[日本語] English
万見
- EMDB-26379: Structure of PA28gamma bound to the human 20S proteasome with C7 ... -

+
データを開く


IDまたはキーワード:

読み込み中...

-
基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-26379
タイトルStructure of PA28gamma bound to the human 20S proteasome with C7 symmetry.
マップデータComplex of PA28gamma(REGgamma) bound to the human 20S proteasome with C7 symmetry applied.
試料
  • 複合体: CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.
    • タンパク質・ペプチド: PA28 gamma
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.4 Å
データ登録者Smith DM / Thomas T
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01GM107129 米国
引用ジャーナル: J Biol Chem / 年: 2022
タイトル: Proteasome activator 28γ (PA28γ) allosterically activates trypsin-like proteolysis by binding to the α-ring of the 20S proteasome.
著者: Taylor A Thomas / David M Smith /
要旨: Proteasome activator 28γ (PA28γ/REGγ) is a member of the 11S family of proteasomal regulators that is constitutively expressed in the nucleus and implicated in various diseases, including certain ...Proteasome activator 28γ (PA28γ/REGγ) is a member of the 11S family of proteasomal regulators that is constitutively expressed in the nucleus and implicated in various diseases, including certain cancers and systemic lupus erythematosus. Despite years of investigation, how PA28γ functions to stimulate proteasomal protein degradation remains unclear. Alternative hypotheses have been proposed for the molecular mechanism of PA28γ, including the following: (1) substrate selection, (2) allosteric upregulation of the trypsin-like (T-L) site, (3) allosteric inhibition of the chymotrypsin-like (CT-L) and caspase-like (C-L) sites, (4) conversion of the CT-L or C-L sites to new T-L sites, and (5) gate opening alone or in combination with a previous hypothesis. Here, by mechanistically decoupling gating effects from active site effects, we unambiguously demonstrate that WT PA28γ allosterically activates the T-L site. We show PA28γ binding increases the Kcat/Km by 13-fold for T-L peptide substrates while having little-to-no effect on hydrolysis kinetics for CT-L or C-L substrates. Furthermore, mutagenesis and domain swaps of PA28γ reveal that it does not select for T-L peptide substrates through either the substrate entry pore or the distal intrinsically disordered region. We also show that a previously reported point mutation can functionally switch PA28γ from a T-L activating to a gate-opening activator in a mutually exclusive fashion. Finally, using cryogenic electron microscopy, we visualized the PA28γ-proteasome complex at 4.3 Å and confirmed its expected quaternary structure. The results of this study provide unambiguous evidence that PA28γ can function by binding the 20S proteasome to allosterically activate the T-L proteolytic site.
履歴
登録2022年3月5日-
ヘッダ(付随情報) 公開2022年7月27日-
マップ公開2022年7月27日-
更新2022年7月27日-
現状2022年7月27日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

-
構造の表示

添付画像

emd_26379.png

ダウンロードとリンク

-
マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_26379.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 512 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Complex of PA28gamma(REGgamma) bound to the human 20S proteasome with C7 symmetry applied.
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.08 Å/pix.
x 512 pix.
= 552.96 Å		1.08 Å/pix.
x 512 pix.
= 552.96 Å		1.08 Å/pix.
x 512 pix.
= 552.96 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.08 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.64
最小 - 最大-0.66057116 - 1.4500252
平均 (標準偏差)0.0020204706 (±0.06331693)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ512512512
Spacing512512512
セルA=B=C: 552.96 Å
α=β=γ: 90.0 °

-
添付データ

-
試料の構成要素

-
全体 : CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.

全体名称: CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.
要素
  • 複合体: CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.
    • タンパク質・ペプチド: PA28 gamma

-
超分子 #1: CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.

超分子名称: CryoEM structure of the PA28gamma 20S proteasome complex.
タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all / 詳細: C7 symmetry is applied.
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: Escherichia coli BL21 (大腸菌)
分子量理論値: 900 KDa

-
分子 #1: PA28 gamma

分子名称: PA28 gamma / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: Escherichia coli 'BL21-Gold(DE3)pLysS AG' (大腸菌)
配列文字列: MASLLKVDQE VKLKVDSFRE RITSEAEDLV ANFFPKKLLE LDSFLKEPIL NIHDLTQIHS DMNLPVPDPI LLTNSHDGLD GPTYKKRRLD ECEEAFQGTK VFVMPNGMLK SNQQLVDIIE KVKPEIRLLI EKCNTVKMWV QLLIPRIEDG NNFGVSIQEE TVAELRTVES ...文字列:
MASLLKVDQE VKLKVDSFRE RITSEAEDLV ANFFPKKLLE LDSFLKEPIL NIHDLTQIHS DMNLPVPDPI LLTNSHDGLD GPTYKKRRLD ECEEAFQGTK VFVMPNGMLK SNQQLVDIIE KVKPEIRLLI EKCNTVKMWV QLLIPRIEDG NNFGVSIQEE TVAELRTVES EAASYLDQIS RYYITRAKLV SKIAKYPHVE DYRRTVTEID EKEYISLRLI ISELRNQYVT LHDMILKNIE KIKRPRSSNA ETLY

-
実験情報

-
構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

-
試料調製

濃度0.2 mg/mL
緩衝液pH: 7.4 / 構成要素 - 濃度: 50.0 mM / 構成要素 - 式: Tris-HCL / 構成要素 - 名称: Tris buffer
グリッドモデル: Quantifoil / 材質: COPPER / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE
凍結凍結剤: ETHANE-PROPANE
詳細Recombinate human PA28gamma was combine with human 20S proteasome from Hek293 cells. The sample was monodisperse.

-
電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k)
検出モード: INTEGRATING / 平均電子線量: 50.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

+
画像解析

粒子像選択選択した数: 31712
CTF補正ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 2.3)
初期モデルモデルのタイプ: NONE / 詳細: Ab initio (Reference free)
最終 再構成使用したクラス数: 1 / 想定した対称性 - 点群: C7 (7回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.4 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 3.2) / 使用した粒子像数: 876
初期 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 3次元分類ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
FSC曲線 (解像度の算出)

-
原子モデル構築 1

精密化プロトコル: AB INITIO MODEL

+
万見について

-
お知らせ

-
2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

-
2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

+
2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

+
2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

+
2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

-
万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

他の情報も見る