)(DA)(DG)(DA)

+
分子 #3: Cleaved 3' non-target DNA strand

分子名称: Cleaved 3' non-target DNA strand / タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 4.248793 KDa
配列文字列:
(DG)(DT)(DA)(DT)(DA)(DC)(DA)(DC)(DC)(DA) (DA)(DG)(DC)(DT)

+
分子 #4: Cleaved 5' target DNA strand

分子名称: Cleaved 5' target DNA strand / タイプ: dna / ID: 4 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 4.310813 KDa
配列文字列:
(DA)(DG)(DC)(DT)(DT)(DG)(DG)(DT)(DG)(DT) (DA)(DT)(DA)(DC)

+
分子 #5: Cleaved 5' non-target DNA strand

分子名称: Cleaved 5' non-target DNA strand / タイプ: dna / ID: 5 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 1.504037 KDa
配列文字列:
(DC)(DT)(DA)(DG)(DA)

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分子 #6: CRISPR-associated endonuclease Cas9

分子名称: CRISPR-associated endonuclease Cas9 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 6 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
EC番号: 加水分解酵素; エステル加水分解酵素
由来(天然)生物種: Geobacillus thermodenitrificans (バクテリア)
分子量理論値: 126.563461 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MKYKIGLDIG ITSIGWAVIN LDIPRIEDLG VRIFDRAENP KTGESLALPR RLARSARRRL RRRKHRLERI RRLFVREGIL TKEELNKLF EKKHEIDVWQ LRVEALDRKL NNDELARILL HLAKRRGFRS NRKSERTNKE NSTMLKHIEE NQSILSSYRT V AEMVVKDP ...文字列:
MKYKIGLDIG ITSIGWAVIN LDIPRIEDLG VRIFDRAENP KTGESLALPR RLARSARRRL RRRKHRLERI RRLFVREGIL TKEELNKLF EKKHEIDVWQ LRVEALDRKL NNDELARILL HLAKRRGFRS NRKSERTNKE NSTMLKHIEE NQSILSSYRT V AEMVVKDP KFSLHKRNKE DNYTNTVARD DLEREIKLIF AKQREYGNIV CTEAFEHEYI SIWASQRPFA SKDDIEKKVG FC TFEPKEK RAPKATYTFQ SFTVWEHINK LRLVSPGGIR ALTDDERRLI YKQAFHKNKI TFHDVRTLLN LPDDTRFKGL LYD RNTTLK ENEKVRFLEL GAYHKIRKAI DSVYGKGAAK SFRPIDFDTF GYALTMFKDD TDIRSYLRNE YEQNGKRMEN LADK VYDEE LIEELLNLSF SKFGHLSLKA LRNILPYMEQ GEVYSTACER AGYTFTGPKK KQKTVLLPNI PPIANPVVMR ALTQA RKVV NAIIKKYGSP VSIHIELARE LSQSFDERRK MQKEQEGNRK KNETAIRQLV EYGLTLNPTG LDIVKFKLWS EQNGKC AYS LQPIEIERLL EPGYTEVDHV IPYSRSLDDS YTNKVLVLTK ENREKGNRTP AEYLGLGSER WQQFETFVLT NKQFSKK KR DRLLRLHYDE NEENEFKNRN LNDTRYISRF LANFIREHLK FADSDDKQKV YTVNGRITAH LRSRWNFNKN REESNLHH A VDAAIVACTT PSDIARVTAF YQRREQNKEL SKKTDPQFPQ PWPHFADELQ ARLSKNPKES IKALNLGNYD NEKLESLQP VFVSRMPKRS ITGAAHQETL RRYIGIDERS GKIQTVVKKK LSEIQLDKTG HFPMYGKESD PRTYEAIRQR LLEHNNDPKK AFQEPLYKP KKNGELGPII RTIKIIDTTN QVIPLNDGKT VAYNSNIVRV DVFEKDGKYY CVPIYTIDMM KGILPNKAIE P NKPYSEWK EMTEDYTFRF SLYPNDLIRI EFPREKTIKT AVGEEIKIKD LFAYYQTIDS SNGGLSLVSH DNNFSLRSIG SR TLKRFEK YQVDVLGNIY KVRGEKRVGV ASSSHSKAGE TIRPL

UniProtKB: UNIPROTKB: A0A1W6VMQ3

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分子 #7: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 7 / コピー数: 6 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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分子 #8: GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE

分子名称: GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 8 / コピー数: 1 / 式: GTP
分子量理論値: 523.18 Da
Chemical component information

ChemComp-GTP:
GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / GTP / GTP, エネルギー貯蔵分子*YM

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分子 #9: water

分子名称: water / タイプ: ligand / ID: 9 / コピー数: 21 / 式: HOH
分子量理論値: 18.015 Da
Chemical component information

ChemComp-HOH:
WATER

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.5
糖包埋材質: ice
凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
平均電子線量: 60.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 2.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 353229
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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