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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7nfe | ||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of NHEJ super-complex (monomer) | ||||||
要素 |
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キーワード | DNA BINDING PROTEIN (DNA結合タンパク質) / NHEJ (非相同末端結合) / DNA-PKcs (DNA依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニット) / Ku70/80 / XLF / XRCC4 (XRCC4) / DNA-LigaseIV | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 DNA ligation involved in DNA recombination / FHA domain binding / positive regulation of chromosome organization / positive regulation of ligase activity / DNA ligase IV complex / DNA ligation involved in DNA repair / DNA ligase activity / Ku70:Ku80 complex / DN2 thymocyte differentiation / negative regulation of t-circle formation ...DNA ligation involved in DNA recombination / FHA domain binding / positive regulation of chromosome organization / positive regulation of ligase activity / DNA ligase IV complex / DNA ligation involved in DNA repair / DNA ligase activity / Ku70:Ku80 complex / DN2 thymocyte differentiation / negative regulation of t-circle formation / positive regulation of platelet formation / DNA end binding / DNAリガーゼ / T cell receptor V(D)J recombination / pro-B cell differentiation / small-subunit processome assembly / positive regulation of lymphocyte differentiation / DNA ligase (ATP) activity / DNA-dependent protein kinase activity / histone H2AXS139 kinase activity / DNA-dependent protein kinase complex / immature B cell differentiation / DNA-dependent protein kinase-DNA ligase 4 complex / single strand break repair / nucleotide-excision repair, DNA gap filling / cellular response to X-ray / immunoglobulin V(D)J recombination / nonhomologous end joining complex / protein localization to site of double-strand break / nuclear telomere cap complex / DNA ligation / regulation of smooth muscle cell proliferation / V(D)J遺伝子再構成 / Cytosolic sensors of pathogen-associated DNA / double-strand break repair via alternative nonhomologous end joining / double-strand break repair via classical nonhomologous end joining / クラススイッチ / regulation of epithelial cell proliferation / IRF3-mediated induction of type I IFN / telomere capping / 相同組換え / regulation of telomere maintenance / regulation of hematopoietic stem cell differentiation / U3 snoRNA binding / positive regulation of neurogenesis / protein localization to chromosome, telomeric region / cellular response to fatty acid / hematopoietic stem cell proliferation / cellular hyperosmotic salinity response / maturation of 5.8S rRNA / response to ionizing radiation / T cell lineage commitment / telomeric DNA binding / negative regulation of cGAS/STING signaling pathway / DNA biosynthetic process / B cell lineage commitment / positive regulation of catalytic activity / cellular response to lithium ion / 2-LTR circle formation / positive regulation of double-strand break repair via nonhomologous end joining / site of DNA damage / somatic stem cell population maintenance / ligase activity / 付加脱離酵素(リアーゼ); 炭素-酸素リアーゼ類; その他の炭素-酸素リアーゼ / T cell differentiation / enzyme activator activity / response to X-ray / 5'-deoxyribose-5-phosphate lyase activity / chromosome organization / hematopoietic stem cell differentiation / positive regulation of protein kinase activity / ectopic germ cell programmed cell death / ATP-dependent activity, acting on DNA / somitogenesis / SUMOylation of DNA damage response and repair proteins / DNA polymerase binding / condensed chromosome / positive regulation of telomerase activity / mitotic G1 DNA damage checkpoint signaling / positive regulation of telomere maintenance via telomerase / DNA helicase activity / telomere maintenance / activation of innate immune response / 神経発生 / cellular response to leukemia inhibitory factor / cyclin binding / small-subunit processome / B cell differentiation / positive regulation of translation / positive regulation of erythrocyte differentiation / negative regulation of protein phosphorylation / central nervous system development / stem cell proliferation / cellular response to ionizing radiation / デオキシリボ核酸 / response to gamma radiation / Nonhomologous End-Joining (NHEJ) / peptidyl-threonine phosphorylation / brain development / 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.29 Å | ||||||
データ登録者 | Chaplin, A.K. / Hardwick, S.W. / Kefala Stavridi, A. / Chirgadze, D.Y. / Blundell, T.L. | ||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2021 タイトル: Cryo-EM of NHEJ supercomplexes provides insights into DNA repair. 著者: Amanda K Chaplin / Steven W Hardwick / Antonia Kefala Stavridi / Christopher J Buehl / Noah J Goff / Virginie Ropars / Shikang Liang / Taiana Maia De Oliveira / Dimitri Y Chirgadze / Katheryn ...著者: Amanda K Chaplin / Steven W Hardwick / Antonia Kefala Stavridi / Christopher J Buehl / Noah J Goff / Virginie Ropars / Shikang Liang / Taiana Maia De Oliveira / Dimitri Y Chirgadze / Katheryn Meek / Jean-Baptiste Charbonnier / Tom L Blundell / 要旨: Non-homologous end joining (NHEJ) is one of two critical mechanisms utilized in humans to repair DNA double-strand breaks (DSBs). Unrepaired or incorrect repair of DSBs can lead to apoptosis or ...Non-homologous end joining (NHEJ) is one of two critical mechanisms utilized in humans to repair DNA double-strand breaks (DSBs). Unrepaired or incorrect repair of DSBs can lead to apoptosis or cancer. NHEJ involves several proteins, including the Ku70/80 heterodimer, DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs), X-ray cross-complementing protein 4 (XRCC4), XRCC4-like factor (XLF), and ligase IV. These core proteins bind DSBs and ligate the damaged DNA ends. However, details of the structural assembly of these proteins remain unclear. Here, we present cryo-EM structures of NHEJ supercomplexes that are composed of these core proteins and DNA, revealing the detailed structural architecture of this assembly. We describe monomeric and dimeric forms of this supercomplex and also propose the existence of alternate dimeric forms of long-range synaptic complexes. Finally, we show that mutational disruption of several structural features within these NHEJ complexes negatively affects DNA repair. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 7nfe.cif.gz | 1 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb7nfe.ent.gz | 821.9 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 7nfe.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/nf/7nfe ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/nf/7nfe | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-タンパク質 , 4種, 6分子 AFGHIJ
#1: タンパク質 | 分子量: 472056.281 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HELA 参照: UniProt: P78527, non-specific serine/threonine protein kinase | ||||
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#4: タンパク質 | 分子量: 33372.234 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: NHEJ1, XLF / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9H9Q4 #5: タンパク質 | 分子量: 38337.703 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: XRCC4 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q13426 #6: タンパク質 | | 分子量: 104124.953 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: LIG4 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P49917, DNAリガーゼ |
-X-ray repair cross-complementing protein ... , 2種, 2分子 BC
#2: タンパク質 | 分子量: 69945.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: XRCC6, G22P1 発現宿主: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) 参照: UniProt: P12956, 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与, 付加脱離酵素(リアーゼ); 炭素- ...参照: UniProt: P12956, 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与, 付加脱離酵素(リアーゼ); 炭素-酸素リアーゼ類; その他の炭素-酸素リアーゼ |
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#3: タンパク質 | 分子量: 82812.438 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: XRCC5, G22P2 発現宿主: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) 参照: UniProt: P13010, 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与 |
-DNA鎖 , 2種, 2分子 DE
#7: DNA鎖 | 分子量: 7367.843 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Homo sapiens (ヒト) |
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#8: DNA鎖 | 分子量: 7402.821 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Homo sapiens (ヒト) |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 |
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分子量 | 値: 0.8 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
由来(天然) |
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由来(組換発現) |
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緩衝液 | pH: 7.4 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
試料 | 濃度: 3 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 130000 X / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 1.3 sec. / 電子線照射量: 46.8 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) |
-解析
ソフトウェア |
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 749185 | ||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 4.29 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 45943 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||
精密化 | 交差検証法: NONE 立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2 | ||||||||||||||||||||||||
原子変位パラメータ | Biso mean: 358.24 Å2 | ||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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