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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-5667 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of beta-hydroxyhexaketide-PikAIII conformation 3 | |||||||||
マップデータ | Reconstruction of the 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII) incubated with NADPH, methylmalonyl-CoA, and thiophenol-pentaketide. | |||||||||
試料 |
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キーワード | Type I polyketide synthase module | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 10-deoxymethynolide synthase / narbonolide synthase / macrolide biosynthetic process / acyltransferase activity, transferring groups other than amino-acyl groups / phosphopantetheine binding / 3-oxoacyl-[acyl-carrier-protein] synthase activity / fatty acid biosynthetic process / identical protein binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Streptomyces venezuelae (バクテリア) / unidentified (未定義) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 11.6 Å | |||||||||
データ登録者 | Whicher JR / Dutta S / Hansen DA / Hale WA / Chemler JA / Narayan AR / Hakansson K / Sherman DH / Smith JL / Skiniotis G | |||||||||
引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2014 タイトル: Structural rearrangements of a polyketide synthase module during its catalytic cycle. 著者: Jonathan R Whicher / Somnath Dutta / Douglas A Hansen / Wendi A Hale / Joseph A Chemler / Annie M Dosey / Alison R H Narayan / Kristina Håkansson / David H Sherman / Janet L Smith / Georgios Skiniotis / 要旨: The polyketide synthase (PKS) mega-enzyme assembly line uses a modular architecture to synthesize diverse and bioactive natural products that often constitute the core structures or complete chemical ...The polyketide synthase (PKS) mega-enzyme assembly line uses a modular architecture to synthesize diverse and bioactive natural products that often constitute the core structures or complete chemical entities for many clinically approved therapeutic agents. The architecture of a full-length PKS module from the pikromycin pathway of Streptomyces venezuelae creates a reaction chamber for the intramodule acyl carrier protein (ACP) domain that carries building blocks and intermediates between acyltransferase, ketosynthase and ketoreductase active sites (see accompanying paper). Here we determine electron cryo-microscopy structures of a full-length pikromycin PKS module in three key biochemical states of its catalytic cycle. Each biochemical state was confirmed by bottom-up liquid chromatography/Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. The ACP domain is differentially and precisely positioned after polyketide chain substrate loading on the active site of the ketosynthase, after extension to the β-keto intermediate, and after β-hydroxy product generation. The structures reveal the ACP dynamics for sequential interactions with catalytic domains within the reaction chamber, and for transferring the elongated and processed polyketide substrate to the next module in the PKS pathway. During the enzymatic cycle the ketoreductase domain undergoes dramatic conformational rearrangements that enable optimal positioning for reductive processing of the ACP-bound polyketide chain elongation intermediate. These findings have crucial implications for the design of functional PKS modules, and for the engineering of pathways to generate pharmacologically relevant molecules. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_5667.map.gz | 10.8 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-5667-v30.xml emd-5667.xml | 13.6 KB 13.6 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | 400_5667.gif 80_5667.gif | 30 KB 2.6 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-5667 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-5667 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_5667.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 26.4 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Reconstruction of the 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII) incubated with NADPH, methylmalonyl-CoA, and thiophenol-pentaketide. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 2.24 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : The 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII)...
全体 | 名称: The 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII) incubated with NADPH, methylmalonyl-CoA, and thiophenol-pentaketide |
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要素 |
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-超分子 #1000: The 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII)...
超分子 | 名称: The 5th module from the pikromycin biosynthetic pathway (PikAIII) incubated with NADPH, methylmalonyl-CoA, and thiophenol-pentaketide タイプ: sample / ID: 1000 詳細: Sample was not frozen prior to loading on the grid. The sample was monodisperse. 集合状態: Dimer / Number unique components: 4 |
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分子量 | 実験値: 328 KDa / 理論値: 328 KDa / 手法: Gel filtration chromatography |
-分子 #1: PikAIII
分子 | 名称: PikAIII / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 2 / 集合状態: Dimer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: Streptomyces venezuelae (バクテリア) |
分子量 | 実験値: 328 KDa / 理論値: 328 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 組換プラスミド: pET28b |
配列 | UniProtKB: Narbonolide/10-deoxymethynolide synthase PikA3, module 5 |
-分子 #2: NADPH
分子 | 名称: NADPH / タイプ: ligand / ID: 2 / コピー数: 1 / 組換発現: No / データベース: NCBI |
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由来(天然) | 生物種: unidentified (未定義) |
-分子 #3: Methylmalonyl-CoA
分子 | 名称: Methylmalonyl-CoA / タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 1 / 組換発現: No / データベース: NCBI |
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由来(天然) | 生物種: unidentified (未定義) |
-分子 #4: Thiophenol-pentaketide
分子 | 名称: Thiophenol-pentaketide / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 1 / 組換発現: No / データベース: NCBI |
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由来(天然) | 生物種: unidentified (未定義) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.1 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.4 / 詳細: 50 mM HEPES, 100mM NaCl |
グリッド | 詳細: Glow-discharged Quantifoil R2/200 mesh grid |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 89 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 手法: Blot for 2 seconds before plunging. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TECNAI F20 |
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電子線 | 加速電圧: 120 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 倍率(補正後): 66964 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.5 µm / 倍率(公称値): 50000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: OTHER |
温度 | 最低: 89 K / 最高: 89 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: Objective lens astigmatism was corrected at 135,000 times magnification. |
日付 | 2012年10月12日 |
撮影 | カテゴリ: CCD フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k) 実像数: 387 / 平均電子線量: 20 e/Å2 |
実験機器 | モデル: Tecnai F20 / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
CTF補正 | 詳細: Each micrograph |
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最終 再構成 | アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 11.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN1, EMAN2 / 使用した粒子像数: 18779 |
詳細 | The particles were selected manually. |
-原子モデル構築 1
初期モデル | PDB ID: Chain - #0 - Chain ID: A / Chain - #1 - Chain ID: B |
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ソフトウェア | 名称: Chimera |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
-原子モデル構築 2
初期モデル | PDB ID: |
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ソフトウェア | 名称: Chimera |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
-原子モデル構築 3
初期モデル | PDB ID: |
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ソフトウェア | 名称: Chimera |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |