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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-14621 | ||||||||||||
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タイトル | Map_spike_protein_SARSCoV2 | ||||||||||||
マップデータ | Map_spike_protein_SARSCoV2 | ||||||||||||
試料 |
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キーワード | Spike SARS-CoV2 / glycans (糖鎖) / cryo-EM (低温電子顕微鏡法) / VIRAL PROTEIN (ウイルスタンパク質) | ||||||||||||
生物種 | Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARSコロナウイルス2) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.1 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Abrescia NGA / Stagnoli AS / Connell SR / Jimenez-Oses G | ||||||||||||
資金援助 | スペイン, 3件
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引用 | ジャーナル: Front Microbiol / 年: 2022 タイトル: Assessing the Mobility of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 Spike Protein Glycans by Structural and Computational Methods. 著者: Soledad Stagnoli / Francesca Peccati / Sean R Connell / Ane Martinez-Castillo / Diego Charro / Oscar Millet / Chiara Bruzzone / Asis Palazon / Ana Ardá / Jesús Jiménez-Barbero / June ...著者: Soledad Stagnoli / Francesca Peccati / Sean R Connell / Ane Martinez-Castillo / Diego Charro / Oscar Millet / Chiara Bruzzone / Asis Palazon / Ana Ardá / Jesús Jiménez-Barbero / June Ereño-Orbea / Nicola G A Abrescia / Gonzalo Jiménez-Osés / 要旨: Two years after its emergence, the coronavirus disease-2019 (COVID-19) pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2) remains difficult to control despite the ...Two years after its emergence, the coronavirus disease-2019 (COVID-19) pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2) remains difficult to control despite the availability of several vaccines. The extensively glycosylated SARS-CoV-2 spike (S) protein, which mediates host cell entry by binding to the angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) through its receptor binding domain (RBD), is the major target of neutralizing antibodies. Like to many other viral fusion proteins, the SARS-CoV-2 spike protein utilizes a glycan shield to thwart the host immune response. To grasp the influence of chemical signatures on carbohydrate mobility and reconcile the cryo-EM density of specific glycans we combined our cryo-EM map of the S ectodomain to 4.1 Å resolution, reconstructed from a limited number of particles, and all-atom molecular dynamics simulations. Chemical modifications modeled on representative glycans (defucosylation, sialylation and addition of terminal LacNAc units) show no significant influence on either protein shielding or glycan flexibility. By estimating at selected sites the local correlation between the full density map and atomic model-based maps derived from molecular dynamics simulations, we provide insight into the geometries of the α-Man-(1→3)-[α-Man-(1→6)-]-β-Man-(1→4)-β-GlcNAc(1→4)-β-GlcNAc core common to all -glycosylation sites. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_14621.map.gz | 25.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-14621-v30.xml emd-14621.xml | 19.7 KB 19.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_14621.png | 184.1 KB | ||
マスクデータ | emd_14621_msk_1.map | 27 MB | マスクマップ | |
Filedesc metadata | emd-14621.cif.gz | 6.4 KB | ||
その他 | emd_14621_half_map_1.map.gz emd_14621_half_map_2.map.gz | 25.1 MB 25.1 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-14621 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-14621 | HTTPS FTP |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_14621.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 27 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||
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注釈 | Map_spike_protein_SARSCoV2 | ||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.66 Å | ||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_14621_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half A Map spike protein SARSCoV2
ファイル | emd_14621_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | half_A_Map_spike_protein_SARSCoV2 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half B Map spike protein SARSCoV2
ファイル | emd_14621_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | half_B_Map_spike_protein_SARSCoV2 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2
全体 | 名称: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARSコロナウイルス2) |
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要素 |
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-超分子 #1: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2
超分子 | 名称: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all 詳細: the ectodomain of the Spike protein was expressed by transient transfection of HEK293F suspension cells and purified according to described protocols. |
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由来(天然) | 生物種: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARSコロナウイルス2) |
分子量 | 理論値: 486 KDa |
-分子 #1: SARS-Cov-2 SPIKE PROTEIN
分子 | 名称: SARS-Cov-2 SPIKE PROTEIN / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 詳細: Vector pCAGGS / 光学異性体: DEXTRO |
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由来(天然) | 生物種: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARSコロナウイルス2) |
組換発現 | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
配列 | 文字列: MFMPSSFSYS SWATCWLLCC LIILAKATMF VFLVLLPLVS SQCVNLTTRT QLPPAYTNSF TRGVYYPDKV FRSSVLHSTQ DLFLPFFSNV TWFHAIHVSG TNGTKRFDNP VLPFNDGVYF ASTEKSNIIR GWIFGTTLDS KTQSLLIVNN ATNVVIKVCE FQFCNDPFLG ...文字列: MFMPSSFSYS SWATCWLLCC LIILAKATMF VFLVLLPLVS SQCVNLTTRT QLPPAYTNSF TRGVYYPDKV FRSSVLHSTQ DLFLPFFSNV TWFHAIHVSG TNGTKRFDNP VLPFNDGVYF ASTEKSNIIR GWIFGTTLDS KTQSLLIVNN ATNVVIKVCE FQFCNDPFLG VYYHKNNKSW MESEFRVYSS ANNCTFEYVS QPFLMDLEGK QGNFKNLREF VFKNIDGYFK IYSKHTPINL VRDLPQGFSA LEPLVDLPIG INITRFQTLL ALHRSYLTPG DSSSGWTAGA AAYYVGYLQP RTFLLKYNEN GTITDAVDCA LDPLSETKCT LKSFTVEKGI YQTSNFRVQP TESIVRFPNI TNLCPFGEVF NATRFASVYA WNRKRISNCV ADYSVLYNSA SFSTFKCYGV SPTKLNDLCF TNVYADSFVI RGDEVRQIAP GQTGKIADYN YKLPDDFTGC VIAWNSNNLD SKVGGNYNYL YRLFRKSNLK PFERDISTEI YQAGSTPCNG VEGFNCYFPL QSYGFQPTNG VGYQPYRVVV LSFELLHAPA TVCGPKKSTN LVKNKCVNFN FNGLTGTGVL TESNKKFLPF QQFGRDIADT TDAVRDPQTL EILDITPCSF GGVSVITPGT NTSNQVAVLY QDVNCTEVPV AIHADQLTPT WRVYSTGSNV FQTRAGCLIG AEHVNNSYEC DIPIGAGICA SYQTQTNSPA SVASQSIIAY TMSLGAENSV AYSNNSIAIP TNFTISVTTE ILPVSMTKTS VDCTMYICGD STECSNLLLQ YGSFCTQLNR ALTGIAVEQD KNTQEVFAQV KQIYKTPPIK DFGGFNFSQI LPDPSKPSKR SFIEDLLFNK VTLADAGFIK QYGDCLGDIA ARDLICAQKF NGLTVLPPLL TDEMIAQYTS ALLAGTITSG WTFGAGAALQ IPFAMQMAYR FNGIGVTQNV LYENQKLIAN QFNSAIGKIQ DSLSSTASAL GKLQDVVNQN AQALNTLVKQ LSSNFGAISS VLNDILSRLD PPEAEVQIDR LITGRLQSLQ TYVTQQLIRA AEIRASANLA ATKMSECVLG QSKRVDFCGK GYHLMSFPQS APHGVVFLHV TYVPAQEKNF TTAPAICHDG KAHFPREGVF VSNGTHWFVT QRNFYEPQII TTDNTFVSGN CDVVIGIVNN TVYDPLQPEL DSFKEELDKY FKNHTSPDVD LGDISGINAS VVNIQKEIDR LNEVAKNLNE SLIDLQELGK YEQYIKWPSG RLVPRGSPGS GYIPEAPRDG QAYVRKDGEW VLLSTFLGHH HHHH |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.06 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 8 構成要素:
詳細: buffer was filtered before use to avoid microbial contamination | |||||||||
グリッド | モデル: C-flat-1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 37 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.0002 kPa / 詳細: 8 mA | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 287.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK III | |||||||||
詳細 | The protein was expressed by transient transfection of HEK293F suspension cells and purified seven days post-transfection |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | TFS KRIOS |
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電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2.7 mm 最大 デフォーカス(公称値): 2.3000000000000003 µm 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm / 倍率(公称値): 105000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
撮影 | #0 - Image recording ID: 1 #0 - フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) #0 - 実像数: 12478 / #0 - 平均露光時間: 1.24 sec. / #0 - 平均電子線量: 49.6 e/Å2 / #1 - Image recording ID: 2 #1 - フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) #1 - 実像数: 9264 / #1 - 平均露光時間: 1.04 sec. / #1 - 平均電子線量: 52.0 e/Å2 |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: OTHER / 詳細: the novo 3D model regeneration by SGD in Relion |
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初期 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.01) |
最終 3次元分類 | クラス数: 2 / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC |
最終 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC |
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C3 (3回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.1 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC / 使用した粒子像数: 22854 |
Image recording ID | 1 |
-原子モデル構築 1
初期モデル | PDB ID: Chain - Source name: PDB / Chain - Initial model type: experimental model |
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精密化 | 空間: REAL / プロトコル: OTHER |