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万見
- EMDB-27702: Focused map (monomer B) for Arabidopsis SPY in complex with GDP-fucose -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-27702
タイトルFocused map (monomer B) for Arabidopsis SPY in complex with GDP-fucose
マップデータ
試料
  • 細胞: SPY GPD-complex
キーワードO-Fucosyltransferase / PLANT PROTEIN (植物)
生物種Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å
データ登録者Kumar S / Zhou Y / Lucas D / Borgnia MJ / Bartesaghi A / Zhou P
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS) 米国
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2023
タイトル: Structure and dynamics of the Arabidopsis O-fucosyltransferase SPINDLY.
著者: Shivesh Kumar / Yan Wang / Ye Zhou / Lucas Dillard / Fay-Wei Li / Carly A Sciandra / Ning Sui / Rodolfo Zentella / Emily Zahn / Jeffrey Shabanowitz / Donald F Hunt / Mario J Borgnia / Alberto ...著者: Shivesh Kumar / Yan Wang / Ye Zhou / Lucas Dillard / Fay-Wei Li / Carly A Sciandra / Ning Sui / Rodolfo Zentella / Emily Zahn / Jeffrey Shabanowitz / Donald F Hunt / Mario J Borgnia / Alberto Bartesaghi / Tai-Ping Sun / Pei Zhou /
要旨: SPINDLY (SPY) in Arabidopsis thaliana is a novel nucleocytoplasmic protein O-fucosyltransferase (POFUT), which regulates diverse developmental processes. Sequence analysis indicates that SPY is ...SPINDLY (SPY) in Arabidopsis thaliana is a novel nucleocytoplasmic protein O-fucosyltransferase (POFUT), which regulates diverse developmental processes. Sequence analysis indicates that SPY is distinct from ER-localized POFUTs and contains N-terminal tetratricopeptide repeats (TPRs) and a C-terminal catalytic domain resembling the O-linked-N-acetylglucosamine (GlcNAc) transferases (OGTs). However, the structural feature that determines the distinct enzymatic selectivity of SPY remains unknown. Here we report the cryo-electron microscopy (cryo-EM) structure of SPY and its complex with GDP-fucose, revealing distinct active-site features enabling GDP-fucose instead of UDP-GlcNAc binding. SPY forms an antiparallel dimer instead of the X-shaped dimer in human OGT, and its catalytic domain interconverts among multiple conformations. Analysis of mass spectrometry, co-IP, fucosylation activity, and cryo-EM data further demonstrates that the N-terminal disordered peptide in SPY contains trans auto-fucosylation sites and inhibits the POFUT activity, whereas TPRs 1-5 dynamically regulate SPY activity by interfering with protein substrate binding.
履歴
登録2022年7月25日-
ヘッダ(付随情報) 公開2023年6月7日-
マップ公開2023年6月7日-
更新2023年6月7日-
現状2023年6月7日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_27702.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_27702.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.08 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.5
最小 - 最大-4.0240483 - 5.6682625
平均 (標準偏差)-0.00022347429 (±0.041557744)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ320320320
Spacing320320320
セルA=B=C: 345.6 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_27702_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_27702_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_27702_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : SPY GPD-complex

全体名称: SPY GPD-complex
要素
  • 細胞: SPY GPD-complex

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超分子 #1: SPY GPD-complex

超分子名称: SPY GPD-complex / タイプ: cell / ID: 1 / 親要素: 0
由来(天然)生物種: Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ)

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.8 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度式名称
25.0 mMC8H18N2O4SHEPES
150.0 mMNaCl塩化ナトリウムSodium chloride塩化ナトリウム
2.0 mMC8H18N2O4S1,4-dithiothreitol
グリッドモデル: C-flat-1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: GOLD / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 40 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 289.15 K / 装置: LEICA EM GP

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.8 µm / 倍率（公称値）: 81000
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 平均電子線量: 52.4 e/Å2
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: NONE
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 182947
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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