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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-14582 | ||||||||||||
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タイトル | Human heparan sulfate polymerase complex EXT1-EXT2 | ||||||||||||
マップデータ | |||||||||||||
試料 |
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機能・相同性 | 機能・相同性情報 glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase / N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-beta-glucuronosyltransferase / 過敏症 / heart field specification / lymphocyte adhesion to endothelial cell of high endothelial venule / heparan sulfate N-acetylglucosaminyltransferase activity / glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase activity / N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-beta-glucuronosyltransferase activity / smoothened signaling pathway involved in lung development / developmental growth involved in morphogenesis ...glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase / N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-beta-glucuronosyltransferase / 過敏症 / heart field specification / lymphocyte adhesion to endothelial cell of high endothelial venule / heparan sulfate N-acetylglucosaminyltransferase activity / glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase activity / N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-beta-glucuronosyltransferase activity / smoothened signaling pathway involved in lung development / developmental growth involved in morphogenesis / sweat gland development / perichondral bone morphogenesis / mesenchymal cell differentiation involved in bone development / response to leukemia inhibitory factor / chondroitin sulfate metabolic process / UDP-N-acetylglucosamine transferase complex / response to heparin / chondrocyte hypertrophy / embryonic skeletal joint development / hematopoietic stem cell migration to bone marrow / : / heparan sulfate proteoglycan biosynthetic process, polysaccharide chain biosynthetic process / fluid transport / glucuronosyltransferase activity / limb joint morphogenesis / tight junction organization / heparin biosynthetic process / Defective EXT2 causes exostoses 2 / Defective EXT1 causes exostoses 1, TRPS2 and CHDS / stomach development / sebaceous gland development / glomerular basement membrane development / dendrite self-avoidance / heparan sulfate proteoglycan biosynthetic process / HS-GAG biosynthesis / glycosaminoglycan biosynthetic process / lymphocyte migration into lymphoid organs / chondrocyte proliferation / sulfation / hematopoietic stem cell homeostasis / podocyte differentiation / glandular epithelial cell differentiation / dendritic cell migration / endochondral bone morphogenesis / polysaccharide biosynthetic process / endochondral bone growth / sodium ion homeostasis / acetylglucosaminyltransferase activity / response to light intensity / basement membrane organization / cartilage development involved in endochondral bone morphogenesis / cranial skeletal system development / vocalization behavior / stem cell division / endoderm development / multicellular organismal-level water homeostasis / leukocyte tethering or rolling / vacuole organization / olfactory bulb development / endochondral ossification / fear response / optic nerve development / protein N-linked glycosylation / cellular response to fibroblast growth factor stimulus / neural crest cell differentiation / collagen fibril organization / ossification involved in bone maturation / motor behavior / cell adhesion mediated by integrin / epithelial tube branching involved in lung morphogenesis / hair follicle morphogenesis / heart contraction / glycosyltransferase activity / social behavior / protein glycosylation / mesoderm development / mesoderm formation / catalytic complex / antigen processing and presentation / gastrulation / canonical Wnt signaling pathway / hematopoietic stem cell differentiation / blood vessel remodeling / fibroblast growth factor receptor signaling pathway / 細胞分化 / chondrocyte differentiation / BMP signaling pathway / bone resorption / 骨化 / synaptic transmission, glutamatergic / 軸索誘導 / protein catabolic process / multicellular organism growth / wound healing / cellular response to virus / 血圧 / vasodilation / 遺伝子発現 / protein-containing complex assembly / protein heterodimerization activity 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.8 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Leisico F / Omeiri J / Hons M / Schoehn G / Lortat-Jacob H / Wild R | ||||||||||||
資金援助 | フランス, 3件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2022 タイトル: Structure of the human heparan sulfate polymerase complex EXT1-EXT2. 著者: Francisco Leisico / Juneina Omeiri / Christine Le Narvor / Joël Beaudouin / Michael Hons / Daphna Fenel / Guy Schoehn / Yohann Couté / David Bonnaffé / Rabia Sadir / Hugues Lortat-Jacob / Rebekka Wild / 要旨: Heparan sulfates are complex polysaccharides that mediate the interaction with a broad range of protein ligands at the cell surface. A key step in heparan sulfate biosynthesis is catalyzed by the bi- ...Heparan sulfates are complex polysaccharides that mediate the interaction with a broad range of protein ligands at the cell surface. A key step in heparan sulfate biosynthesis is catalyzed by the bi-functional glycosyltransferases EXT1 and EXT2, which generate the glycan backbone consisting of repeating N-acetylglucosamine and glucuronic acid units. The molecular mechanism of heparan sulfate chain polymerization remains, however, unknown. Here, we present the cryo-electron microscopy structure of human EXT1-EXT2, which reveals the formation of a tightly packed hetero-dimeric complex harboring four glycosyltransferase domains. A combination of in vitro and in cellulo mutational studies is used to dissect the functional role of the four catalytic sites. While EXT1 can catalyze both glycosyltransferase reactions, our results indicate that EXT2 might only have N-acetylglucosamine transferase activity. Our findings provide mechanistic insight into heparan sulfate chain elongation as a nonprocessive process and lay the foundation for future studies on EXT1-EXT2 function in health and disease. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_14582.map.gz | 79.2 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-14582-v30.xml emd-14582.xml | 20.6 KB 20.6 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_14582_fsc.xml | 11.4 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_14582.png | 182 KB | ||
マスクデータ | emd_14582_msk_1.map | 125 MB | マスクマップ | |
その他 | emd_14582_additional_1.map.gz emd_14582_half_map_1.map.gz emd_14582_half_map_2.map.gz | 98.7 MB 98.5 MB 98.7 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-14582 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-14582 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 7zayMC M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_14582.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.84 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_14582_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: #1
ファイル | emd_14582_additional_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_14582_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_14582_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Hetero-dimeric complex EXT1-EXT2
全体 | 名称: Hetero-dimeric complex EXT1-EXT2 |
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要素 |
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-超分子 #1: Hetero-dimeric complex EXT1-EXT2
超分子 | 名称: Hetero-dimeric complex EXT1-EXT2 / タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#2 詳細: local resolution-filtered map generated using a B-factor of -30 A2 |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 160 KDa |
-分子 #1: Exostosin-1
分子 | 名称: Exostosin-1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO EC番号: glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 85.261859 KDa |
組換発現 | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
配列 | 文字列: GASRASRSHS RREEHSGRNG LHHPSPDHFW PRFPDALRPF VPWDQLENED SSVHISPRQK RDANSSIYKG KKCRMESCFD FTLCKKNGF KVYVYPQQKG EKIAESYQNI LAAIEGSRFY TSDPSQACLF VLSLDTLDRD QLSPQYVHNL RSKVQSLHLW N NGRNHLIF ...文字列: GASRASRSHS RREEHSGRNG LHHPSPDHFW PRFPDALRPF VPWDQLENED SSVHISPRQK RDANSSIYKG KKCRMESCFD FTLCKKNGF KVYVYPQQKG EKIAESYQNI LAAIEGSRFY TSDPSQACLF VLSLDTLDRD QLSPQYVHNL RSKVQSLHLW N NGRNHLIF NLYSGTWPDY TEDVGFDIGQ AMLAKASIST ENFRPNFDVS IPLFSKDHPR TGGERGFLKF NTIPPLRKYM LV FKGKRYL TGIGSDTRNA LYHVHNGEDV VLLTTCKHGK DWQKHKDSRC DRDNTEYEKY DYREMLHNAT FCLVPRGRRL GSF RFLEAL QAACVPVMLS NGWELPFSEV INWNQAAVIG DERLLLQIPS TIRSIHQDKI LALRQQTQFL WEAYFSSVEK IVLT TLEII QDRIFKHISR NSLIWNKHPG GLFVLPQYSS YLGDFPYYYA NLGLKPPSKF TAVIHAVTPL VSQSQPVLKL LVAAA KSQY CAQIIVLWNC DKPLPAKHRW PATAVPVVVI EGESKVMSSR FLPYDNIITD AVLSLDEDTV LSTTEVDFAF TVWQSF PER IVGYPARSHF WDNSKERWGY TSKWTNDYSM VLTGAAIYHK YYHYLYSHYL PASLKNMVDQ LANCEDILMN FLVSAVT KL PPIKVTQKKQ YKETMMGQTS RASRWADPDH FAQRQSCMNT FASWFGYMPL IHSQMRLDPV LFKDQVSILR KKYRDIER L NNNNNNGHHH HHHHH |
-分子 #2: Exostosin-2
分子 | 名称: Exostosin-2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO EC番号: glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 79.056836 KDa |
組換発現 | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
配列 | 文字列: GASPHSIESS NDWNVEKRSI RDVPVVRLPA DSPIPERGDL SCRMHTCFDV YRCGFNPKNK IKVYIYALKK YVDDFGVSVS NTISREYNE LLMAISDSDY YTDDINRACL FVPSIDVLNQ NTLRIKETAQ AMAQLSRWDR GTNHLLFNML PGGPPDYNTA L DVPRDRAL ...文字列: GASPHSIESS NDWNVEKRSI RDVPVVRLPA DSPIPERGDL SCRMHTCFDV YRCGFNPKNK IKVYIYALKK YVDDFGVSVS NTISREYNE LLMAISDSDY YTDDINRACL FVPSIDVLNQ NTLRIKETAQ AMAQLSRWDR GTNHLLFNML PGGPPDYNTA L DVPRDRAL LAGGGFSTWT YRQGYDVSIP VYSPLSAEVD LPEKGPGPRQ YFLLSSQVGL HPEYREDLEA LQVKHGESVL VL DKCTNLS EGVLSVRKRC HKHQVFDYPQ VLQEATFCVV LRGARLGQAV LSDVLQAGCV PVVIADSYIL PFSEVLDWKR ASV VVPEEK MSDVYSILQS IPQRQIEEMQ RQARWFWEAY FQSIKAIALA TLQIINDRIY PYAAISYEEW NDPPAVKWGS VSNP LFLPL IPPQSQGFTA IVLTYDRVES LFRVITEVSK VPSLSKLLVV WNNQNKNPPE DSLWPKIRVP LKVVRTAENK LSNRF FPYD EIETEAVLAI DDDIIMLTSD ELQFGYEVWR EFPDRLVGYP GRLHLWDHEM NKWKYESEWT NEVSMVLTGA AFYHKY FNY LYTYKMPGDI KNWVDAHMNC EDIAMNFLVA NVTGKAVIKV TPRKKFKCPE CTAIDGLSLD QTHMVERSEC INKFASV FG TMPLKVVEHR ADPVLYKDDF PEKLKSFPNI GSLNNNNNNG HHHHHHHH |
-分子 #4: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose
分子 | 名称: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 1 / 式: NAG |
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分子量 | 理論値: 221.208 Da |
Chemical component information | ChemComp-NAG: |
-分子 #5: URIDINE-5'-DIPHOSPHATE
分子 | 名称: URIDINE-5'-DIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 1 / 式: UDP |
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分子量 | 理論値: 404.161 Da |
Chemical component information | ChemComp-UDP: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.4 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.2 |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
詳細 | Purified EXT1-EXT2 complex at 0.4mg/mL was mixed with 1mM of UDP-GlcNAc, 1mM UDP-GlcA and 1mM MnCl2 and incubated 15 min on ice before applying 4 uL of the sample onto a glow discharged Quantifoil holey carbon grid (R1.2/1.3, 300 mesh, copper). |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.0 µm |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 平均電子線量: 46.0 e/Å2 |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |