[日本語] English
万見
- EMDB-13592: Cryo-EM SPA reconstruction of an extended RNA origami 5 helix til... -

+
データを開く


IDまたはキーワード:

読み込み中...

-
基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-13592
タイトルCryo-EM SPA reconstruction of an extended RNA origami 5 helix tile (5HT-B-3X)
マップデータUnsharpened map from cryoSPARC local refinement.
試料
  • 複合体: 5-helix tile B 3X extended version
  • RNA: 5HT-B-3X
キーワードRNA (リボ核酸) / origami (折り紙) / nanostructure (ナノ構造体)
生物種synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.5 Å
データ登録者McRae EKS / Bogglid A / Boesen T / Andersen ES
資金援助 デンマーク, 1件
OrganizationGrant number国
Danish Council for Independent Research31789 デンマーク
引用ジャーナル: Nat Nanotechnol / 年: 2023
タイトル: Structure, folding and flexibility of co-transcriptional RNA origami.
著者: Ewan K S McRae / Helena Østergaard Rasmussen / Jianfang Liu / Andreas Bøggild / Michael T A Nguyen / Nestor Sampedro Vallina / Thomas Boesen / Jan Skov Pedersen / Gang Ren / Cody Geary / Ebbe Sloth Andersen /
要旨: RNA origami is a method for designing RNA nanostructures that can self-assemble through co-transcriptional folding with applications in nanomedicine and synthetic biology. However, to advance the ...RNA origami is a method for designing RNA nanostructures that can self-assemble through co-transcriptional folding with applications in nanomedicine and synthetic biology. However, to advance the method further, an improved understanding of RNA structural properties and folding principles is required. Here we use cryogenic electron microscopy to study RNA origami sheets and bundles at sub-nanometre resolution revealing structural parameters of kissing-loop and crossover motifs, which are used to improve designs. In RNA bundle designs, we discover a kinetic folding trap that forms during folding and is only released after 10 h. Exploration of the conformational landscape of several RNA designs reveal the flexibility of helices and structural motifs. Finally, sheets and bundles are combined to construct a multidomain satellite shape, which is characterized by individual-particle cryo-electron tomography to reveal the domain flexibility. Together, the study provides a structural basis for future improvements to the design cycle of genetically encoded RNA nanodevices.
履歴
登録2021年9月17日-
ヘッダ(付随情報) 公開2022年9月28日-
マップ公開2022年9月28日-
更新2023年8月2日-
現状2023年8月2日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

-
構造の表示

添付画像

emd_13592.png

ダウンロードとリンク

-
マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_13592.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Unsharpened map from cryoSPARC local refinement.
ボクセルのサイズX=Y=Z: 2.64 Å
密度
表面レベル登録者による: 2.25
最小 - 最大-0.77254045 - 7.5144925
平均 (標準偏差)-0.0042022993 (±0.18203257)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ256256256
Spacing256256256
セルA=B=C: 675.84 Å
α=β=γ: 90.0 °

-
添付データ

-
マスク #1

ファイルemd_13592_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
ハーフマップ: Half-map A from cryoSPARC local refinement.

ファイルemd_13592_half_map_1.map
注釈Half-map A from cryoSPARC local refinement.
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
ハーフマップ: Half-map B from cryoSPARC local refinement.

ファイルemd_13592_half_map_2.map
注釈Half-map B from cryoSPARC local refinement.
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
試料の構成要素

-
全体 : 5-helix tile B 3X extended version

全体名称: 5-helix tile B 3X extended version
要素
  • 複合体: 5-helix tile B 3X extended version
  • RNA: 5HT-B-3X

-
超分子 #1: 5-helix tile B 3X extended version

超分子名称: 5-helix tile B 3X extended version / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 423 KDa

-
分子 #1: 5HT-B-3X

分子名称: 5HT-B-3X / タイプ: rna / ID: 1 / 詳細: In vitro transcribed RNA.
配列文字列: GGAACCUAAU CAUAAUUCCC UUUUCAUCCU CUUCUCAACU CUACUUUUCU UGAUCUUCCG CCUCUCAUCC UUUCAUUAUC UUCAUCCCUG CUUGCAUAUA GUGCCUUCGG GUACUAUGUG CAAGUAGGGG CGUCUGUGAU UCGUGGCUGU UCGCAGUCAC GAAUUACAGA ...文字列:
GGAACCUAAU CAUAAUUCCC UUUUCAUCCU CUUCUCAACU CUACUUUUCU UGAUCUUCCG CCUCUCAUCC UUUCAUUAUC UUCAUCCCUG CUUGCAUAUA GUGCCUUCGG GUACUAUGUG CAAGUAGGGG CGUCUGUGAU UCGUGGCUGU UCGCAGUCAC GAAUUACAGA CCAGGCUGUC GGAGAUGGGU UUUCGAAUCC AUCUGGCCAG GGGUUCGCCC UUGGGAACUU UUAUUCGUAG AAGUUCAAAA GUUUAGGAAU GGACAACCUA AGCUUUUCCA UCAGUCGUGC AAGAACGGAG CACGGCUGAU CCGACGGCCU GCGCUACAAA CUGACAGUAG CGGCUGGGAU GCGCUAAACG UUGAAGCGCG UCCCAAUGAA GGUAAUGGAA GGAUGAGGGG CGGAGGAUGG UACAGGUGAA GAACAACGUA CUUCAUCUGU AGGUUGGGUG UGACGUAACA AGUCAGUAGU UGCGUGGAGG AUUAUCCGAA CCGUUCACGG AUGAUCCUAC UUCGUGGUAG GAAUGUCCAA CCUACCGCGA AGUGGACUUC AAACAAUGGC UAAGUUUGGA GUCCCCGAGU GGGGACGAAU UUCCCACGUC CUCACUCCAC ACUCAACCAC GGUCAAGGUG UAAGACCGUC CUUAGAUCGG CUAACUAGUG AAGCCGGUCU AACAAGAAGA GUAGGGUUGA GAAGGGGAUG AGAAGCCCGA AAUGUGACAA CACUAGAGUC ACGUUUCGCA UACUCACGAC UAGAACAAUA CACCAGUUUU AGGGCUCCAU GCUACAAGGG AAAAGUAGCG UGGAGGGUCC CGAUACGCAA UAGCCAAGCG UAUUGGGACC UAGCAUACCC UAACUCCACA AGGGUGUGCU ACCGAGUGUA CGGGAACGGA UAACCCGUGC ACUCUCGUGG GUAUGACAAC AAAAGGUAGA UGUUGUGGUU CCUGACGGGA AUCGUCUACC CGUUAGGAAG GAAUUGUGAU UGGGUUCCAA AUUUCACCUA AUCCUGUCCU ACUCAAAAGA CGAAUGAGUG GGACACCGGG AGCGAACGCG GGGAACUACC UACCCUGCGG CCUCAGGAAG CGAAUAUCCG ACGCUUUCUG AGCUAGUCUU UCGGAAAGUG GAGAUCCGAA GGACUAGUAU GGCAGUCAUG AUGGUGGUUC GCCACCGUCA UGAUUGCCAU AGCGAUGCGC GGGUGAGCUG CUUCGGCGGC UCGCCCGUGC AUCUUCGCUU CCGGGGAGGG UUCUUCGGAA CCUUCUGGGA CGUCGUUCGC GGCGUCGGUU UAAGGUUCGC CUUAGACCAU UGGGUGAAGU UU

-
実験情報

-
構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

-
試料調製

濃度2.5 mg/mL
緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度名称式
25.0 mMHEPES
5.0 mMMgCl2
100.0 mMKCl

詳細: Freshly prepared and filtered through 0.22 micron filter prior to use.
グリッドモデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 45 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.039 kPa / 詳細: 15mA current
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 99 % / チャンバー内温度: 294 K / 装置: LEICA EM GP
詳細: 3 microlitre droplet, 4 second delay before blotting, 6 second blot, 0 second delay before plunging..
詳細Sample was purified by size exclusion chromatography and concentrated in an Amicon spin concentrator prior to grid preparation.

-
電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2.7 mm / 倍率（公称値）: 130000
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 8620 / 平均露光時間: 1.5 sec. / 平均電子線量: 60.0 e/Å2 / 詳細: Images were collected as 56 frame movies.
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

-
画像解析

粒子像選択選択した数: 588769
詳細: Template picker from cryoSPARC using templates created from ab initio model.
初期モデルモデルのタイプ: NONE
詳細: Initial volume was generated using a 3 class ab initio reconstruction given 30000 randomly selected particles.
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
詳細: The entire set of 588769 particles were then 3D classified into one of the three initial ab initio volumes.
最終 3次元分類クラス数: 5 / 平均メンバー数/クラス: 70000
詳細: The final classification was a heterogeneous refinement from 5 different ab initio volumes and 265000 particles. The three best classes were combined to make the final particle stack.
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
詳細: The final angle assignment was determined using the local refinement beta job and a mask covering the entire volume.
最終 再構成使用したクラス数: 1 / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 173322
FSC曲線 (解像度の算出)

-
原子モデル構築 1

精密化温度因子: 271.2

+
万見について

-
お知らせ

-
2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

-
2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

+
2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

+
2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

+
2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

-
万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

他の情報も見る