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- EMDB-6899: Full length cryo-EM structure of Drosophila-sumo-C3PO (sumo-TRAX ... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-6899
タイトルFull length cryo-EM structure of Drosophila-sumo-C3PO (sumo-TRAX + translin) complex
マップデータDrosophila full length cryoEM structure of sumo-C3PO complex (sumo-TRAX translin)
試料
  • 複合体: C3PO
    • 複合体: sumo-TRAX
    • 複合体: Translin
生物種Drosophila (ハエ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 12.8 Å
データ登録者Mo X / Yuan AY
引用ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2018
タイトル: Structural insights into Drosophila-C3PO complex assembly and 'Dynamic Side Port' model in substrate entry and release.
著者: Xiaobing Mo / Xia Yang / Yuren Adam Yuan /
要旨: In Drosophila and human, component 3 promoter of RISC (C3PO), a heteromeric complex, enhances RISC assembly and promotes RISC activity. Here, we report crystal structure of full-length Drosophila ...In Drosophila and human, component 3 promoter of RISC (C3PO), a heteromeric complex, enhances RISC assembly and promotes RISC activity. Here, we report crystal structure of full-length Drosophila C3PO (E126Q), an inactive C3PO mutant displaying much weaker RNA binding ability, at 2.1 Å resolution. In addition, we also report the cryo-EM structures of full-length Drosophila C3PO (E126Q), C3PO (WT) and SUMO-C3PO (WT, sumo-TRAX + Translin) particles trapped at different conformations at 12, 19.7 and 12.8 Å resolutions, respectively. Crystal structure of C3PO (E126Q) displays a half-barrel architecture consisting of two Trax/Translin heterodimers, whereas cryo-EM structures of C3PO (E126Q), C3PO (WT) and SUMO-C3PO (WT) adopt a closed football-like shape with a hollow interior cavity. Remarkably, both cryo-EM structures of Drosophila C3PO (E126Q) and Drosophila SUMO-C3PO (WT) particles contain a wide side port (∼25 Å × ∼30 Å versus ∼15 Å × ∼20 Å) for RNA substrate entry and release, formed by a pair of anti-parallel packed long α1 helices of TRAX subunits. Notably, cryo-EM structure of SUMO-C3PO showed that four copies of extra densities belonging to N-terminal SUMO tag are located at the outside shell of SUMO-C3PO particle, which demonstrated that the stoichiometry of TRAX/Translin for the in vitro expressed and assembled full-length Drosophila-SUMO-C3PO particle is 4:4, suggesting Drosophila C3PO is composed by TRAX/translin at a ratio of 4:4. Remarkably, the comparison of the cryo-EM structures suggests that the C3PO side ports regulated by α1 helices of TRAX molecules are highly dynamic. Hence, we propose that C3PO particles could adopt a 'Dynamic Side Port' model to capture/digest nucleic acid duplex substrate and release the digested fragments through the dynamic side ports.
履歴
登録2018年1月22日-
ヘッダ(付随情報) 公開2018年2月7日-
マップ公開2018年2月7日-
更新2018年10月3日-
現状2018年10月3日処理サイト: PDBj / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 1
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（半径に従い着色）
  • 表面レベル: 1
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_6899.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_6899.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 12.9 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Drosophila full length cryoEM structure of sumo-C3PO complex (sumo-TRAX translin)
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.69 Å
密度
表面レベル登録者による: 1. / ムービー #1: 1
最小 - 最大-2.8151772 - 6.9517846
平均 (標準偏差)0.0664688 (±0.52904373)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin-75-75-75
サイズ150150150
Spacing150150150
セルA=B=C: 253.50002 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.691.691.69
M x/y/z150150150
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z253.500253.500253.500
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS-75-75-75
NC/NR/NS150150150
D min/max/mean-2.8156.9520.066

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : C3PO

全体名称: C3PO
要素
  • 複合体: C3PO
    • 複合体: sumo-TRAX
    • 複合体: Translin

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超分子 #1: C3PO

超分子名称: C3PO / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0
詳細: In Drosophila, component 3 promoter of RISC (C3PO)is a complex, consisting of 4 Trax/Translin heterodimers.
由来(天然)生物種: Drosophila (ハエ)
組換発現生物種: Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpARG4 (その他)
組換株: DH5a / 組換プラスミド: pET-Duet
組換発現生物種: Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpARG4 (その他)
組換株: BL21 (DE3) / 組換プラスミド: pET-Duet
分子量実験値: 320 KDa

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超分子 #2: sumo-TRAX

超分子名称: sumo-TRAX / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 詳細: Translin-associated factor X

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超分子 #3: Translin

超分子名称: Translin / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 詳細: A key component in C3PO complex

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度1 mg/mL
緩衝液pH: 7.4
構成要素:
濃度式名称
0.5 mMNaCl塩化ナトリウムsodium chloride塩化ナトリウム
20.0 mMTrisトリスヒドロキシメチルアミノメタンTrisトリスヒドロキシメチルアミノメタン
2.0 mMDTTDTT
1.0 mMEDTAエチレンジアミン四酢酸EDTAエチレンジアミン四酢酸

詳細: 20mM Tris (pH 7.4), 500mM NaCl, 1mM DTT and 2mM EDTA
グリッドモデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: FORMVAR / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 101.325 kPa
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 298 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 5 seconds before pluning.
詳細This sample was monodisperse.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TECNAI 12
電子線加速電圧: 120 kV / 電子線源: LAB6
電子光学系最大 デフォーカス（補正後）: 5.0 µm / 最小 デフォーカス（補正後）: 1.2 µm / 倍率（補正後）: 47000 / 照射モード: OTHER / 撮影モード: DARK FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 5.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.2 µm / 倍率（公称値）: 47000
試料ステージ試料ホルダーモデル: GATAN 626 SINGLE TILT LIQUID NITROGEN CRYO TRANSFER HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
温度最低: 70.0 K / 最高: 70.0 K
詳細Preliminary grid screening was performed manually.
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 20 / 実像数: 800 / 平均露光時間: 1.0 sec. / 平均電子線量: 25.0 e/Å2

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画像解析

粒子像選択選択した数: 24000
CTF補正ソフトウェア - 名称: EMAN2 (ver. 2.1)
初期 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 3次元分類クラス数: 32 / 平均メンバー数/クラス: 200 / ソフトウェア - 名称: EMAN2 (ver. 2.1)
最終 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 再構成使用したクラス数: 128 / アルゴリズム: BACK PROJECTION / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 12.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN2 (ver. 2.1) / 使用した粒子像数: 13200
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

精密化空間: RECIPROCAL / プロトコル: AB INITIO MODEL / 温度因子: 200

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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