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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 6asx | ||||||
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タイトル | CryoEM structure of E.coli his pause elongation complex | ||||||
要素 |
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キーワード | transcription/dna/rna / DNA-dependent RNA polymerase (RNAポリメラーゼ) / TRANSCRIPTION (転写 (生物学)) / transcription-dna-rna complex | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / transcription elongation factor complex / regulation of DNA-templated transcription elongation ...RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / transcription elongation factor complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription antitermination / 運動性 / DNA-templated transcription initiation / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / ポリメラーゼ / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / response to antibiotic / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / 生体膜 / 細胞質基質 / 細胞質 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (サルモネラ菌) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å | ||||||
データ登録者 | Kang, J.Y. / Landick, R. / Darst, S.A. | ||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2018 タイトル: RNA Polymerase Accommodates a Pause RNA Hairpin by Global Conformational Rearrangements that Prolong Pausing. 著者: Jin Young Kang / Tatiana V Mishanina / Michael J Bellecourt / Rachel Anne Mooney / Seth A Darst / Robert Landick / 要旨: Sequence-specific pausing by RNA polymerase (RNAP) during transcription plays crucial and diverse roles in gene expression. In bacteria, RNA structures are thought to fold within the RNA exit channel ...Sequence-specific pausing by RNA polymerase (RNAP) during transcription plays crucial and diverse roles in gene expression. In bacteria, RNA structures are thought to fold within the RNA exit channel of the RNAP and can increase pause lifetimes significantly. The biophysical mechanism of pausing is uncertain. We used single-particle cryo-EM to determine structures of paused complexes, including a 3.8-Å structure of an RNA hairpin-stabilized, paused RNAP that coordinates RNA folding in the his operon attenuation control region of E. coli. The structures revealed a half-translocated pause state (RNA post-translocated, DNA pre-translocated) that can explain transcriptional pausing and a global conformational change of RNAP that allosterically inhibits trigger loop folding and can explain pause hairpin action. Pause hairpin interactions with the RNAP RNA exit channel suggest how RNAP guides the formation of nascent RNA structures. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 6asx.cif.gz | 600.1 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb6asx.ent.gz | 475.9 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 6asx.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/as/6asx ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/as/6asx | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-DNA鎖 , 2種, 2分子 AB
#1: DNA鎖 | 分子量: 9881.364 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: no template DNA 由来: (合成) Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (サルモネラ菌) |
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#2: DNA鎖 | 分子量: 9706.256 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: template DNA 由来: (合成) Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (サルモネラ菌) |
-RNA鎖 , 1種, 1分子 R
#3: RNA鎖 | 分子量: 9231.442 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 由来: (合成) Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (サルモネラ菌) |
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-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 5分子 GHIJK
#4: タンパク質 | 分子量: 26459.125 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: rpoA, pez, phs, sez, b3295, JW3257 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A7Z4, ポリメラーゼ #5: タンパク質 | | 分子量: 150820.875 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) 株: K12 遺伝子: rpoB, groN, nitB, rif, ron, stl, stv, tabD, b3987, JW3950 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A8V2, ポリメラーゼ #6: タンパク質 | | 分子量: 155366.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) 株: K12 / 遺伝子: rpoC, tabB, b3988, JW3951 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A8T7, ポリメラーゼ #7: タンパク質 | | 分子量: 9493.681 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: rpoZ, b3649, JW3624 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A800, ポリメラーゼ |
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-非ポリマー , 2種, 3分子
#8: 化合物 | ChemComp-MG / |
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#9: 化合物 |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: E.coli his pause elongation complex / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#7 / 由来: MULTIPLE SOURCES |
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分子量 | 値: 0.4 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
緩衝液 | pH: 8 詳細: 20 mM Tris pH8.0, 150 mM potassium glutamate, 5 mM MgCl2, 5 mM DTT |
試料 | 濃度: 5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 295 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 29500 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2400 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 70 µm |
試料ホルダ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 10 sec. / 電子線照射量: 72.4 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 2910 |
画像スキャン | 横: 3710 / 縦: 3838 / 動画フレーム数/画像: 50 / 利用したフレーム数/画像: 3-50 |
-解析
ソフトウェア | 名称: PHENIX / バージョン: 1.12_2829: / 分類: 精密化 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: NONE | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 408000 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 171300 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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