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- PDB-5n6w: Retinoschisin R141H Mutant -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 5n6w
タイトルRetinoschisin R141H Mutant
要素Retinoschisin
キーワードSTRUCTURAL PROTEIN (タンパク質) / Retinoschisin Discoidin Domain Retinal Structure
機能・相同性
機能・相同性情報


neuron to neuron synapse / retina layer formation / adaptation of rhodopsin mediated signaling / eye development / phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate binding / phosphatidylserine binding / 視覚 / photoreceptor inner segment / protein homooligomerization / 細胞接着 ...neuron to neuron synapse / retina layer formation / adaptation of rhodopsin mediated signaling / eye development / phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate binding / phosphatidylserine binding / 視覚 / photoreceptor inner segment / protein homooligomerization / 細胞接着 / external side of plasma membrane / extracellular space
類似検索 - 分子機能
Coagulation factors 5/8 type C domain (FA58C) signature 1. / Coagulation factor 5/8 C-terminal domain, discoidin domain / Coagulation factors 5/8 type C domain (FA58C) profile. / F5/8 type C domain / Coagulation factor 5/8 C-terminal domain / Galactose-binding-like domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.2 Å
データ登録者Ramsay, E.P. / Collins, R.F. / Owens, T.W. / Siebert, C.A. / Jones, R.P.O. / Roseman, A. / Wang, T. / Baldock, C.
資金援助 英国, 1件
組織認可番号
Wellcome Trust099735/Z/12/Z 英国
引用ジャーナル: Hum Mol Genet / : 2016
タイトル: Structural analysis of X-linked retinoschisis mutations reveals distinct classes which differentially effect retinoschisin function.
著者: Ewan P Ramsay / Richard F Collins / Thomas W Owens / C Alistair Siebert / Richard P O Jones / Tao Wang / Alan M Roseman / Clair Baldock /
要旨: Retinoschisin, an octameric retinal-specific protein, is essential for retinal architecture with mutations causing X-linked retinoschisis (XLRS), a monogenic form of macular degeneration. Most XLRS- ...Retinoschisin, an octameric retinal-specific protein, is essential for retinal architecture with mutations causing X-linked retinoschisis (XLRS), a monogenic form of macular degeneration. Most XLRS-associated mutations cause intracellular retention, however a subset are secreted as octamers and the cause of their pathology is ill-defined. Therefore, here we investigated the solution structure of the retinoschisin monomer and the impact of two XLRS-causing mutants using a combinatorial approach of biophysics and cryo-EM. The retinoschisin monomer has an elongated structure which persists in the octameric assembly. Retinoschisin forms a dimer of octamers with each octameric ring adopting a planar propeller structure. Comparison of the octamer with the hexadecamer structure indicated little conformational change in the retinoschisin octamer upon dimerization, suggesting that the octamer provides a stable interface for the construction of the hexadecamer. The H207Q XLRS-associated mutation was found in the interface between octamers and destabilized both monomeric and octameric retinoschisin. Octamer dimerization is consistent with the adhesive function of retinoschisin supporting interactions between retinal cell layers, so disassembly would prevent structural coupling between opposing membranes. In contrast, cryo-EM structural analysis of the R141H mutation at ∼4.2Å resolution was found to only cause a subtle conformational change in the propeller tips, potentially perturbing an interaction site. Together, these findings support distinct mechanisms of pathology for two classes of XLRS-associated mutations in the retinoschisin assembly.
履歴
登録2017年2月16日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02017年4月12日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12017年8月30日Group: Data collection / Experimental preparation / Refinement description
カテゴリ: em_3d_fitting / em_sample_support / em_software
Item: _em_3d_fitting.target_criteria / _em_sample_support.grid_type / _em_software.name

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-3595
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Retinoschisin
B: Retinoschisin
C: Retinoschisin
D: Retinoschisin
E: Retinoschisin
F: Retinoschisin
G: Retinoschisin
H: Retinoschisin
I: Retinoschisin
J: Retinoschisin
K: Retinoschisin
L: Retinoschisin
M: Retinoschisin
N: Retinoschisin
O: Retinoschisin
P: Retinoschisin


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)368,67016
ポリマ-368,67016
非ポリマー00
0
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
タイプ名称対称操作
identity operation1_5551
Buried area29630 Å2
ΔGint-130 kcal/mol
Surface area131310 Å2
手法PISA

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要素

#1: タンパク質
Retinoschisin / / X-linked juvenile retinoschisis protein


分子量: 23041.902 Da / 分子数: 16 / 変異: R141H Pathogenic Mutation / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: RS1, XLRS1 / プラスミド: pCEP-Pu/Ac7 / 細胞株 (発現宿主): HEK293-EBNA / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: O15537

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Retinoschisin / タイプ: COMPLEX
詳細: Hexadecameric complex of sixteen retinoschisin molecules
Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
由来(組換発現)生物種: Homo sapiens (ヒト) / 細胞: HEK293-EBNA / プラスミド: pCEP-Pu/Ac7
緩衝液pH: 7.4
緩衝液成分
ID濃度名称Buffer-ID
110 mMTrisトリスヒドロキシメチルアミノメタンC4H11NO31
2150 mMSodium Chloride塩化ナトリウムNaCl塩化ナトリウム1
試料濃度: 0.1 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: The sample was monodisperse and visible
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-2/2
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK I / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: SPOT SCAN
電子レンズモード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 105000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 4500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1000 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 0.5 sec. / 電子線照射量: 2.8 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1200
画像スキャン動画フレーム数/画像: 14 / 利用したフレーム数/画像: 2-8

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1EMAN2粒子像選択
4CTFFIND4CTF補正
7DockEM2モデルフィッティング
9EMAN2初期オイラー角割当
10RELION1.4最終オイラー角割当
11RELION1.4分類
12RELION1.43次元再構成
13Flex-EMモデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
対称性点対称性: D8 (2回x8回 2面回転対称)
3次元再構成解像度: 4.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 7056 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT / Target criteria: Cross-correlation coefficient

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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