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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-26347 | |||||||||
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タイトル | Human CST bound to full-length DNA polymerase alpha-primase in a recruitment state | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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生物種 | Homo sapiens (ヒト) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 16.0 Å | |||||||||
データ登録者 | Cai SW / Zinder JC / Svetlov V / Bush MW / Nudler E / Walz T / de Lange T | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2022 タイトル: Cryo-EM structure of the human CST-Polα/primase complex in a recruitment state. 著者: Sarah W Cai / John C Zinder / Vladimir Svetlov / Martin W Bush / Evgeny Nudler / Thomas Walz / Titia de Lange / 要旨: The CST-Polα/primase complex is essential for telomere maintenance and functions to counteract resection at double-strand breaks. We report a 4.6-Å resolution cryo-EM structure of human CST- ...The CST-Polα/primase complex is essential for telomere maintenance and functions to counteract resection at double-strand breaks. We report a 4.6-Å resolution cryo-EM structure of human CST-Polα/primase, captured prior to catalysis in a recruitment state stabilized by chemical cross-linking. Our structure reveals an evolutionarily conserved interaction between the C-terminal domain of the catalytic POLA1 subunit and an N-terminal expansion in metazoan CTC1. Cross-linking mass spectrometry and negative-stain EM analysis provide insight into CST binding by the flexible POLA1 N-terminus. Finally, Coats plus syndrome disease mutations previously characterized to disrupt formation of the CST-Polα/primase complex map to protein-protein interfaces observed in the recruitment state. Together, our results shed light on the architecture and stoichiometry of the metazoan fill-in machinery. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_26347.map.gz | 3.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-26347-v30.xml emd-26347.xml | 24.7 KB 24.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_26347_fsc.xml | 3.6 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_26347.png | 49.5 KB | ||
その他 | emd_26347_half_map_1.map.gz emd_26347_half_map_2.map.gz | 2.8 MB 2.8 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-26347 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-26347 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_26347_validation.pdf.gz | 476.2 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_26347_full_validation.pdf.gz | 475.7 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_26347_validation.xml.gz | 8.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_26347_validation.cif.gz | 11 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-26347 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-26347 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 7u5cC C: 同じ文献を引用 (文献) |
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電子顕微鏡画像生データ | EMPIAR-11130 (タイトル: Single particle cryo-EM of the human CST•Polα/Primase (POLA1 FL) complex in a recruitment state Data size: 317.1 Data #1: Motion corrected micrographs collected on Talos Arctica of CST-Pola/Primase FL complex in recruitment state [micrographs - single frame] Data #2: Motion corrected micrographs collected on Titan Krios of CST-Pola/Primase FL complex in recruitment state [micrographs - single frame]) |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_26347.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 3.8 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 3 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_26347_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_26347_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : CST bound to full-length DNA polymerase alpha-primase and ssDNA
全体 | 名称: CST bound to full-length DNA polymerase alpha-primase and ssDNA |
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要素 |
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-超分子 #1: CST bound to full-length DNA polymerase alpha-primase and ssDNA
超分子 | 名称: CST bound to full-length DNA polymerase alpha-primase and ssDNA タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all / 詳細: GraFix cross-linked |
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分子量 | 理論値: 540 KDa |
-分子 #1: DNA primase catalytic subunit
分子 | 名称: DNA primase catalytic subunit / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: METFDPTELP ELLKLYYRRL FPYSQYYRWL NYGGVIKNYF QHREFSFTLK DDIYIRYQSF NNQSDLEKEM QKMNPYKIDI GAVYSHRPNQ HNTVKLGAFQ AQEKELVFDI DMTDYDDVRR CCSSADICPK CWTLMTMAIR IIDRALKEDF GFKHRLWVYS GRRGVHCWVC ...文字列: METFDPTELP ELLKLYYRRL FPYSQYYRWL NYGGVIKNYF QHREFSFTLK DDIYIRYQSF NNQSDLEKEM QKMNPYKIDI GAVYSHRPNQ HNTVKLGAFQ AQEKELVFDI DMTDYDDVRR CCSSADICPK CWTLMTMAIR IIDRALKEDF GFKHRLWVYS GRRGVHCWVC DESVRKLSSA VRSGIVEYLS LVKGGQDVKK KVHLSEKIHP FIRKSINIIK KYFEEYALVN QDILENKESW DKILALVPET IHDELQQSFQ KSHNSLQRWE HLKKVASRYQ NNIKNDKYGP WLEWEIMLQY CFPRLDINVS KGINHLLKSP FSVHPKTGRI SVPIDLQKVD QFDPFTVPTI SFICRELDAI STNEEEKEEN EAESDVKHRT RDYKKTSLAP YVKVFEHFLE NLDKSRKGEL LKKSDLQKDF |
-分子 #2: DNA primase large subunit PRIM2
分子 | 名称: DNA primase large subunit PRIM2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MEFSGRKWRK LRLAGDQRNA SYPHCLQFYL QPPSENISLI EFENLAIDRV KLLKSVENLG VSYVKGTEQY QSKLESELRK LKFSYRENLE DEYEPRRRDH ISHFILRLAY CQSEELRRWF IQQEMDLLRF RFSILPKDKI QDFLKDSQLQ FEAISDEEKT LREQEIVASS ...文字列: MEFSGRKWRK LRLAGDQRNA SYPHCLQFYL QPPSENISLI EFENLAIDRV KLLKSVENLG VSYVKGTEQY QSKLESELRK LKFSYRENLE DEYEPRRRDH ISHFILRLAY CQSEELRRWF IQQEMDLLRF RFSILPKDKI QDFLKDSQLQ FEAISDEEKT LREQEIVASS PSLSGLKLGF ESIYKIPFAD ALDLFRGRKV YLEDGFAYVP LKDIVAIILN EFRAKLSKAL ALTARSLPAV QSDERLQPLL NHLSHSYTGQ DYSTQGNVGK ISLDQIDLLS TKSFPPCMRQ LHKALRENHH LRHGGRMQYG LFLKGIGLTL EQALQFWKQE FIKGKMDPDK FDKGYSYNIR HSFGKEGKRT DYTPFSCLKI ILSNPPSQGD YHGCPFRHSD PELLKQKLQS YKISPGGISQ ILDLVKGTHY QVACQKYFEM IHNVDDCGFS LNHPNQFFCE SQRILNGGKD IKKEPIQPET PQPKPSVQKT KDASSALASL NSSLEMDMEG LEDYFSEDS |
-分子 #3: DNA polymerase alpha catalytic subunit POLA1
分子 | 名称: DNA polymerase alpha catalytic subunit POLA1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA-directed DNA polymerase |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MAPVHGDDSL SDSGSFVSSR ARREKKSKKG RQEALERLKK AKAGEKYKYE VEDFTGVYEE VDEEQYSKLV QARQDDDWIV DDDGIGYVED GREIFDDDLE DDALDADEKG KDGKARNKDK RNVKKLAVTK PNNIKSMFIA CAGKKTADKA VDLSKDGLLG DILQDLNTET ...文字列: MAPVHGDDSL SDSGSFVSSR ARREKKSKKG RQEALERLKK AKAGEKYKYE VEDFTGVYEE VDEEQYSKLV QARQDDDWIV DDDGIGYVED GREIFDDDLE DDALDADEKG KDGKARNKDK RNVKKLAVTK PNNIKSMFIA CAGKKTADKA VDLSKDGLLG DILQDLNTET PQITPPPVMI LKKKRSIGAS PNPFSVHTAT AVPSGKIASP VSRKEPPLTP VPLKRAEFAG DDVQVESTEE EQESGAMEFE DGDFDEPMEV EEVDLEPMAA KAWDKESEPA EEVKQEADSG KGTVSYLGSF LPDVSCWDID QEGDSSFSVQ EVQVDSSHLP LVKGADEEQV FHFYWLDAYE DQYNQPGVVF LFGKVWIESA ETHVSCCVMV KNIERTLYFL PREMKIDLNT GKETGTPISM KDVYEEFDEK IATKYKIMKF KSKPVEKNYA FEIPDVPEKS EYLEVKYSAE MPQLPQDLKG ETFSHVFGTN TSSLELFLMN RKIKGPCWLE VKSPQLLNQP VSWCKVEAMA LKPDLVNVIK DVSPPPLVVM AFSMKTMQNA KNHQNEIIAM AALVHHSFAL DKAAPKPPFQ SHFCVVSKPK DCIFPYAFKE VIEKKNVKVE VAATERTLLG FFLAKVHKID PDIIVGHNIY GFELEVLLQR INVCKAPHWS KIGRLKRSNM PKLGGRSGFG ERNATCGRMI CDVEISAKEL IRCKSYHLSE LVQQILKTER VVIPMENIQN MYSESSQLLY LLEHTWKDAK FILQIMCELN VLPLALQITN IAGNIMSRTL MGGRSERNEF LLLHAFYENN YIVPDKQIFR KPQQKLGDED EEIDGDTNKY KKGRKKAAYA GGLVLDPKVG FYDKFILLLD FNSLYPSIIQ EFNICFTTVQ RVASEAQKVT EDGEQEQIPE LPDPSLEMGI LPREIRKLVE RRKQVKQLMK QQDLNPDLIL QYDIRQKALK LTANSMYGCL GFSYSRFYAK PLAALVTYKG REILMHTKEM VQKMNLEVIY GDTDSIMINT NSTNLEEVFK LGNKVKSEVN KLYKLLEIDI DGVFKSLLLL KKKKYAALVV EPTSDGNYVT KQELKGLDIV RRDWCDLAKD TGNFVIGQIL SDQSRDTIVE NIQKRLIEIG ENVLNGSVPV SQFEINKALT KDPQDYPDKK SLPHVHVALW INSQGGRKVK AGDTVSYVIC QDGSNLTASQ RAYAPEQLQK QDNLTIDTQY YLAQQIHPVV ARICEPIDGI DAVLIATWLG LDPTQFRVHH YHKDEENDAL LGGPAQLTDE EKYRDCERFK CPCPTCGTEN IYDNVFDGSG TDMEPSLYRC SNIDCKASPL TFTVQLSNKL IMDIRRFIKK YYDGWLICEE PTCRNRTRHL PLQFSRTGPL CPACMKATLQ PEYSDKSLYT QLCFYRYIFD AECALEKLTT DHEKDKLKKQ FFTPKVLQDY RKLKNTAEQF LSRSGYSEVN LSKLFAGCAV KS |
-分子 #4: DNA polymerase alpha B subunit POLA2
分子 | 名称: DNA polymerase alpha B subunit POLA2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MSASAQQLAE ELQIFGLDCE EALIEKLVEL CVQYGQNEEG MVGELIAFCT STHKVGLTSE ILNSFEHEFL SKRLSKARHS TCKDSGHAGA RDIVSIQELI EVEEEEEILL NSYTTPSKGS QKRAISTPET PLTKRSVSTR SPHQLLSPSS FSPSATPSQK YNSRSNRGEV ...文字列: MSASAQQLAE ELQIFGLDCE EALIEKLVEL CVQYGQNEEG MVGELIAFCT STHKVGLTSE ILNSFEHEFL SKRLSKARHS TCKDSGHAGA RDIVSIQELI EVEEEEEILL NSYTTPSKGS QKRAISTPET PLTKRSVSTR SPHQLLSPSS FSPSATPSQK YNSRSNRGEV VTSFGLAQGV SWSGRGGAGN ISLKVLGCPE ALTGSYKSMF QKLPDIREVL TCKIEELGSE LKEHYKIEAF TPLLAPAQEP VTLLGQIGCD SNGKLNNKSV ILEGDREHSS GAQIPVDLSE LKEYSLFPGQ VVIMEGINTT GRKLVATKLY EGVPLPFYQP TEEDADFEQS MVLVACGPYT TSDSITYDPL LDLIAVINHD RPDVCILFGP FLDAKHEQVE NCLLTSPFED IFKQCLRTII EGTRSSGSHL VFVPSLRDVH HEPVYPQPPF SYSDLSREDK KQVQFVSEPC SLSINGVIFG LTSTDLLFHL GAEEISSSSG TSDRFSRILK HILTQRSYYP LYPPQEDMAI DYESFYVYAQ LPVTPDVLII PSELRYFVKD VLGCVCVNPG RLTKGQVGGT FARLYLRRPA ADGAERQSPC IAVQVVRI |
-分子 #5: CST complex subunit Ctc1
分子 | 名称: CST complex subunit Ctc1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 5 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MAAGRAQVPS SEQAWLEDAQ VFIQKTLCPA VKEPNVQLTP LVIDCVKTVW LSQGRNQGST LPLSYSFVSV QDLKTHQRLP CCSHLSWSSS AYQAWAQEAG PNGNPLPREQ LLLLGTLTDL SADLEQECRN GSLYVRDNTG VLSCELIDLD LSWLGHLFLF PRWSYLPPAR ...文字列: MAAGRAQVPS SEQAWLEDAQ VFIQKTLCPA VKEPNVQLTP LVIDCVKTVW LSQGRNQGST LPLSYSFVSV QDLKTHQRLP CCSHLSWSSS AYQAWAQEAG PNGNPLPREQ LLLLGTLTDL SADLEQECRN GSLYVRDNTG VLSCELIDLD LSWLGHLFLF PRWSYLPPAR WNSSGEGHLE LWDAPVPVFP LTISPGPVTP IPVLYPESAS CLLRLRNKLR GVQRNLAGSL VRLSALVKSK QKAYFILSLG RSHPAVTHVS IIVQVPAQLV WHRALRPGTA YVLTELRVSK IRGQRQHVWM TSQSSRLLLL KPECVQELEL ELEGPLLEAD PKPLPMPSNS EDKKDPESLV RYSRLLSYSG AVTGVLNEPA GLYELDGQLG LCLAYQQFRG LRRVMRPGVC LQLQDVHLLQ SVGGGTRRPV LAPCLRGAVL LQSFSRQKPG AHSSRQAYGA SLYEQLVWER QLGLPLYLWA TKALEELACK LCPHVLRHHQ FLQHSSPGSP SLGLQLLAPT LDLLAPPGSP VRNAHNEILE EPHHCPLQKY TRLQTPSSFP TLATLKEEGQ RKAWASFDPK ALLPLPEASY LPSCQLNRRL AWSWLCLLPS AFCPAQVLLG VLVASSHKGC LQLRDQSGSL PCLLLAKHSQ PLSDPRLIGC LVRAERFQLI VERDVRSSFP SWKELSMPGF IQKQQARVYV QFFLADALIL PVPRPCLHSA TPSTPQTDPT GPEGPHLGQS RLFLLCHKEA LMKRNFCVPP GASPEVPKPA LSFYVLGSWL GGTQRKEGTG WGLPEPQGND DNDQKVHLIF FGSSVRWFEF LHPGQVYRLI APGPATPMLF EKDGSSCISR RPLELAGCAS CLTVQDNWTL ELESSQDIQD VLDANKSLPE SSLTDLLSDN FTDSLVSFSA EILSRTLCEP LVASLWMKLG NTGAMRRCVK LTVALETAEC EFPPHLDVYI EDPHLPPSLG LLPGARVHFS QLEKRVSRSH NVYCCFRSST YVQVLSFPPE TTISIPLPHI YLAELLQGGQ SPFQATASCH IVSVFSLQLF WVCAYCTSIC RQGKCTRLGS TCPTQTAISQ AIIRLLVEDG TAEAVVTCRN HHVAAALGLC PREWASLLDF VQVPGRVVLQ FAGPGAQLES SARVDEPMTM FLWTLCTSPS VLRPIVLSFE LERKPSKIVP LEPPRLQRFQ CGELPFLTHV NPRLRLSCLS IRESEYSSSL GILASSC |
-分子 #6: CST complex subunit Stn1
分子 | 名称: CST complex subunit Stn1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 6 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MQPGSSRCEE ETPSLLWGLD PVFLAFAKLY IRDILDMKES RQVPGVFLYN GHPIKQVDVL GTVIGVRERD AFYSYGVDDS TGVINCICWK KLNTESVSAA PSAARELSLT SQLKKLQETI EQKTKIEIGD TIRVRGSIRT YREEREIHAT TYYKVDDPVW NIQIARMLEL ...文字列: MQPGSSRCEE ETPSLLWGLD PVFLAFAKLY IRDILDMKES RQVPGVFLYN GHPIKQVDVL GTVIGVRERD AFYSYGVDDS TGVINCICWK KLNTESVSAA PSAARELSLT SQLKKLQETI EQKTKIEIGD TIRVRGSIRT YREEREIHAT TYYKVDDPVW NIQIARMLEL PTIYRKVYDQ PFHSSALEKE EALSNPGALD LPSLTSLLSE KAKEFLMENR VQSFYQQELE MVESLLSLAN QPVIHSASSD QVNFKKDTTS KAIHSIFKNA IQLLQEKGLV FQKDDGFDNL YYVTREDKDL HRKIHRIIQQ DCQKPNHMEK GCHFLHILAC ARLSIRPGLS EAVLQQVLEL LEDQSDIVST MEHYYTAF |
-分子 #7: CST complex subunit Ten1
分子 | 名称: CST complex subunit Ten1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 7 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MMLPKPGTYY LPWEVSAGQV PDGSTLRTFG RLCLYDMIQS RVTLMAQHGS DQHQVLVCTK LVEPFHAQVG SLYIVLGELQ HQQDRGSVVK ARVLTCVEGM NLPLLEQAIR EQRLYKQERG GSQ |
-分子 #8: Telomeric G-strand ssDNA (3 repeats)
分子 | 名称: Telomeric G-strand ssDNA (3 repeats) / タイプ: dna / ID: 8 / 分類: DNA |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
配列 | 文字列: (DG)(DG)(DT)(DT)(DA)(DG)(DG)(DG)(DT)(DT) (DA)(DG)(DG)(DG)(DT)(DT)(DA)(DG) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.5 |
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凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡法 #1
Microscopy ID | 1 |
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顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
撮影 | Image recording ID: 1 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 57.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2.2 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.0 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-電子顕微鏡法 #1~
Microscopy ID | 1 |
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顕微鏡 | FEI TALOS ARCTICA |
撮影 | Image recording ID: 2 フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 平均電子線量: 53.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.5 µm |
実験機器 | モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |