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基本情報
登録情報 | ![]() | |||||||||
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タイトル | E. coli MlaC bound to MlaFEDB | |||||||||
![]() | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 1 | |||||||||
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![]() | E. coli / bacteria / outer membrane / cryo-EM / lipid transport / mla / structural biology | |||||||||
生物種 | ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.6 Å | |||||||||
![]() | MacRae MR / Coudray N / Ekiert D / Bhabha G | |||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Protein-protein interactions in the Mla lipid transport system probed by computational structure prediction and deep mutational scanning. 著者: Mark R MacRae / Dhenesh Puvanendran / Max A B Haase / Nicolas Coudray / Ljuvica Kolich / Cherry Lam / Minkyung Baek / Gira Bhabha / Damian C Ekiert / ![]() 要旨: The outer membrane (OM) of Gram-negative bacteria is an asymmetric bilayer that protects the cell from external stressors, such as antibiotics. The Mla transport system is implicated in the ...The outer membrane (OM) of Gram-negative bacteria is an asymmetric bilayer that protects the cell from external stressors, such as antibiotics. The Mla transport system is implicated in the Maintenance of OM Lipid Asymmetry by mediating retrograde phospholipid transport across the cell envelope. Mla uses a shuttle-like mechanism to move lipids between the MlaFEDB inner membrane complex and the MlaA-OmpF/C OM complex, via a periplasmic lipid-binding protein, MlaC. MlaC binds to MlaD and MlaA, but the underlying protein-protein interactions that facilitate lipid transfer are not well understood. Here, we take an unbiased deep mutational scanning approach to map the fitness landscape of MlaC from Escherichia coli, which provides insights into important functional sites. Combining this analysis with AlphaFold2 structure predictions and binding experiments, we map the MlaC-MlaA and MlaC-MlaD protein-protein interfaces. Our results suggest that the MlaD and MlaA binding surfaces on MlaC overlap to a large extent, leading to a model in which MlaC can only bind one of these proteins at a time. Low-resolution cryo-electron microscopy (cryo-EM) maps of MlaC bound to MlaFEDB suggest that at least two MlaC molecules can bind to MlaD at once, in a conformation consistent with AlphaFold2 predictions. These data lead us to a model for MlaC interaction with its binding partners and insights into lipid transfer steps that underlie phospholipid transport between the bacterial inner and OMs. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 52 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 28.6 KB 28.6 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 38.6 KB | ||
マスクデータ | ![]() | 107.2 MB | ![]() | |
その他 | ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() | 53.2 MB 53 MB 52.1 MB 99.3 MB 99.3 MB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 1 | ||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.096 Å | ||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | ![]() | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 2
ファイル | emd_40162_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 2 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 3
ファイル | emd_40162_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 3 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 4
ファイル | emd_40162_additional_3.map | ||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, Map 4 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: E. coli MlaFEDB bound to MlaC, half map A of Map 1
ファイル | emd_40162_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, half map A of Map 1 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: E. coli MlaFEDB bound to MlaC, half map B of Map 1
ファイル | emd_40162_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | E. coli MlaFEDB bound to MlaC, half map B of Map 1 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
-全体 : E. coli MlaC bound to MlaFEDB
全体 | 名称: E. coli MlaC bound to MlaFEDB |
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要素 |
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-超分子 #1: E. coli MlaC bound to MlaFEDB
超分子 | 名称: E. coli MlaC bound to MlaFEDB / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
-分子 #1: MlaE
分子 | 名称: MlaE / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MLLNALASLG HKGIKTLRTF GRAGLMLFNA LVGKPEFRKH APLLVRQLYN VGVLSMLIIV VSGVFIGMVL GLQGYLVLTT YSAETSLGML VALSLLRELG PVVAALLFAG RAGSALTAEI GLMRATEQLS SMEMMAVDPL RRVISPRFWA GVISLPLLTV IFVAVGIWGG ...文字列: MLLNALASLG HKGIKTLRTF GRAGLMLFNA LVGKPEFRKH APLLVRQLYN VGVLSMLIIV VSGVFIGMVL GLQGYLVLTT YSAETSLGML VALSLLRELG PVVAALLFAG RAGSALTAEI GLMRATEQLS SMEMMAVDPL RRVISPRFWA GVISLPLLTV IFVAVGIWGG SLVGVSWKGI DSGFFWSAMQ NAVDWRMDLV NCLIKSVVFA ITVTWISLFN GYDAIPTSAG ISRATTRTVV HSSLAVLGLD FVLTALMFGN |
-分子 #2: MlaF
分子 | 名称: MlaF / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MEQSVANLVD MRDVSFTRG N RCIFDNIS LT VPRGKIT AIM GPSGIG KTTL LRLIG GQIAP DHGE ILFDGE NIP AMSRSRL YT VRKRMSML F QSGALFTDM NVFDNVAYPL REHTQLPAP L LHSTVMMK LE AVGLRGA AKL MPSELS GGMA RRAAL ...文字列: MEQSVANLVD MRDVSFTRG N RCIFDNIS LT VPRGKIT AIM GPSGIG KTTL LRLIG GQIAP DHGE ILFDGE NIP AMSRSRL YT VRKRMSML F QSGALFTDM NVFDNVAYPL REHTQLPAP L LHSTVMMK LE AVGLRGA AKL MPSELS GGMA RRAAL ARAIA LEPD LIMFDE PFV GQDPITM GV LVKLISEL N SALGVTCVV VSHDVPEVLS IADHAWILA D KKIVAHGS AQ ALQANPD PRV RQFLDG IADG PVPFR YPAGD YHAD LLPGS |
-分子 #3: MlaD
分子 | 名称: MlaD / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MHHHHHHQHQ HENLYFQGMQ TKKNEIWV GIFLLAALLA ALFVCLKAA N VTSIRTEP TY TLYATFD NIG GLKARS PVSI GGVVV GRVAD ITLD PKTYLP RVT LEIEQRY NH IPDTSSLS I RTSGLLGEQ YLALNVGFED PELGTAILK D GDTIQDTK ...文字列: MHHHHHHQHQ HENLYFQGMQ TKKNEIWV GIFLLAALLA ALFVCLKAA N VTSIRTEP TY TLYATFD NIG GLKARS PVSI GGVVV GRVAD ITLD PKTYLP RVT LEIEQRY NH IPDTSSLS I RTSGLLGEQ YLALNVGFED PELGTAILK D GDTIQDTK SA MVLEDLI GQF LYGSKG DDNK NSGDA PAAAP GNNE TTEPVG TTK |
-分子 #4: MlaB
分子 | 名称: MlaB / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MSESLSWMQT GDTLALSGE L DQDVLLPL WE MREEAVK GIT CIDLSR VSRV DTGGL ALLLH LIDL AKKQGN NVT LQGVNDK VY TLAKLYNL P ADVLPR |
-分子 #5: Foldon-MlaC
分子 | 名称: Foldon-MlaC / タイプ: protein_or_peptide / ID: 5 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MHHHHHHPGS GYIPEAPRDG QAYVRKDGEW VLLSTFLSSG GGSGGGSGGG SSSGGGSGGG SGGGSSSGGG SGGGSGGGSA DQTNPYKLMD EAAQKTFDRL KNEQPQIRAN PDYLRTIVDQ ELLPYVQVKY AGALVLGQYY KSATPAQREA YFAAFREYLK QAYGQALAMY ...文字列: MHHHHHHPGS GYIPEAPRDG QAYVRKDGEW VLLSTFLSSG GGSGGGSGGG SSSGGGSGGG SGGGSSSGGG SGGGSGGGSA DQTNPYKLMD EAAQKTFDRL KNEQPQIRAN PDYLRTIVDQ ELLPYVQVKY AGALVLGQYY KSATPAQREA YFAAFREYLK QAYGQALAMY HGQTYQIAPE QPLGDKTIVP IRVTIIDPNG RPPVRLDFQW RKNSQTGNWQ AYDMIAEGVS MITTKQNEWG TLLRTKGIDG LTAQLKSISQ QKITLEEKK |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
濃度 | 0.2 mg/mL | ||||||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 8 構成要素:
詳細: 10 mM Na2HPO4.7H2O, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, 0.25 mM DDM | ||||||||||||||||||
グリッド | モデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 支持フィルム - Film thickness: 2 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 5 sec. | ||||||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 293 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TECNAI ARCTICA |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 53.0 e/Å2 / 詳細: Pixel size = 0.5480 Angstrom |
電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.6 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.1 µm / 倍率(公称値): 36000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | ![]() モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
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-原子モデル構築 2
初期モデル | PDB ID: Chain - Source name: ModelArchive / Chain - Initial model type: in silico model / 詳細: computed with AlphaFold2 |
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