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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-29570
タイトルMouse apoferritin from data collected on Glacios microscope equipped with a Falcon 3 camera operating in integrating mode, in 200-500 nm ice thickness
マップデータMouse apoferritin from data collected on Glacios microscope equipped with a Falcon 3 camera operating in integrating mode, in 200-500 nm ice thickness
試料
  • 複合体: apoferritin
生物種Mus musculus (ハツカネズミ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 9.84 Å
データ登録者Neselu K / Wang B / Rice WJ / Potter CS / Carragher B / Chua EYD
資金援助 米国, 2件
OrganizationGrant number国
Simons FoundationSF349247 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM103310 米国
引用ジャーナル: J Struct Biol X / 年: 2023
タイトル: Measuring the effects of ice thickness on resolution in single particle cryo-EM.
著者: Kasahun Neselu / Bing Wang / William J Rice / Clinton S Potter / Bridget Carragher / Eugene Y D Chua /
要旨: Ice thickness is a critical parameter in single particle cryo-EM - too thin ice can break during imaging or exclude the sample of interest, while ice that is too thick contributes to more inelastic ...Ice thickness is a critical parameter in single particle cryo-EM - too thin ice can break during imaging or exclude the sample of interest, while ice that is too thick contributes to more inelastic scattering that precludes obtaining high resolution reconstructions. Here we present the practical effects of ice thickness on resolution, and the influence of energy filters, accelerating voltage, or detector mode. We collected apoferritin data with a wide range of ice thicknesses on three microscopes with different instrumentation and settings. We show that on a 300 kV microscope, using a 20 eV energy filter slit has a greater effect on improving resolution in thicker ice; that operating at 300 kV instead of 200 kV accelerating voltage provides significant resolution improvements at an ice thickness above 150 nm; and that on a 200 kV microscope using a detector operating in super resolution mode enables good reconstructions for up to 200 nm ice thickness, while collecting in counting instead of linear mode leads to improvements in resolution for ice of 50-150 nm thickness. Our findings can serve as a guide for users seeking to optimize data collection or sample preparation routines for both single particle and in situ cryo-EM. We note that most in situ data collection is done on samples in a range of ice thickness above 150 nm so these results may be especially relevant to that community.
履歴
登録2023年1月26日-
ヘッダ(付随情報) 公開2023年2月22日-
マップ公開2023年2月22日-
更新2023年2月22日-
現状2023年2月22日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_29570.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_29570.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Mouse apoferritin from data collected on Glacios microscope equipped with a Falcon 3 camera operating in integrating mode, in 200-500 nm ice thickness
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.2 Å/pix.
x 256 pix.
= 308.224 Å		1.2 Å/pix.
x 256 pix.
= 308.224 Å		1.2 Å/pix.
x 256 pix.
= 308.224 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.204 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.215
最小 - 最大-0.47482714 - 0.700344
平均 (標準偏差)-0.000798943 (±0.0549254)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ256256256
Spacing256256256
セルA=B=C: 308.224 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_29570_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_29570_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : apoferritin

全体名称: apoferritin
要素
  • 複合体: apoferritin

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超分子 #1: apoferritin

超分子名称: apoferritin / タイプ: complex / ID: 1 / キメラ: Yes / 親要素: 0
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
分子量理論値: 450 KDa

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度8 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度名称式
30.0 mMHEPES
150.0 mMSodium chlorideNaCl
1.0 mMDithiothreitol
グリッドモデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 支持フィルム - 材質: GOLD / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 295.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 平均露光時間: 2.0 sec. / 平均電子線量: 51.22 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.8 µm / 倍率（公称値）: 81000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 9.84 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.0.1) / 使用した粒子像数: 14000
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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