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- PDB-4v2t: Membrane embedded pleurotolysin pore with 13 fold symmetry -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 4v2t
タイトルMembrane embedded pleurotolysin pore with 13 fold symmetry
要素
  • (PLEUROTOLYSIN B) x 2
  • PLEUROTOLYSIN A
キーワードTRANSPORT PROTEIN (運搬体タンパク質) / MACPF/CDC SUPERFAMILY / PORE-FORMING PROTEINS (膜孔形成毒素)
機能・相同性
機能・相同性情報


hemolysis by symbiont of host erythrocytes
類似検索 - 分子機能
Pleurotolysin B, C-terminal / Pleurotolysin B C-terminal domain / Hemolysin, aegerolysin type / Aegerolysin / Membrane attack complex/perforin (MACPF) domain profile. / MAC/Perforin domain / Membrane attack complex component/perforin (MACPF) domain
類似検索 - ドメイン・相同性
Pleurotolysin B / Pleurotolysin A
類似検索 - 構成要素
生物種PLEUROTUS OSTREATUS (ヒラタケ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 11 Å
Model type detailsCA ATOMS ONLY, CHAIN 0, 2, 3, 5, 6, 8, 9, B, C, E, F, H, I, K, L, N, O, Q, R, T, U, W, X, Z, b, c, ...CA ATOMS ONLY, CHAIN 0, 2, 3, 5, 6, 8, 9, B, C, E, F, H, I, K, L, N, O, Q, R, T, U, W, X, Z, b, c, 1, 4, 7, D, G, J, M, P, S, V, Y, A, a
データ登録者Lukoyanova, N. / Kondos, S.C. / Farabella, I. / Law, R.H.P. / Reboul, C.F. / Caradoc-Davies, T.T. / Spicer, B.A. / Kleifeld, O. / Perugini, M. / Ekkel, S. ...Lukoyanova, N. / Kondos, S.C. / Farabella, I. / Law, R.H.P. / Reboul, C.F. / Caradoc-Davies, T.T. / Spicer, B.A. / Kleifeld, O. / Perugini, M. / Ekkel, S. / Hatfaludi, T. / Oliver, K. / Hotze, E.M. / Tweten, R.K. / Whisstock, J.C. / Topf, M. / Dunstone, M.A. / Saibil, H.R.
引用ジャーナル: PLoS Biol / 年: 2015
タイトル: Conformational changes during pore formation by the perforin-related protein pleurotolysin.
著者: Natalya Lukoyanova / Stephanie C Kondos / Irene Farabella / Ruby H P Law / Cyril F Reboul / Tom T Caradoc-Davies / Bradley A Spicer / Oded Kleifeld / Daouda A K Traore / Susan M Ekkel / Ilia ...著者: Natalya Lukoyanova / Stephanie C Kondos / Irene Farabella / Ruby H P Law / Cyril F Reboul / Tom T Caradoc-Davies / Bradley A Spicer / Oded Kleifeld / Daouda A K Traore / Susan M Ekkel / Ilia Voskoboinik / Joseph A Trapani / Tamas Hatfaludi / Katherine Oliver / Eileen M Hotze / Rodney K Tweten / James C Whisstock / Maya Topf / Helen R Saibil / Michelle A Dunstone /
要旨: Membrane attack complex/perforin-like (MACPF) proteins comprise the largest superfamily of pore-forming proteins, playing crucial roles in immunity and pathogenesis. Soluble monomers assemble into ...Membrane attack complex/perforin-like (MACPF) proteins comprise the largest superfamily of pore-forming proteins, playing crucial roles in immunity and pathogenesis. Soluble monomers assemble into large transmembrane pores via conformational transitions that remain to be structurally and mechanistically characterised. Here we present an 11 Å resolution cryo-electron microscopy (cryo-EM) structure of the two-part, fungal toxin Pleurotolysin (Ply), together with crystal structures of both components (the lipid binding PlyA protein and the pore-forming MACPF component PlyB). These data reveal a 13-fold pore 80 Å in diameter and 100 Å in height, with each subunit comprised of a PlyB molecule atop a membrane bound dimer of PlyA. The resolution of the EM map, together with biophysical and computational experiments, allowed confident assignment of subdomains in a MACPF pore assembly. The major conformational changes in PlyB are a ∼70° opening of the bent and distorted central β-sheet of the MACPF domain, accompanied by extrusion and refolding of two α-helical regions into transmembrane β-hairpins (TMH1 and TMH2). We determined the structures of three different disulphide bond-trapped prepore intermediates. Analysis of these data by molecular modelling and flexible fitting allows us to generate a potential trajectory of β-sheet unbending. The results suggest that MACPF conformational change is triggered through disruption of the interface between a conserved helix-turn-helix motif and the top of TMH2. Following their release we propose that the transmembrane regions assemble into β-hairpins via top down zippering of backbone hydrogen bonds to form the membrane-inserted β-barrel. The intermediate structures of the MACPF domain during refolding into the β-barrel pore establish a structural paradigm for the transition from soluble monomer to pore, which may be conserved across the whole superfamily. The TMH2 region is critical for the release of both TMH clusters, suggesting why this region is targeted by endogenous inhibitors of MACPF function.
履歴
登録2014年10月15日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02015年2月18日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12017年8月30日Group: Data collection / Refinement description / カテゴリ: em_3d_fitting / em_software
Item: _em_3d_fitting.target_criteria / _em_software.fitting_id ..._em_3d_fitting.target_criteria / _em_software.fitting_id / _em_software.image_processing_id / _em_software.name

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • 単純化した表面モデル + あてはめた原子モデル
  • マップデータ: EMDB-2793
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-2793
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
0: PLEUROTOLYSIN A
1: PLEUROTOLYSIN B
2: PLEUROTOLYSIN A
3: PLEUROTOLYSIN A
4: PLEUROTOLYSIN B
5: PLEUROTOLYSIN A
6: PLEUROTOLYSIN A
7: PLEUROTOLYSIN B
8: PLEUROTOLYSIN A
9: PLEUROTOLYSIN A
A: PLEUROTOLYSIN B
B: PLEUROTOLYSIN A
C: PLEUROTOLYSIN A
D: PLEUROTOLYSIN B
E: PLEUROTOLYSIN A
F: PLEUROTOLYSIN A
G: PLEUROTOLYSIN B
H: PLEUROTOLYSIN A
I: PLEUROTOLYSIN A
J: PLEUROTOLYSIN B
K: PLEUROTOLYSIN A
L: PLEUROTOLYSIN A
M: PLEUROTOLYSIN B
N: PLEUROTOLYSIN A
O: PLEUROTOLYSIN A
P: PLEUROTOLYSIN B
Q: PLEUROTOLYSIN A
R: PLEUROTOLYSIN A
S: PLEUROTOLYSIN B
T: PLEUROTOLYSIN A
U: PLEUROTOLYSIN A
V: PLEUROTOLYSIN B
W: PLEUROTOLYSIN A
X: PLEUROTOLYSIN A
Y: PLEUROTOLYSIN B
Z: PLEUROTOLYSIN A
a: PLEUROTOLYSIN B
b: PLEUROTOLYSIN A
c: PLEUROTOLYSIN A


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)1,062,93339
ポリマ－1,062,93339
非ポリマー00
水0
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1

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要素

#1: タンパク質 ...
PLEUROTOLYSIN A / PRIA / 座標モデル: Cα原子のみ


分子量: 14852.545 Da / 分子数: 26 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) PLEUROTUS OSTREATUS (ヒラタケ) / 遺伝子: PLYA, PLYA / プラスミド: PET3A / 発現宿主: ESCHERICHIA COLI (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): CODON PLUS PLYSS (NOVAGEN) / 参照: UniProt: Q8X1M9
#2: タンパク質
PLEUROTOLYSIN B / PRECURSOR OF PLEUROTOLYSIN B / 座標モデル: Cα原子のみ


分子量: 52052.297 Da / 分子数: 12 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) PLEUROTUS OSTREATUS (ヒラタケ) / 遺伝子: PLYA, PLYB / プラスミド: PUC57, PET3A / 発現宿主: ESCHERICHIA COLI (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): CODON PLUS PLYSS (NOVAGEN) / 参照: UniProt: Q5W9E8
#3: タンパク質 PLEUROTOLYSIN B / PRECURSOR OF PLEUROTOLYSIN B / 座標モデル: Cα原子のみ


分子量: 52139.375 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) PLEUROTUS OSTREATUS (ヒラタケ) / 遺伝子: PLYB / プラスミド: PET3A, PUC57 / 発現宿主: ESCHERICHIA COLI (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): CODON PLUS PLYSS (NOVAGEN) / 参照: UniProt: Q5W9E8

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: PLEUROTOLYSIN PORE IN LIPOSOMES / タイプ: COMPLEX
緩衝液名称: 50 MM NACL, 20 MM HEPES / pH: 7.4 / 詳細: 50 MM NACL, 20 MM HEPES
試料濃度: 0.01 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持詳細: HOLEY CARBON
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE
詳細: VITRIFICATION 1 -- CRYOGEN- ETHANE, HUMIDITY - 80, INSTRUMENT- FEI VITROBOT MARK III, METHOD- PLEUROTOLYSIN A WAS FIRST ADDED TO SPHINGOMYELIN-CHOLESTEROL LIPOSOMES AT A MOLAR RATIO OF 1 TO ...詳細: VITRIFICATION 1 -- CRYOGEN- ETHANE, HUMIDITY - 80, INSTRUMENT- FEI VITROBOT MARK III, METHOD- PLEUROTOLYSIN A WAS FIRST ADDED TO SPHINGOMYELIN-CHOLESTEROL LIPOSOMES AT A MOLAR RATIO OF 1 TO 2000 PROTEIN TO LIPID IN THE ABOVE BUFFER. AFTER 5 MIN INCUBATION AT ROOM TEMPERATURE, PLEUROTOLYSIN B WAS ADDED TO THE MIXTURE AT A MOLAR RATIO OF 1 TO 2 TO PLEUROTOLYSIN A. THE MIXTURE WAS INCUBATED AT 40C OR ROOM TEMPERATURE FOR 30 MIN AFTER WHICH 3. 5 UL WERE PLACED ON NEGATIVELY GLOW DISCHARGED LACEY GRIDS AND VITRIFIED IN LIQUID ETHANE USING A VITROBOT. BLOTTING WAS CARRIED OUT AT 36C AND 80 PERCENT HUMIDITY.

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI POLARA 300 / 日付: 2011年1月19日
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率（公称値）: 59000 X / 倍率（補正後）: 76148 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 3200 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 800 nm / Cs: 2.3 mm
試料ホルダ温度: 94 K
撮影電子線照射量: 25 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k)
画像スキャンデジタル画像の数: 350
放射波長相対比: 1

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解析

EMソフトウェア
ID名称カテゴリ
1Flex-EMモデルフィッティング
2MODELLERモデルフィッティング
3UCSF Chimeraモデルフィッティング
4IMAGIC３次元再構成
5SPIDER３次元再構成
CTF補正詳細: ESTIMATED WITH CTFFIND3, THEN PHASES FLIPPED FOR EACH PARTICLE
対称性点対称性: C13 (13回回転対称)
3次元再構成手法: ANGULAR RECONSTITUTION AND PROJECTION MATCHING / 解像度: 11 Å / 粒子像の数: 8700 / ピクセルサイズ（公称値）: 1.94 Å / ピクセルサイズ（実測値）: 2 Å
詳細: SUBMISSION BASED ON EXPERIMENTAL DATA FROM EMDB EMD-2793. (DEPOSITION ID: 12292).
対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / Target criteria: Cross-correlation coefficient / 詳細: METHOD--FLEXIBLE
原子モデル構築PDB-ID: 4OEB

4oeb

精密化最高解像度: 11 Å
精密化ステップサイクル: LAST / 最高解像度: 11 Å
タンパク質核酸リガンド溶媒全体
原子数9673 0 0 0 9673

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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