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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-34530 | ||||||||||||||||||||||||
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タイトル | Membrane protein A | ||||||||||||||||||||||||
マップデータ | |||||||||||||||||||||||||
試料 |
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キーワード | Membrane Protein / Cryo-EM | ||||||||||||||||||||||||
生物種 | Hyphochytrium catenoides (真核生物) | ||||||||||||||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.56 Å | ||||||||||||||||||||||||
データ登録者 | Tajima S / Kim Y / Yamashita K / Fukuda M / Deisseroth K / Kato HE | ||||||||||||||||||||||||
資金援助 | 日本, 7件
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引用 | ジャーナル: Cell / 年: 2023 タイトル: Structural basis for ion selectivity in potassium-selective channelrhodopsins. 著者: Seiya Tajima / Yoon Seok Kim / Masahiro Fukuda / YoungJu Jo / Peter Y Wang / Joseph M Paggi / Masatoshi Inoue / Eamon F X Byrne / Koichiro E Kishi / Seiwa Nakamura / Charu Ramakrishnan / ...著者: Seiya Tajima / Yoon Seok Kim / Masahiro Fukuda / YoungJu Jo / Peter Y Wang / Joseph M Paggi / Masatoshi Inoue / Eamon F X Byrne / Koichiro E Kishi / Seiwa Nakamura / Charu Ramakrishnan / Shunki Takaramoto / Takashi Nagata / Masae Konno / Masahiro Sugiura / Kota Katayama / Toshiki E Matsui / Keitaro Yamashita / Suhyang Kim / Hisako Ikeda / Jaeah Kim / Hideki Kandori / Ron O Dror / Keiichi Inoue / Karl Deisseroth / Hideaki E Kato / 要旨: KCR channelrhodopsins (K-selective light-gated ion channels) have received attention as potential inhibitory optogenetic tools but more broadly pose a fundamental mystery regarding how their K ...KCR channelrhodopsins (K-selective light-gated ion channels) have received attention as potential inhibitory optogenetic tools but more broadly pose a fundamental mystery regarding how their K selectivity is achieved. Here, we present 2.5-2.7 Å cryo-electron microscopy structures of HcKCR1 and HcKCR2 and of a structure-guided mutant with enhanced K selectivity. Structural, electrophysiological, computational, spectroscopic, and biochemical analyses reveal a distinctive mechanism for K selectivity; rather than forming the symmetrical filter of canonical K channels achieving both selectivity and dehydration, instead, three extracellular-vestibule residues within each monomer form a flexible asymmetric selectivity gate, while a distinct dehydration pathway extends intracellularly. Structural comparisons reveal a retinal-binding pocket that induces retinal rotation (accounting for HcKCR1/HcKCR2 spectral differences), and design of corresponding KCR variants with increased K selectivity (KALI-1/KALI-2) provides key advantages for optogenetic inhibition in vitro and in vivo. Thus, discovery of a mechanism for ion-channel K selectivity also provides a framework for next-generation optogenetics. | ||||||||||||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_34530.map.gz | 18.1 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-34530-v30.xml emd-34530.xml | 20.1 KB 20.1 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_34530_fsc.xml | 9.2 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_34530.png | 209.3 KB | ||
マスクデータ | emd_34530_msk_1.map | 19.4 MB | マスクマップ | |
Filedesc metadata | emd-34530.cif.gz | 6.2 KB | ||
その他 | emd_34530_additional_1.map.gz emd_34530_half_map_1.map.gz emd_34530_half_map_2.map.gz | 17.3 MB 17.7 MB 17.7 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-34530 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-34530 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_34530_validation.pdf.gz | 854.7 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_34530_full_validation.pdf.gz | 854.3 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_34530_validation.xml.gz | 14.7 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_34530_validation.cif.gz | 19 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-34530 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-34530 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_34530.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 19.4 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.83 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_34530_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: #1
ファイル | emd_34530_additional_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_34530_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_34530_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : HcKCR1
全体 | 名称: HcKCR1 |
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要素 |
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-超分子 #1: HcKCR1
超分子 | 名称: HcKCR1 / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1 |
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由来(天然) | 生物種: Hyphochytrium catenoides (真核生物) |
-分子 #1: HcKCR1
分子 | 名称: HcKCR1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Hyphochytrium catenoides (真核生物) |
分子量 | 理論値: 31.399768 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: GPMPFYDSRP PEGWPKGSIN DMDYPLLGSI CAVCCVFVAG SGIWMLYRLD LGMGYSCKPY KSGRAPEVNS LSGIICLLCG TMYAAKSFD FFDGGGTPFS LNWYWYLDYV FTCPLLILDF AFTLDLPHKI RYFFAVFLTL WCGVAAFVTP SAYRFAYYAL G CCWFTPFA ...文字列: GPMPFYDSRP PEGWPKGSIN DMDYPLLGSI CAVCCVFVAG SGIWMLYRLD LGMGYSCKPY KSGRAPEVNS LSGIICLLCG TMYAAKSFD FFDGGGTPFS LNWYWYLDYV FTCPLLILDF AFTLDLPHKI RYFFAVFLTL WCGVAAFVTP SAYRFAYYAL G CCWFTPFA LSLMRHVKER YLVYPPKCQR WLFWACVIFF GFWPMFPILF IFSWLGTGHI SQQAFYIIHA FLDLTCKSIF GI LMTVFRL ELEEHTEVQG LPLNEPETLS LEVLFQ |
-分子 #2: RETINAL
分子 | 名称: RETINAL / タイプ: ligand / ID: 2 / コピー数: 1 / 式: RET |
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分子量 | 理論値: 284.436 Da |
Chemical component information | ChemComp-RET: |
-分子 #3: (7R,17E,20E)-4-HYDROXY-N,N,N-TRIMETHYL-9-OXO-7-[(PALMITOYLOXY)MET...
分子 | 名称: (7R,17E,20E)-4-HYDROXY-N,N,N-TRIMETHYL-9-OXO-7-[(PALMITOYLOXY)METHYL]-3,5,8-TRIOXA-4-PHOSPHAHEXACOSA-17,20-DIEN-1-AMINIUM 4-OXIDE タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 10 / 式: PSC |
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分子量 | 理論値: 759.068 Da |
Chemical component information | ChemComp-PSC: |
-分子 #4: PALMITIC ACID
分子 | 名称: PALMITIC ACID / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 5 / 式: PLM |
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分子量 | 理論値: 256.424 Da |
Chemical component information | ChemComp-PLM: |
-分子 #5: water
分子 | 名称: water / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 21 / 式: HOH |
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分子量 | 理論値: 18.015 Da |
Chemical component information | ChemComp-HOH: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.5 |
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糖包埋 | 材質: Lipid / 詳細: nanodisc composed of MSP1D1E3 and soybean lipids |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: GOLD / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 48.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.6 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |