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タイトルQualitative Analyses of Polishing and Precoating FIB Milled Crystals for MicroED.
ジャーナル・号・ページStructure, Vol. 27, Issue 10, Page 1594-11600.e2, Year 2019
掲載日2019年10月1日
著者Michael W Martynowycz / Wei Zhao / Johan Hattne / Grant J Jensen / Tamir Gonen /
PubMed 要旨Microcrystal electron diffraction (MicroED) leverages the strong interaction between matter and electrons to determine protein structures from vanishingly small crystals. This strong interaction ...Microcrystal electron diffraction (MicroED) leverages the strong interaction between matter and electrons to determine protein structures from vanishingly small crystals. This strong interaction limits the thickness of crystals that can be investigated by MicroED, mainly due to absorption. Recent studies have demonstrated that focused ion-beam (FIB) milling can thin crystals into ideal-sized lamellae; however, it is not clear how to best apply FIB milling for MicroED. Here, the effects of polishing the lamellae, whereby the last few nanometers are milled away using a low-current gallium beam, are explored in both the platinum-precoated and uncoated samples. Our results suggest that precoating samples with a thin layer of platinum followed by polishing the crystal surfaces prior to data collection consistently led to superior results as indicated by higher signal-to-noise ratio, higher resolution, and better refinement statistics. This study lays the foundation for routine and reproducible methodology for sample preparation in MicroED.
リンクStructure / PubMed:31422911 / PubMed Central
手法EM (電子線結晶学)
解像度1.79 - 2.59 Å
構造データ

EMDB-20356, PDB-6pkj:
MicroED structure of proteinase K from an uncoated, single lamella at 2.17A resolution (#2)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.17 Å

EMDB-20357, PDB-6pkk:
MicroED structure of proteinase K from an uncoated, single lamella at 2.18A resolution (#5)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.176 Å

EMDB-20358, PDB-6pkl:
MicroED structure of proteinase K from an uncoated, single lamella at 2.59A resolution (#7)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.59 Å

EMDB-20359, PDB-6pkm:
MicroED structure of proteinase K from an uncoated, single lamella at 2.17A resolution (#8)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.17 Å

EMDB-20360, PDB-6pkn:
MicroED structure of proteinase K from an unpolished, platinum-coated, single lamella at 2.08A resolution (#9)
手法: EM (電子線結晶学)

EMDB-20361: MicroED structure of proteinase K from a platinum-coated, unpolished, single lamella at 2.07A resolution (#12)
PDB-6pko: MicroED structure of proteinase K from a platinum coated, unpolished, single lamella at 2.07A resolution (#12)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.07 Å

EMDB-20362, PDB-6pkp:
MicroED structure of proteinase K from a platinum-coated, polished, single lamella at 1.91A resolution (#10)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.91 Å

EMDB-20363, PDB-6pkq:
MicroED structure of proteinase K from a platinum-coated, polished, single lamella at 1.85A resolution (#11)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.85 Å

EMDB-20364, PDB-6pkr:
MicroED structure of proteinase K from a platinum-coated, polished, single lamella at 1.79A resolution (#13)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.79 Å

EMDB-20365, PDB-6pks:
MicroED structure of proteinase K from low-dose merged lamellae that were not pre-coated with platinum 2.16A resolution (LD)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.16 Å

EMDB-20366, PDB-6pkt:
MicroED structure of proteinase K from merging low-dose, platinum pre-coated lamellae at 1.85A resolution (LDPT)
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.85 Å

化合物

ChemComp-HOH:
WATER

由来
  • parengyodontium album (菌類)
  • Engyodontium album, Tritirachium album
キーワードHYDROLASE

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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  • EMDB/PDB/SASBDBのエントリから引用されている文献のデータベースです
  • Pubmedのデータを利用しています

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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