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万見
- EMDB-23513: LigIV catalytic domain and distal Ku in the NHEJ Short-range syna... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-23513
タイトルLigIV catalytic domain and distal Ku in the NHEJ Short-range synaptic complex
マップデータLigIV catalytic domain and distal Ku in the NHEJ Short-range synaptic complex
試料
  • 複合体: LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex
    • タンパク質・ペプチド: XRCC6_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 6
    • タンパク質・ペプチド: XRCC5_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 5
    • タンパク質・ペプチド: DNLI4_HUMAN DNA ligase 4
    • DNA: DNA (26-MER)
    • DNA: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')
    • DNA: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.8 Å
データ登録者He Y / Chen S
資金援助 米国, 6件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01GM135651 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)5T32GM008382 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)U24GM129547 米国
American Cancer SocietyIRG-15-173-2 米国
National Institutes of Health/National Cancer Institute (NIH/NCI)P01CA092584 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01GM047251 米国
引用ジャーナル: Nature / 年: 2021
タイトル: Structural basis of long-range to short-range synaptic transition in NHEJ.
著者: Siyu Chen / Linda Lee / Tasmin Naila / Susan Fishbain / Annie Wang / Alan E Tomkinson / Susan P Lees-Miller / Yuan He /
要旨: DNA double-strand breaks (DSBs) are a highly cytotoxic form of DNA damage and the incorrect repair of DSBs is linked to carcinogenesis. The conserved error-prone non-homologous end joining (NHEJ) ...DNA double-strand breaks (DSBs) are a highly cytotoxic form of DNA damage and the incorrect repair of DSBs is linked to carcinogenesis. The conserved error-prone non-homologous end joining (NHEJ) pathway has a key role in determining the effects of DSB-inducing agents that are used to treat cancer as well as the generation of the diversity in antibodies and T cell receptors. Here we applied single-particle cryo-electron microscopy to visualize two key DNA-protein complexes that are formed by human NHEJ factors. The Ku70/80 heterodimer (Ku), the catalytic subunit of the DNA-dependent protein kinase (DNA-PKcs), DNA ligase IV (LigIV), XRCC4 and XLF form a long-range synaptic complex, in which the DNA ends are held approximately 115 Å apart. Two DNA end-bound subcomplexes comprising Ku and DNA-PKcs are linked by interactions between the DNA-PKcs subunits and a scaffold comprising LigIV, XRCC4, XLF, XRCC4 and LigIV. The relative orientation of the DNA-PKcs molecules suggests a mechanism for autophosphorylation in trans, which leads to the dissociation of DNA-PKcs and the transition into the short-range synaptic complex. Within this complex, the Ku-bound DNA ends are aligned for processing and ligation by the XLF-anchored scaffold, and a single catalytic domain of LigIV is stably associated with a nick between the two Ku molecules, which suggests that the joining of both strands of a DSB involves both LigIV molecules.
履歴
登録2021年2月19日-
ヘッダ(付随情報) 公開2021年5月5日-
マップ公開2021年5月5日-
更新2021年5月26日-
現状2021年5月26日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.03
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.03
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_23513.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_23513.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 27 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈LigIV catalytic domain and distal Ku in the NHEJ Short-range synaptic complex
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.66 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.03 / ムービー #1: 0.03
最小 - 最大-0.0067062587 - 1.5194927
平均 (標準偏差)0.0012592822 (±0.019657388)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin-96-96-96
サイズ192192192
Spacing192192192
セルA=B=C: 318.72 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.661.661.66
M x/y/z192192192
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z318.720318.720318.720
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ000
NX/NY/NZ360360360
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS-96-96-96
NC/NR/NS192192192
D min/max/mean-0.0071.5190.001

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex

全体名称: LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex
要素
  • 複合体: LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex
    • タンパク質・ペプチド: XRCC6_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 6
    • タンパク質・ペプチド: XRCC5_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 5
    • タンパク質・ペプチド: DNLI4_HUMAN DNA ligase 4
    • DNA: DNA (26-MER)
    • DNA: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')
    • DNA: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')

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超分子 #1: LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex

超分子名称: LigIV cata. and distal Ku in NHEJ Short-range synaptic complex
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all / 詳細: LigIV catalytic domain, Ku
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
分子量理論値: 220 KDa

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分子 #1: XRCC6_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 6

分子名称: XRCC6_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 6
タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: unidentified baculovirus (ウイルス)
配列文字列: MSGWESYYKT EGDEEAEEEQ EENLEASGDY KYSGRDSLIF LVDASKAMFE SQSEDELTPF DMSIQCIQSV YISKIISSDR DLLAVVFYG TEKDKNSVNF KNIYVLQELD NPGAKRILEL DQFKGQQGQK RFQDMMGHGS DYSLSEVLWV CANLFSDVQF K MSHKRIML ...文字列:
MSGWESYYKT EGDEEAEEEQ EENLEASGDY KYSGRDSLIF LVDASKAMFE SQSEDELTPF DMSIQCIQSV YISKIISSDR DLLAVVFYG TEKDKNSVNF KNIYVLQELD NPGAKRILEL DQFKGQQGQK RFQDMMGHGS DYSLSEVLWV CANLFSDVQF K MSHKRIML FTNEDNPHGN DSAKASRART KAGDLRDTGI FLDLMHLKKP GGFDISLFYR DIISIAEDED LRVHFEESSK LE DLLRKVR AKETRKRALS RLKLKLNKDI VISVGIYNLV QKALKPPPIK LYRETNEPVK TKTRTFNTST GGLLLPSDTK RSQ IYGSRQ IILEKEETEE LKRFDDPGLM LMGFKPLVLL KKHHYLRPSL FVYPEESLVI GSSTLFSALL IKCLEKEVAA LCRY TPRRN IPPYFVALVP QEEELDDQKI QVTPPGFQLV FLPFADDKRK MPFTEKIMAT PEQVGKMKAI VEKLRFTYRS DSFEN PVLQ QHFRNLEALA LDLMEPEQAV DLTLPKVEAM NKRLGSLVDE FKELVYPPDY NPEGKVTKRK HDNEGSGSKR PKVEYS EEE LKTHISKGTL GKFTVPMLKE ACRAYGLKSG LKKQELL

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分子 #2: XRCC5_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 5

分子名称: XRCC5_HUMAN X-ray repair cross-complementing protein 5
タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: unidentified baculovirus (ウイルス)
配列文字列: MVRSGNKAAV VLCMDVGFTM SNSIPGIESP FEQAKKVITM FVQRQVFAEN KDEIALVLFG TDGTDNPLSG GDQYQNITVH RHLMLPDFD LLEDIESKIQ PGSQQADFLD ALIVSMDVIQ HETIGKKFEK RHIEIFTDLS SRFSKSQLDI IIHSLKKCDI S LQFFLPFS ...文字列:
MVRSGNKAAV VLCMDVGFTM SNSIPGIESP FEQAKKVITM FVQRQVFAEN KDEIALVLFG TDGTDNPLSG GDQYQNITVH RHLMLPDFD LLEDIESKIQ PGSQQADFLD ALIVSMDVIQ HETIGKKFEK RHIEIFTDLS SRFSKSQLDI IIHSLKKCDI S LQFFLPFS LGKEDGSGDR GDGPFRLGGH GPSFPLKGIT EQQKEGLEIV KMVMISLEGE DGLDEIYSFS ESLRKLCVFK KI ERHSIHW PCRLTIGSNL SIRIAAYKSI LQERVKKTWT VVDAKTLKKE DIQKETVYCL NDDDETEVLK EDIIQGFRYG SDI VPFSKV DEEQMKYKSE GKCFSVLGFC KSSQVQRRFF MGNQVLKVFA ARDDEAAAVA LSSLIHALDD LDMVAIVRYA YDKR ANPQV GVAFPHIKHN YECLVYVQLP FMEDLRQYMF SSLKNSKKYA PTEAQLNAVD ALIDSMSLAK KDEKTDTLED LFPTT KIPN PRFQRLFQCL LHRALHPREP LPPIQQHIWN MLNPPAEVTT KSQIPLSKIK TLFPLIEAKK KDQVTAQEIF QDNHED GPT AKKLKTEQGG AHFSVSSLAE GSVTSVGSVN PAENFRVLVK QKKASFEEAS NQLINHIEQF LDTNETPYFM KSIDCIR AF REEAIKFSEE QRFNNFLKAL QEKVEIKQLN HFWEIVVQDG ITLITKEEAS GSSVTAEEAK KFLAPKDKPS GDTAAVFE E GGDVDDLLDM I

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分子 #3: DNLI4_HUMAN DNA ligase 4

分子名称: DNLI4_HUMAN DNA ligase 4 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: unidentified baculovirus (ウイルス)
配列文字列: MAASQTSQTV ASHVPFADLC STLERIQKSK GRAEKIRHFR EFLDSWRKFH DALHKNHKDV TDSFYPAMRL ILPQLERERM AYGIKETML AKLYIELLNL PRDGKDALKL LNYRTPTGTH GDAGDFAMIA YFVLKPRCLQ KGSLTIQQVN DLLDSIASNN S AKRKDLIK ...文字列:
MAASQTSQTV ASHVPFADLC STLERIQKSK GRAEKIRHFR EFLDSWRKFH DALHKNHKDV TDSFYPAMRL ILPQLERERM AYGIKETML AKLYIELLNL PRDGKDALKL LNYRTPTGTH GDAGDFAMIA YFVLKPRCLQ KGSLTIQQVN DLLDSIASNN S AKRKDLIK KSLLQLITQS SALEQKWLIR MIIKDLKLGV SQQTIFSVFH NDAAELHNVT TDLEKVCRQL HDPSVGLSDI SI TLFSAFK PMLAAIADIE HIEKDMKHQS FYIETKLDGE RMQMHKDGDV YKYFSRNGYN YTDQFGASPT EGSLTPFIHN AFK ADIQIC ILDGEMMAYN PNTQTFMQKG TKFDIKRMVE DSDLQTCYCV FDVLMVNNKK LGHETLRKRY EILSSIFTPI PGRI EIVQK TQAHTKNEVI DALNEAIDKR EEGIMVKQPL SIYKPDKRGE GWLKIKPEYV SGLMDELDIL IVGGYWGKGS RGGMM SHFL CAVAEKPPPG EKPSVFHTLS RVGSGCTMKE LYDLGLKLAK YWKPFHRKAP PSSILCGTEK PEVYIEPCNS VIVQIK AAE IVPSDMYKTG CTLRFPRIEK IRDDKEWHEC MTLDDLEQLR GKASGKLASK HLYIGGDDEP QEKKRKAAPK MKKVIGI IE HLKAPNLTNV NKI

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分子 #4: DNA (26-MER)

分子名称: DNA (26-MER) / タイプ: dna / ID: 4 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
配列文字列:
(DT)(DA)(DT)(DA)(DT)(DA)(DC)(DT)(DA)(DA) (DG)(DA)(DA)(DC)(DT)(DT)(DC)(DT)(DG)(DA) (DC)(DT)(DG)(DT)(DT)(DC)

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分子 #5: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')

分子名称: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')
タイプ: dna / ID: 5 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
配列文字列:
(DG)(DT)(DT)(DC)(DT)(DT)(DA)(DG)(DT)(DA) (DT)(DA)(DT)(DA)

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分子 #6: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')

分子名称: DNA (5'-D(P*GP*TP*TP*CP*TP*TP*AP*GP*TP*AP*TP*AP*TP*A)-3')
タイプ: dna / ID: 6 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
配列文字列:
(DC)(DA)(DA)(DT)(DG)(DA)(DA)(DA)(DC)(DG) (DG)(DA)(DA)(DC)(DA)(DG)(DT)(DC)(DA)(DG)

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.9
構成要素:
濃度名称式
10.0 mMHEPES
50.0 mMPotassium chlorideKCl
10.0 mMMagnesium chlorideMgCl2
2.5 %glycerolグリセリン
1.0 mMDTT
0.05 %NP-40
グリッドモデル: Quantifoil R3.5/1 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: GRAPHENE OXIDE / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 支持フィルム - Film thickness: 200.0 nm / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 101.325 kPa
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: DARK FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 4.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.5 µm / 倍率（公称値）: 30000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / デジタル化 - サイズ - 横: 11520 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 8184 pixel / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 32723 / 平均露光時間: 0.0426 sec. / 平均電子線量: 46.0 e/Å2
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 1766936
CTF補正ソフトウェア: (名称: Gctf, CTFFIND)
初期モデルモデルのタイプ: INSILICO MODEL
In silico モデル: Negative staining map reconstructed ab-initio from CryoSPARC
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア: (名称: EMAN, cryoSPARC)
最終 3次元分類クラス数: 3 / 平均メンバー数/クラス: 60000 / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1)
最終 再構成使用したクラス数: 1 / 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.1) / 使用した粒子像数: 54793
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 当てはまり具合の基準: Correlation coefficient

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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